ICU和EICU高频接触物表分离的金黄色葡萄球菌耐药性及毒力基因检测

刘鹏，陈琳，许兆军，许小敏，梁珊燕

ICU和EICU高频接触物表分离的金黄色葡萄球菌耐药性及毒力基因检测

刘鹏，陈琳，许兆军，许小敏，梁珊燕

目的 了解ICU和EICU高频接触物表分离的金黄色葡萄球菌的耐药性及毒力基因的携带情况。方法

重症监护病房；急诊重症监护病房；金黄色葡萄球菌；耐药性；毒力基因

金黄色葡萄球菌是重症监护病房（ICU）、急诊重症监护病房（EICU）常见分离到的病原菌[1]，可导致严重感染。其高发病率和病死率，是医疗团队在救治过程中面临的重大挑战问题。患者周围环境物体表面的金黄色葡萄球菌，通常可以在其上面存活数周，甚至数月，同样污染的环境物表可以传播病原体。本研究旨在了解ICU和EICU高频接触物表分离的金黄色葡萄球菌耐药性及毒力基因携带情况，并对耐甲氧西林发生率和杀白细胞基因（PVL）和超抗原基因（sea、seb、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej、sek、sel、sem、sen、seo、sep、seq、eta、etb、etd、tst）进行检测，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2015年1—3月每月1次采集ICU和EICU高频接触的物表；床栏、床上用品、床边桌、血压计、静脉注射泵、护士呼叫按钮、尿液收集袋共计312份。在清洁消毒前，采用采样棉签采样100 cm2，7.5%NaCl增菌6～8 h，接种金黄色葡萄球菌显色培养基筛查，35℃孵育24 h，如不明显延长至48 h，紫红色菌落，再进行染色和凝固酶试验确认，共收集54株菌株。

1.2 菌种鉴定及药敏试验 筛查阳性的菌株，采用PCR扩增作spa基因。同时参照美国临床和实验室标准协会推荐标准（CLSI）确认MRSA。VITEK-2 compact GPS-16卡片进行药敏实验。金黄色葡萄球菌ATCC25923标准菌株。

1.3 基因检测和测序 蛋白酶K裂解法制备细菌DNA模板。全部基因检测均为PCR法，严格按照试剂盒说明书操作。检测项目为杀白细胞基因（PVL），20种超抗原基因（sea、seb、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej、sek、sel、sem、sen、seo、sep、seq、eta、etb、etd、tst），PCR产物用3730全自动荧光法测序（美国，ABI公司）。用Chromas直接作BLAST Search网上比对。

2 结果

2.1 金黄色葡萄球菌对各种抗菌药物的耐药性 312份标本分离出54株金黄色葡萄球菌，分离率17.31%。检出耐甲氧西林菌株31株，MRSA发生率为57.41%。分离株对万古霉素、替考拉宁、利奈唑烷、替加环素、喹奴普汀/达福普汀、呋喃妥因均敏感，庆大霉素、红霉素、绿洁霉素、四环素、环丙沙星、左旋氧氟沙星的耐药率均超过 75.00%。莫西沙星和复方新诺明耐药57.41%。见表1。

表1 54株金黄色葡萄球菌对各种抗菌药物的敏感率和耐药率 株（%）

2.2 金黄色葡萄球菌超抗原基因检测组合模式 金黄色葡萄球菌超抗原基因35株有阳性检出（即超抗原基因总检出率达64.81%），其中sea、seq各24株（44.44%），seb、sem、sep 各 3 株（5.56%），sek19株（35.19%），seg、sei、sen、seo各6株（11.11%），sec、sed、see、seh、sej、sel、eta、eta、eta、tst未检出。PVL基因检出10株（14.81%）。见表2。

表2 54株金黄色葡萄球菌超抗原

3 讨论

金黄色葡萄球菌易引起医院获得性和社区性感染。患者携带的金黄色葡萄球菌可频繁污染周围环境物体表面，由于ICU、EICU患者气管插管和鼻胃管使用率高，像许多其他病原菌一样能够在其表面形成生物膜，导致细菌的持续释放，同样污染的环境物表可以传播病原体。本组312份高频接触的物表标本分离出54株金黄色葡萄球菌，分离率17.31%，与其他研究报告相一致[2-3]，高分离率与病房的终末清洁不彻底、患者感染同源细菌（直接来源于环境表面；医务人员污染的手）有关。多项研究表明，实施改善环境物表的清洁与消毒，可以减少病原体的传播。

MRSA感染的治疗变得越来越困难，由于MRSA菌株耐 -内酰胺类抗生素及其他抗菌药物。MRSA的感染过去的十年中在ICU增加逐年增加。本研究54株 ICU和EICU高频接触物表分离的菌株对常见抗菌药物耐药率均较高，这与国内、外的其他研究报告相一致[4-5]。金黄色葡萄球菌具有广泛的毒力因子。

金黄色葡萄球菌感染的严重程度可能与这些毒素的产生。外毒素可以促使组织的破坏、逃避宿主的免疫反应。本研究在PVL检出率14.81%，低检出率可能与分离的细菌均为院内获得相关。金黄色葡萄球菌至少有20个不同血清学的超抗原已被描述，包括SEA-Q和TSST-1。本研究中SEA的检出率44.44%。产肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株，结合不同的SE基因也可以促进的发生率和严重程度，在本项研究中seq检出24株（44.44）和sek19检出株（35.19%）。

ICU和EICU高频接触物表金黄色葡萄球菌的高分离率、高耐药率分离及广泛的毒力因子，需要临床强化清洁/消毒，减少污染物表传播疾病。

[1] 胡付品,朱德妹,汪复,等.2013年中国CHINET细菌耐药性监测[J].中国感染与化疗杂志,2014,14(5):365-370.

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[3] Dinic M,Vukovic S,Kocic B,et al.Nasal carriage of Staphylococcus aureus in healthy adults and in school children[J].Acta Fac Med Naiss,2013,30:31-36.

[4] Lozano C,Gomez-Sanz E,Benito D,et al. Staphylococcus aureus nasal carriage, virulencetraits,antibiotic resistance mechanisms,and genetic lineages in healthy humans in Spain,with detection of CC398 and CC97strains[J].Int J Med Microbiol, 2011,301:500-505.

[5] 糜祖煌,金辉,秦玲.葡萄球菌属连续分离株毒力与耐药基因研究[J].中华医院感染学杂志,2008,18(4):454-456.

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.01.012

R446.6

A

1671-0800(2016)01-0025-02

2015-08-20（本文编辑：孙海儿）

浙江省医药卫生科技计划项目（2014KYA197）；宁波市科技局社发择优委托项目（2011C51002）

315010宁波，宁波市第二医院

许小敏，Email:xjl199908 02@sina.com

2015年1—3月每月1次采集ICU和EICU高频接触物表检测分离金黄色葡萄球菌，用vitek2-compact上机及葡萄球菌A蛋白PCR基因表达鉴定菌株，GPS-16卡片进行药敏实验，通过PCR方法分析杀白细胞基因（PVL）和超抗原基因（sea、seb、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej、sek、sel、sem、sen、seo、sep、seq、eta、etb、etd、tst）的表达情况。结果 312份标本分离出54株金黄色葡萄球菌，分离率17.31%。MRSA发生率为57.41%。对万古霉素、替考拉宁、利奈唑烷、替加环素、喹奴普汀/达福普汀、呋喃妥因均敏感，庆大霉素、红霉素、绿洁霉素、四环素、环丙沙星、左旋氧氟沙星的耐药率均超过75.00%。莫西沙星和复方新诺明耐药57.41%；超抗原基因总检出率达64.81%，其中sea 、seq各24株（44.44%），seb、sem、sep各3株（5.56%），sek19株（35.19%），seg、sei、sen、seo各6株（11.11%），sec、sed、see、seh、sej、sel、eta、eta、eta、tst未检出。PVL基因检出10株（14.81%）。结论 ICU和EICU高频接触物表金黄色葡萄球菌的高分离率、高耐药率分离及广泛的毒力因子，需要临床强化清洁/消毒，减少污染物表传播疾病。