非病毒基因载体聚酰胺-胺型树枝状大分子-透明质酸聚合物体外细胞毒性

胡海梅，李晓琳，梁双红（广东药学院生命科学与生物制药学院，广东广州 510006）

非病毒基因载体聚酰胺-胺型树枝状大分子-透明质酸聚合物体外细胞毒性

胡海梅，李晓琳，梁双红
（广东药学院生命科学与生物制药学院，广东广州 510006）

目的 研究非病毒基因载体聚酰胺-胺型树枝状大分子（PAMAM）-透明质酸（HA）聚合物的体外细胞毒性。方法 采用MTT法和流式细胞术，分别检测合成的多种PAMAM-HA聚合物对HeLa细胞、Bel-7402细胞和HepG2细胞的细胞毒性及其诱导细胞凋亡的能力。结果PAMAM-HA聚合物的细胞毒性随浓度（50～800 mg·L-1）增加、作用时间（24～72 h）延长、PAMAM的代数（G4，G5）增加及HA的相对分子质量（3850和17 200）和接枝密度（5%～25%）降低而增加。与聚合物PAMAM G4-HA3850-5%和PAMAM G5-HA3850-5%孵育24 h，肝癌细胞Bel-7402细胞凋亡率分别为4.5%和9.9%。聚合物与DNA形成的复合物PAMAM G4-HA3850-5%/DNA和PAMAM G5-HA3850-5%/DNA与细胞共孵育24 h后，细胞存活率均在80%以上，较PAMAM G4/DNA和PAMAM G5/DNA毒性降低（P＜0.05）。结论 经不同接枝量和接枝密度HA修饰的PAMAM细胞毒性降低，是一种较有前途的非病毒基因载体。

聚酰胺-胺型树枝状大分子；透明质酸；细胞毒性；肿瘤细胞；细胞凋亡

DOl:10.3867/j.issn.1000-3002.2016.03.009

非病毒载体主要有阳离子聚合物、阳离子多肽和阳离子脂质体等［1-4］，是基因载体的最新发展和重要补充，具有包封率高、免疫原性低、安全性好、靶向性强、可批量生产和易于进行结构修饰等优点，已成为基因治疗研究的热点［5-6］。聚酰胺-胺型树枝状大分子（polyamide amine dendrimers，PAMAM）由Tomalia等［7］成功合成后，关于PAMAM作为非病毒载体的研究才逐步展开。PAMAM表面带正电荷的氨基基团可与带负电的DNA相互作用形成复合物，保护DNA免受核酸酶降解［8-10］，作为药物载体和基因载体具有较高的稳定性和生物兼容性以及无免疫原性和使用剂量下低细胞毒性等优势［11-13］。但PAMAM表面具有大量带正电荷的氨基，易与带负电荷的细胞膜静电相互作用致使细胞凋亡［14-16］，具有一定的细胞毒性，并且随其代数的增加而增加。因此，对PAMAM末端基团进行表面修饰，减少其表面正电荷数目，可以降低其细胞毒性［17-18］。透明质酸（hyaluronic acid，HA），作为天然水溶性高分子，具有多种适宜作为药物载体的优良特性，如生物相容性，非免疫原性，且有很强的生物活性及在体内可由酶作用而天然降解等，同时又具有一定的靶向性。实验表明，发生转移的癌细胞与HA的相互结合作用有所增强，正是由于恶性瘤细胞表面一些变异型CD44（如CD44v6等）过表达造成的［19］。HA与其特异性受体CD44之间的相互作用可以作为HA靶向治疗癌症的研究基础［20］，因为各种癌细胞表面几乎都表达HA受体CD44分子，这种受体能够牢固连接HA［21］。据报道，HA可以起聚乙二醇的作用，延长目的基因的表达时间，达到缓释效果［22］。因此，本研究选择具有肿瘤靶向能力的HA偶联PAMAM载体，用MTT法测定含有不同接枝量（HA3850，HA17200，相对分子质量为3850和17 200）的HA和接枝密度（5%，15%和25%，PAMAM上5%，15%和25%的氨基与HA相连）的多种PAMAM-HA聚合物对不同细胞的细胞毒性，并观察其诱导细胞凋亡的能力。

1　材料与方法

1.1试剂和仪器

第4代和第5代PAMAM（PAMAM G4和PAMAM G5），HA和MTT（美国Sigma公司）；四硼酸钠（天津福晨化学试剂厂）；氯化钠（国药集团化学试剂有限公司）；氰硼氢化钠（NaBH3CN，阿拉丁公司）；胎牛血清（美国Hyclone公司）；RPMI 1640培养基（美国Gibco公司）；二甲亚砜（DMSO，天津百世化工有限公司）；流式细胞凋亡试剂盒（碧云天生物技术研究所）；胰酶（美国Invitrogen公司）；增强型绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1（本实验室保存）。磁力搅拌器（上海司乐仪器有限公司）；冷冻干燥机（北京松源华兴科技发展有限公司）；再生纤维素透析袋（美国，西安罗森博科技有限公司代理）；傅里叶变换红外光谱-红外显微镜联用仪，400 MHz核磁超导核磁共振谱仪（德国Bruker公司）。

1.2细胞

人宫颈癌细胞HeLa细胞、人肝癌细胞Bel-7402细胞和人肝癌细胞HepG2细胞，均在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养，37℃，5%CO2的培养箱中生长。HeLa细胞、Bel-7402细胞和HepG2细胞24～48 h传代。各细胞均由广东药学院生命科学与生物制药学院保存并提供。

1.3PAMAM-HA的合成

称取PAMAM G4和PAMAM G5 0.0035 mmol溶于50 mL 0.1 mol·L-1四硼酸钠和0.4 mol·L-1氯化钠溶液中搅拌至完全溶解，加入适量HA，40℃下搅拌至HA完全溶解，称取氰硼氢化钠适量加入上述反应液中，继续于40℃下搅拌反应约3 d。将反应液装入透析袋（截留相对分子质量20 000），透析约3 d，冷冻干燥机中冻干，得不同代数与不同接枝量的PAMAM-HA（图1）；样品的化学结构由红外与核磁共振谱测定并计算HA的接枝量。

1.4聚合物对不同细胞的细胞毒性测定

将HeLa细胞、Bel-7402细胞和HepG2细胞接种于96孔板中，调整细胞密度为7.5×106L-1，20～24 h后进行实验。各PAMAM-HA聚合物母液（800 mg·L-1）用无血清RPMI 1640培养液调整至下列质量浓度梯度：50，100，200，300，500和800 mg·L-1，以不同浓度的聚合物溶液100 μL替换旧的完全培养液，阴性对照组用新鲜无血清RPMI 1640培养液替换，各样品各浓度设4复孔。37℃，5%CO2的培养箱培养24 h后，以含10%胎牛血清的培养液替换各孔溶液继续培养。40～48 h后各孔加入5 g·L-1的MTT 20 μL，继续培养4 h，小心吸尽上清，每孔加入DMSO溶液150 μL，振摇15 min使结晶充分溶解，用Bio-Rad酶标仪测定波长490 nm处吸光度（A490 nm）值，取4孔平均值。细胞存活率（%）=实验组A490 nm/细胞对照组A490 nm× 100%。

1.5聚合物不同作用时间细胞毒性测定

将HeLa细胞接种于96孔板中，调整细胞密度为7.5×106L-1，20～24 h后进行实验，实验方法同1.4。分别于24，48和72 h检测细胞存活率。

Fig.1 System of polyamide amine dendrimers（PAMAM）-hyaluronic（HA）.

1.6聚合物/DNA复合物细胞毒性测定

各聚合物/DNA复合物溶液配制：将各聚合物母液（200 mg·L-1）和DNA母液均以无血清的RPMI 1640培养基稀释至40 mg·L-1，按照不同重量比混合，涡旋15 s，静置30 min。将HeLa细胞接种于96孔板中，调整细胞密度为7500×103L-1，20～24 h后进行实验。以25∶1，30∶1，35∶1和40∶1（m/m）的各PAMAM-HA/DNA复合物溶液，3∶1，5∶1，8∶1和10∶1（m/m）的PAMAM G4/DNA和PAMAM G5/DNA复合物溶液各100 μL替换旧的完全培养液，阴性对照组用新鲜无血清RPMI 1640培养液替换。其余方法同1.4。

1.7细胞凋亡率的检测

将Bel-7402细胞接种于6孔板中，调整细胞密度为每孔40×105细胞，每孔2 mL含10%胎牛血清的RPMI 1640完全培养液。各聚合物母液（1000 mg·L-1）以完全培养液稀释至实验浓度，20～24 h后弃去培养液，以不同聚合物溶液2 mL替换，阴性组以2 mL完全培养液替换。24 h后收集细胞，1000×g离心5 min，弃上清，用PBS洗2遍。1000×g离心5 min，弃上清，加入AnnexinⅤ-FITC结合液195 μL轻轻重悬细胞。加入AnnexinⅤ-FITC 5 μL轻轻混匀。室温（20～25℃）避光孵育10 min。1000×g离心5 min，弃上清，加入Annexin Ⅴ-FITC结合液190 μL轻轻重悬细胞。加入PI染色液10 μL轻轻混匀，冰浴避光放置。随即进行流式细胞仪检测，AnnexinⅤ-FITC为绿色荧光，PI为红色荧光。

1.8统计学分析

2　结果

2.1不同聚合物对HeLa细胞的细胞毒性

如图2和图3所示，不同相对分子质量的HA均无细胞毒性，PAMAM各聚合物的细胞毒性均随浓度的增加而增加。聚合物PAMAM G4，PAMAMA G5，PAMAM G4-HA3850-5%和PAMAM G5-HA3850-5%的细胞毒性在浓度达100 mg·L-1后高于其他聚合物（P＜0.05）。聚合物PAMAM G4-HA3850-15%，PAMAM G5-HA3850-15%，PAMAM G4-HA3850-25%，PAMAM G5-HA3850-25%，PAMAM G4-HA17200-5%和PAMAM G5-HA17200-5%的细胞毒性接近，差异不明显，然而在浓度达500 mg·L-1后毒性明显增加。同时可见，PAMAM随着代数的增加而毒性增加，随着接枝量的增加而毒性降低。

Fig.2 Effect of PAMAM G4-HA polymers on viability of HeLa cells.The cells were incubated with polymers for 24 h.，n=4.*P＜0.05，compared with corresponding control （0 mg·L-1）group.

Fig.3 Effect of PAMAM G5-HA polymers on viability of HeLa cells.The cells were incubated with polymers for 24 h.，n=4.*P＜0.05，compared with corresponding control （0 mg·L-1）group.

2.2聚合物在不同细胞系中的细胞毒性

如图4和图5所示，聚合物PAMAM G4-HA3850-5%和PAMAM G5-HA3850-5%无明显的细胞类型依赖性，2种聚合物的细胞毒性均随着浓度的增加而增加（P＜0.05），浓度达到100 mg·L-1以上时细胞存活率低于80%。聚合物PAMAM G5-HA3850-5%的细胞毒性要高于聚合物PAMAM G4-HA3850-5%。

2.3聚合物不同作用时间对HeLa细胞的细胞毒性

如图6和图7所示，聚合物PAMAM G4-HA3850-5%和聚合物PAMAM G5-HA3850-5%的细胞毒性在相同作用时间下，随着聚合物浓度的增加而增加（P＜0.05）；在相同浓度时，细胞毒性随着孵育时间的延长而增加。并且2种聚合物的细胞毒性孵育72 h，浓度＞200 mg·L-1时，毒性明显增加（P＜0.05）。聚合物PAMAM G5-HA3850-5%的细胞毒性要高于聚合物PAMAM G4-HA3850-5%。

Fig.4 Effect of PAMAM G4-HA3850-5%polymer on cell viability in different cells.The cells were incubated with polymers for 24 h.，n=4.*P＜0.05，compared with corresponding control（0 mg·L-1）group.

Fig.5 Effect of PAMAM G5-HA3850-5%polymer on cell viability in different cells.The cells were incubated with polymers for 24 h.，n=4.*P＜0.05，compared with corresponding control（0 mg·L-1）.

Fig.6 Effect of PAMAM G4-HA3850-5%polymer on viability of HeLa cells at different time.The cells were incubated with polymers for 24，48 and 72 h，respectively.，n=4.*P＜0.05，compared with corresponding control（0 mg·L-1）group.

Fig.7 Effect of PAMAM G5-HA3850-5%polymer on viability of HeLa cells at different time.The cells wereincubated with polymers for 24，48 and 72 h，respectively.，n=4.*P＜0.05，compared with corresponding control（0 mg·L-1）group.

Fig.8 Effect of various polyplexes of polymer and DNA with different mass ratios on viability of HeLa cells. The cells were incubated with polyplex for 24 h.，n=4.

2.4聚合物/DNA复合物对HeLa细胞的细胞毒性

通过琼脂糖凝胶电泳实验和细胞转染实验，多种PAMAM-HA聚合物中仅有复合物PAMAM G4-HA3850-5%/DNA和PAMAM G5-HA3850-5%/ DNA可成功实现细胞体外转染（待发表）。因此，考察复合物PAMAMG4-HA3850-5%/DNA和PAMAM G5-HA3850-5%/DNA对细胞存活的影响，并以复合物PAMAM G4/DNA和PAMAM G5/DNA作为对照。如图8所示，聚合物与DNA不同配比的条件下，完全形成复合物的PAMAM G4-HA3850-5%/DNA和PAMAM G5-HA3850-5%/DNA与细胞共孵育24 h后，细胞存活率均在80%以上；复合物PAMAM G4/ DNA和PAMAM G5/DNA与细胞共孵育后，细胞存活率几乎均低于80%，PAMAM G5/DNA复合物细胞存活率下降更多，细胞毒性更大。所以复合物PAMAM G4-HA3850-5%/DNA和PAMAM G5-HA3850-5%/DNA在细胞毒性方面比复合物PAMAM G4/DNA和PAMAM G5/DNA在细胞转染中有可能会更有优势。

2.5聚合物对Bel-7402细胞凋亡率的影响

由图9A1和A2可以看出，聚合物PAMAM G4-HA3850-5%和PAMAM G5-HA3850-5%200 mg·L-1与Bel-7402细胞共孵育24 h仅少量细胞发生凋亡，凋亡率分别为4.5%和9.9%，由图9 B1，B2和C1，C2可以看出，聚合物PAMAM G4-HA3850-15%，PAMAM G5-HA3850-15%，PAMAM G4-HA17200-5%和PAMAM G5-HA17200-5%400 mg·L-1与细胞共孵育24 h几乎未能诱导细胞凋亡。说明上述聚合物细胞毒性较低，不易于诱导细胞凋亡。在转染实验中使用的聚合物浓度为100 mg·L-1，一般不会诱导细胞凋亡。这与聚合物MTT细胞毒性实验结果一致。

Fig.9 Effect of various polymers on apoptosis rate of Bel-7402 cells.Bel-7402 cells were incubated with polymers for 24 h respectively.A1：PAMAM G4-HA3850-5%polymer 200 mg·L-1；A2：PAMAM G5-HA3850-5%polymer 200 mg·L-1；B1：PAMAM G4-HA3850-15%polymer 400 mg·L-1；B2：PAMAM G5-HA3850-15%polymer 400 mg·L-1；C1：PAMAM G4-HA17200-5%polymer 400 mg·L-1；C2：PAMAM G5-HA17200-5%polymer 400 mg·L-1.

3　讨论

基因治疗是通过一定的方法、方式，将外源基因导入目的细胞并使其有效表达，以纠正基因的缺陷或在细胞中发挥作用，从而发挥治疗疾病的作用。目前，基因治疗的载体主要有病毒载体和非病毒载体两大类。但病毒载体存在较严重的安全性问题［2，23］。而非病毒载体具有靶向性、低细胞毒性、较高的安全性以及易于进行结构修饰等优点，已成为基因治疗研究的热点，受到越来越多的关注，对其研究已逐渐深入。PAMAM是非病毒基因载体的典型代表物之一，高代数的PAMAM虽然具有较高的转染效率，但因其表面大量的正电荷而具有较高的细胞毒性，限制了其临床应用的发展。因此，寻找合适的方法修饰高代数PAMAM以降低其细胞毒性并且保持较高的转染效率已成为研究热点。本研究以不同接枝量和接枝密度的HA修饰PAMAM得到多种PAMAM-HA聚合物，观察修饰后聚合物的细胞毒性及诱导细胞发生凋亡。MTT实验结果表明，多种聚合物PAMAM-HA的细胞毒性无明显的细胞依赖性，聚合物PAMAM G4-HA3850-15%，PAMAM G5-HA3850-15%，PAMAM G4-HA3850-25%，PAMAM G5-HA3850-25%，PAMAM G4-HA17200-5%和PAMAM G5-HA17200-5%的细胞毒性很低，仅在浓度高达500 mg·L-1以上时细胞存活率＜80%，说明以此方法修饰PAMAM可以有效的降低PAMAM的细胞毒性。聚合物PAMAM G4-HA3850-5%和PAMAM G5-HA3850-5%的细胞毒性略大于上述几种聚合物，但仍需浓度达100 mg·L-1以上时细胞存活率＜80%，细胞毒性比修饰前降低。同时观察了聚合物PAMAM G4-HA3850-5% 和PAMAM G5-HA3850-5%作用于肿瘤细胞不同时间后的细胞毒性。结果表明，随着浓度增加和细胞孵育时间延长，聚合物的细胞毒性逐渐增大，与细胞孵育72 h时细胞毒性明显增大。本研究同时观察了聚合物与DNA以不同重量比形成复合物后的细胞毒性。结果表明，复合物PAMAM G4-HA3850-5%/DNA和PAMAM G5-HA3850-5%/DNA的细胞毒性要低于复合物PAMAM G4/DNA和PAMAM G5/DNA。通过AnnexinⅤ-FITC/PI双染法考察各聚合物诱导细胞凋亡的作用，发现经不同接枝量和接枝密度修饰后的各聚合物细胞毒性较低，聚合物PAMAM G4-HA3850-15%，PAMAM G5-HA3850-15%，PAMAM G4-HA17200-5%和PAMAM G5-HA17200-5%诱导细胞凋亡率极低，PAMAM G4-HA3850-5%和PAMAM G5-HA3850-5%诱导细胞凋亡率分别为4.5%和9.9%，具有较低的诱导细胞凋亡的能力。

综上，经不同接枝量和接枝密度的HA修饰PAMAM得到的聚合物细胞毒性明显降低，其中聚合物PAMAM G4-HA3850-5%和PAMAM G5-HA3850-5%在与DNA形成复合物后对细胞存活的影响较小，是一种比较有应用前景的非病毒基因载体。

［1］Chowdhury EH.Nuclear targeting of viral and nonviral DNA［J］.Expert Opin Drug Deliv，2009，6 （7）：697-703.

［2］Braeckmans K，Buyens K，Naeye B，Vercauteren D，Deschout H，Raemdonck K，et al.Advanced fluo⁃rescence microscopy methods illuminate the trans⁃fection pathway of nucleic acid nanoparticles［J］.J Control Release，2010，148（1）：69-74.

［3］Park TG，Jeong JH，Kim SW.Current status of polymeric gene delivery systems［J］.Adv Drug Deliv Rev，2006，58（4）：467-486.

［4］Park DW，Hoffman AS，Pun S，Stayton PS.Design and development of polymers for gene delivery ［J］.Nat Rev Drug Discov，2005，4（7）：581-593.

［5］Kawakami S，Higuchi Y，Hashida M.Nonviral approaches for targeted delivery of plasmid DNA and oligonucleotide［J］.J Pharm Sci，2008，97 （2）：726-745.

［6］Li SD，Huang L.Non-viral is superior to viral gene delivery［J］.J Control Release，2007，123（3）：181-183.

［7］Tomalia DA，Baker H，Dewald J，Hall M，Kallos G，Martin S，et al.A newclass of polymers：starburstdendritic macromolecules［J］.Polym J，1985，17 （1）：117-132.

［8］Sasaki E，Suemizu H，Shimada A，Hanazawa K，Oiwa R，Kamioka M，et al.Generation of trans⁃genic non-human primates with germline transmis⁃sion［J］.Nature，2009，459（7246）：523-527.

［9］Quadir MA，Haag R.Biofunctionalnanosystems basedondendriticpolymers［J］.JControl Release，2012，161（2）：484-495.

［10］Kukowska-Latallo JF，Bielinska AU，Johnson J，Spindler R，Tomalia DA，Baker JR.Efficient transfer of genetic material into mammalian cells using Starburst polyamidoamine dendrimers［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1996，93（10）：4897-4902.

［11］Baker JR.Dendrimer-based nanoparticles for cancer therapy［J］.Hematol Am Soc Hematol Educ Program，2009，（1）：708-719.

［12］Paez JI，Martinelli M，Brunetti V，Brunetti V，Strumia MC.Dendronization：a useful synthetic strategy to prepare multifunctional materials［J］.Polymers，2012，4（1）：355-395.

［13］Sharma A，Gautam SP，Gupta AK.Surface modified dendrimers：synthesisandcharacterizationfor cancer targeted drug delivery［J］.Bioorg Med Chem，2011，19（11）：3341-3346.

［14］Mukherjee SP，Lyng FM，Garcia A，Davoren M，Byrne HJ.Mechanistic studies of in vitro cytotoxici⁃ty of poly（amidoamine）dendrimers in mammalian cells［J］.Toxicol Appl Pharmacol，2010，248（3）：259-268.

［15］Parimi S，Barnes TJ，Callen DF，Prestidge CA. Mechanistic insight into cell growth，internaliza⁃tion，and cytotoxicity of PAMAM dendrimers［J］. Biomacromolecules，2010，11（2）：382-389.

［16］Roberts JC，Bhalgat MK，Zera RT.Preliminary biological evaluation of polyamidoamine（PAMAM）Starburst dendrimers［J］.J Biomed Mater Res，1996，30（1）：53-65.

［17］Xiang S，Tong H，Shi Q，Fernandes JC，Jin T，Dai K，et al.Uptake mechanisms of non-viral gene delivery［J］.J Control Release，2012，158（3）：371-378.

［18］Lee JH，Lim Y，Choi JS，Lee Y，Kim TI，Kim HJ，et al.Polyplexes assembled with internally quater⁃nized PAMAM-OH dendrimer and plasmid DNA have a neutral surface and gene delivery polency［J］. Bioconjug Chem，2003，14（6）：1214-1221.

［19］Ruffell B，Johnson P.Hyaluronaninducescell death in activated T cells through CD44［J］.J Immunol，2008，181（10）：7044-7054.

［20］Charrad RS，Gadhoum Z，Qi J，Glachant A，Allouche M，Jasmin C，et al.Effects of anti-CD44 monoclonal antibodies on differentiation and apop⁃tosis of human myeloid leukemia cell lines［J］. Blood，2002，99（1）：290-299.

［21］Taetz S，Bochot A，Surace C，Arpicco S，Renoir JM，Schaefer UF，et al.Hyaluronic acid-modified DOTAP/ DOPE liposomes for the targeted delivery of antitelomerase siRNA to CD44-expressing lung cancer cells［J］.Oligonucleotides，2009，19（2）：103-116.

［22］Peer D， Margalit R.Tumor-targetedhyaluronannanoliposomes increase the antitumor activity of liposomal doxorubicin in syngeneic and human xenograft mouse tumor models［J］.Neoplasia，2004，6（4）：343-353.［23］Collins SA，Guinn BA，Harrison PT，Scallan MF，O′sullivan GC，Tangney M.Viral vectors in cancer immunotherapy：which vector for which strategy？［J］.Curr Gene Ther，2008，8（2）：66-78.

Cytotoxicity of non-viral gene vector polyamide amine dendrimers-hyaluronic acid polymer

HU Hai-mei，LI Xiao-lin，LIANG Shuang-hong
（School of Life Science and Biopharmaceutics，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China）

OBJECTlVE To study the cytotoxicity of polyamide amine dendrimers（PAMAM）-hyaluronic acid（HA）as a non-viral gene delivery vector in vitro.METHODS PAMAM-HA was synthesized by our laboratory.Cytotoxicities of various polymers on HeLa cells，Bel-7402 cells and HepG2 cells were evaluated by MTT assay.Apoptotic rates were determined by flow cytometry.RESULTS The cytotoxicity of PAMAM-HA polymer increased with the concentration of polymer（50-800 mg·L-1），the time of action（24-72 h），the number of generations of PAMAM（G4，G5）and decrease in the molecular mass（3850，17 200）and the graft density（5%-25%）of HA.After incubation with PAMAM G4-HA3850-5%or PAMAM G5-HA3850-5%for 24 h，the apoptotic rate of hepatoma cells—Bel-7402 cells was 4.5%and 9.9%，respectively.After incubation with complexes of PAMAM G4-HA3850-5%/DNA or PAMAM G5-HA3850-5%/DNA for 24 h，the viability of HeLa cells was more than 80%，which was lower than that of PAMAM G4/DNA和PAMAM G5/DNA.CONCLUSlON Cytotoxicity of PAMAM modified by HA of different grafting density and quantity can be reduced，suggesting the PAMAM is a promising non-viral gene vector.

polyamide amine dendrimers；hyaluronic acid；cytotoxicity；tumor cells；apoptosis

The project supported by National Natural Science Foundation of China（31000429）

HU Hai-mei，E-mail：gzhm368@163.com，Tel：（020）39352201

R978

A

1000-3002-（2016）03-0236-07

2015-03-15接受日期：2016-01-18）

（本文编辑：齐春会）

国家自然科学基金项目（31000429）

胡海梅（1975-），女，博士，副教授，主要从事缓控释制剂、靶向药物载体、药物新材料和新剂型研究。

胡海梅，E-mail：gzhm368@163.com