促透皮吸收剂对菌克软膏中硝酸咪康唑透皮吸收的影响

董文燊，林　芝，杨　林，瞿发林*



促透皮吸收剂对菌克软膏中硝酸咪康唑透皮吸收的影响

董文燊1，林芝1，杨林2，瞿发林1*

目的考察促透皮吸收剂对菌克软膏中硝酸咪康唑透皮吸收的影响，并筛选最佳透皮吸收剂及用量。方法采用Franz扩散池法，以离体裸鼠皮为透皮屏障，HPLC法测定含量，计算累积透皮量。结果累积透皮量检测表明，不同促渗剂的促渗强弱顺序依次为3%氮酮>5%丙二醇>5%油酸>3%薄荷脑>不加促透剂，不同用量的氮酮促渗作用强弱顺序依次为5%氮酮>3%氮酮>1%氮酮>菌克。结论几种促透剂对菌克软膏中硝酸咪康唑均有促透皮吸收作用，其中氮酮的促透效果最好，且5%氮酮的促透效果最为明显。

菌克软膏；硝酸咪康唑；促透皮吸收剂；透皮吸收；高效液相色谱法

0　引言

菌克软膏为我院非标准复方制剂[批准文号：南制字(2011)F16001]，主要由硝酸咪康唑、盐酸林可霉素、醋酸地塞米松组成，具有抗菌消炎的功效。临床主要用于急、慢性湿疹，脂溢性皮炎，过敏性皮炎，手、足、体、股、头癣及皮肤瘙痒等疾病[1]。硝酸咪康唑为常用的咪康唑类抗真菌药物，是一种高效、安全、广谱的抗真菌药，对大部分致病性真菌均有作用，目前已广泛应于皮肤真菌感染，如：手、足、体、股癣的治疗[2]。本课题组前期已完成菌克软膏处方优化的研究[3]及体外抗菌活性观察[4]。硝酸咪康唑为菌克软膏中的主药，其经皮渗透主要依靠促透皮吸收剂提高抗真菌效果。为进一步优化制剂工艺，增加其透皮吸收作用，提高主药在局部皮肤内累积浓度，本研究通过离体裸鼠皮的体外透皮试验，考察促透皮吸收剂对菌克乳膏中硝酸咪康唑透皮吸收的影响，筛选出最佳的透皮吸收剂及其用量，以期为该制剂的临床疗效提供理论基础。

1　材料

1.1仪器Waters系列高效液相色谱仪(美国Waters公司，515泵，CapLC2487双波吸光度检测器，Empower2数据处理系统)；XS105十万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；FA1004电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司)；TP-2A型智能透皮扩散实验仪(河南佰泽仪器有限公司，透皮杯体积15 mL，有效接触面积3.14 cm2)；PSH-3D型PH计(上海三信电讯厂)。

1.3动物SPF级Balb/c裸鼠，雄性，体重(20±2) g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供[合格证号：SCXK(沪)2012-0002]。

2　方法与结果

2.1菌克软膏的制备[3]取处方用量的水相(基质119 g、林可霉素15 g，纯化水588.5 g)、油相(基质262 g，醋酸地塞米松0.5 g)，按制备工艺制备水相与油相，加热搅拌至溶解或熔化，并进行85 ℃左右保温。将油相缓缓加入水相中不断搅拌，待乳化完全后转慢搅拌慢降温。待温度降至约30 ℃时，加入过80目筛的硝酸咪康唑15 g，按同一方向搅拌混匀，冷却至室温，分别制得含薄荷脑3%、丙二醇5%、油酸5%、氮酮(0%、1%、3%、5%)和不含硝酸咪康唑的阴性样品。

2.2接收液中硝酸咪康唑的含量测定

2.2.1色谱条件[5]用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-1.5%醋酸铵溶液(40∶40∶20)为流动相，检测波长为230 nm，柱温为30 ℃，流速1.0 mL/min，进样量20 μL。

2.2.2溶液的制备

①对照品溶液：精密称取干燥至恒重的硝酸咪康唑对照品适量，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制得含硝酸咪康唑102 μg/mL的对照品储备液。

②供试品溶液：从规定时间Franz扩散池的接收液中精密移出接收液1.0 mL，室温放置，经0.45 μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

③阴性对照品溶液：按处方制备的不含硝酸咪康唑的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成供试溶液。

2.2.3专属性试验按照“2.4”项下方法分别进行样品和阴性样品透皮试验，24 h后取出接收液过滤，各进样20 μL，按“2.2.1”项下色谱条件测定。结果表明，空白基质及皮肤对此检测方法无影响，见图1。

图1　硝酸咪康唑HPLC色谱图

2.2.4标准曲线的绘制将对照品储备液(硝酸咪康唑102 μg/mL)按一定比例稀释，得硝酸咪康唑浓度分别为10.2、5.1、2.04、1.02、0.204、0.020 4 μg/mL，依次进样，按“2.2.1”项下的色谱条件进行测定，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，得硝酸咪康唑的回归方程：Y=24 528 X+672.27，r=0.999 8。结果表明，硝酸咪康唑在0.408～204 μg范围内呈良好的线性关系。根据信噪比S/N≥3计算，测得本方法的最低检测质量浓度为10 ng/mL。

2.2.5精密度试验精密吸取供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件，连续进样6次，测定峰面积。结果显示，硝酸咪康唑的RSD为1.2%，表明精密度良好。

2.2.6稳定性试验取同一批号样品溶液，于室温下放置，并于0、3、6、9、12、18、24 h时，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定。结果显示，硝酸咪康唑峰面积无明显变化，表明样品溶液在24 h内基本稳定。

2.2.7回收率试验取空白接受液9份，分别加入一定量的硝酸咪康唑对照品，制成高、中、低质量浓度(5.1、1.02、0.204 μg/mL)的系列溶液，每个质量浓度制备3份，测定峰面积，计算回收率。结果高、中、低3个浓度的回收率分别为98.6%、101.1%、101.7%，平均回收率为100.47%，平均RSD为1.83%，表明制剂加样回收率符合要求。

2.3离体鼠皮的制备方法[6]将健康裸鼠脱臼处死后，用生理盐水冲洗干净，剪下背部皮肤，小心剥离脂肪及黏液组织，选取完整的皮肤，用生理盐水反复冲洗干净，置-40 ℃低温冰箱中保存，1周内备用。

2.4体外透皮实验[7-8]采用垂直式改良的Franz单室扩散池为透皮扩散装置，接受液为丙二醇∶0.9%氯化钠注射液(1∶1)混合液，接受池体积为15 mL，透皮有效面积为3.4 cm2，转速为300 r/min，水浴温度为(37±0.5)℃。取出制备好的离体裸鼠皮，分别置于37 ℃的生理盐水中解冻20 min，并将其固定在扩散池与接收池之间，角质层朝上，均匀涂抹1.0 g样品，与扩散池接触，皮肤下层与接收液液面接触，排出气泡。分别于0、2、4、8、12、18、24 h时从接收池取样口精密取样1.0 mL，每次取样后补加同样体积、温度的新鲜接收液，并排出气泡。

2.6实验结果及分析

2.6.1不同促渗剂累积透皮量分析由表1、图2、表2可知，不同促渗剂对硝酸咪康唑均具有促渗作用，促渗强弱顺序依次为3%氮酮>5%丙二>醇>5%油酸>3%薄荷脑>不含促透剂。其中，3%氮酮菌克乳膏累积透皮量最高，24 h累积透皮量为31.344，渗透速率为1.090 μg/(cm2·h)，是不含促透皮剂渗透速率[0.434 μg/(cm2·h)]的 2.475倍。因此，筛选出氮酮作为乳膏的促渗剂，对不同浓度的氮酮进行考察。

表1　不同促透皮吸收剂累积渗透量，μg/cm2)

图2　不同促透皮吸收剂累积渗透量比较

表2　不同促透剂对硝酸咪康唑透皮速率的影响

注：J为平均渗透速率，ER为促渗倍数(下同)

2.6.2氮酮不同浓度累积透皮量分析由表3、图3、表4可知，不同浓度氮酮的促渗强弱顺序依次为5%氮酮>3%氮酮>1氮酮%>菌克(含氮酮0.6%)，且5%氮酮的促渗作用最强，24 h累积透皮量为42.540。5%氮酮24 h时ER达到3.359，较原处方菌克软膏(含氮酮0.6%) 24 h时的ER (1.185)高2.83倍。

3　讨论

由于不同实验动物的皮肤结构不同，其体外透皮吸收量结果差异很大，而人体皮肤是体外透皮实验的最佳皮肤，但较难获得。因此，有报道，体外透皮扩散试验多采用裸鼠皮肤，因其可避免由于使用脱毛剂或剪毛所可能造成的皮肤损伤，重复性好，且与人体皮肤具有相近的毛囊数目和直径[9-10]。因此，本研究选择裸鼠作为本次试验的透皮屏障。

表3　不同浓度氮酮的累积透皮量，μg/cm2)

图3　不同浓度氮酮的累积透皮量比较

表4　不同浓度氮酮对硝酸咪康唑透皮速率的影响

菌克软膏处方中的硝酸咪康唑在甲醇中略溶，在三氯甲烷或乙醇中微溶，在水或乙醚中不溶。有报道，硝酸咪康唑相关制剂体外经皮透过试验的接收液包括丙二醇∶0.9%氯化钠注射液(1∶1)或(1∶2)及0.9%氯化钠注射液，而0.9%氯化钠注射液中加入丙二醇能增加硝酸咪康唑的溶解性[11]，因此，本试验参考文献[12]及根据处方量，选择丙二醇∶0.9%氯化钠注射液(1∶1)为接收液。

本研究结果表明，单一促透皮吸收剂氮酮、薄荷脑、油酸、丙二醇对菌克乳膏中硝酸咪康唑均具有促渗作用，但氮酮透皮吸收效果最好，并且氮酮的用量越大，累积透皮量越高，5%氮酮24 h时ER达到3.359，较原处方菌克软膏(含氮酮0.6%)24 h时ER(1.185)高2.83倍。氮酮是目前公认的优良促透剂，对皮肤的毒性、刺激性很低，其最佳用量为处方量的0.5%～5%[13]。因此，应增加菌克处方中促透皮吸收剂氮酮的用量，提高硝酸咪康唑在局部皮肤内的累积浓度，以更好地发挥制剂的临床疗效。

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Effects of penetration enhancers on percutaneous permeability of miconazole nitrate in Junke cream

DONG Wen-shen1,LIN Zhi1,YANG Lin2,QU Fa-lin1*

(1.The 102th Hospital of PLA,Changzhou 213003,China;2.Bengbu Medical College,Bengbu 233030,China)

ObjectiveTo study the effects of penetration enhancers on percutaneous permeability of miconazole nitrate in Junke cream,and to screen for the best transdermal absorption and amount.MethodsFranz diffusion cell method was used and isolated nude mice skin was as the percutaneous barrier,the content was detected by HPLC,and the cumulative permeation quantity was calculated.ResultsThe cumulative permeation quantity showed that the rank order of absorbefacient effect in different penetration enhancers was as follows:3% azone>5% propylene glycol>5% oleic acid>3% menthol>without penetration enhancer;the rank order of absorbefacient effect in different dosage of azone was as follows:5% azone>3% azone>1% azone>Junke.ConclusionAll the penetration enhancer can enhance the transdermal absorption of miconazole nitrate in Junke cream,and the best penetration enhancer is azone,in which,5% azone has the most obvious effect.

Junke cream;Miconazole nitrate;Penetration enhancers;Transdermal absorption;HPLC

2015-12-14

1.解放军第102医院，江苏 常州 213003；2.蚌埠医学院，安徽 蚌埠 233030

10.14053/j.cnki.ppcr.201608024