CD44V 6在大肠癌组织和外周血表达及其临床意义

宋云骏， 姜林鹤， 季世强， 黄 微， 关亚男， 许再超， 杨金光

（河北省承德市中心医院急诊外科， 河北 承德 067000）

CD44V 6在大肠癌组织和外周血表达及其临床意义

宋云骏， 姜林鹤， 季世强， 黄 微， 关亚男， 许再超， 杨金光

（河北省承德市中心医院急诊外科， 河北 承德 067000）

目的：检测大肠癌组织中CD44V6的表达和外周血中CD44V6的水平，分析与大肠癌的临床病理学特征和患者预后的关系。方法：收集57例大肠癌手术组织和外周血血清标本，分别应用免疫组织化学方法（SP）和酶联免疫吸附实验（ELISA）检测CD44V6的表达，分析其与大肠癌的临床病理特征之间的关系以及与患者预后的相关性。结果：CD44V6在大肠癌组织中的表达（63.16%）明显高于其在正常大肠黏膜中的表达水平，差异有统计学意义（10.00%，P=0.002）。患者血清中CD44V6为14. 62±3.344ng/m L，而正常对照组血清中为 3.22±1.65ng/m L，两组差异有统计学意义。大肠癌中的CD44V6表达与肿瘤的浸润深度、分化程度、淋巴结转移情况及临床分期有关。通过Kaplan-Meier生存分析发现，CD44V6高表达的患者五年生存率低于低表达患者，两组间差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：CD44V6在大肠癌组织和血清中高表达，并可能成为预测大肠癌浸润转移和预后的指标。

大肠癌； CD44V6； 免疫组化； ELLSA

本研究为CD44V64作为临床判断预测大肠癌转移和预后指标提供有力证据；对临床评价疗效、评估病情和指导治疗具有重要的参考意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料：选取2011年1月至2012年12月间在承德市中心医院肿瘤科入院的大肠癌患者57例，所有患者均为初诊手术患者，术前未接受放、化疗及免疫治疗。患者年龄36～70岁，中位年龄47岁；其中男性35例，女性22例。手术切除组织，4%多聚甲醛固定并进行石蜡包埋。同时收集距离癌组织15cm远处的肠黏膜组织作为正常对照。根据第六版的恶性肿瘤TNM分类进行临床分期，并由两位病理科医师进行准确的确诊。其中结肠癌38例，直肠癌19例。按照浸润深度分为两组：浸润至浆膜及浆膜外32例、未超过肌层25例；根据肿瘤分化程度分为：高分化腺癌11例，中分化腺癌34例，低分化腺癌12例。Duke's分期：A 期6例，B期18例，C期33例；按照是否有淋巴结转移，分为两组：淋巴结转移阳性33例，淋巴结转移阴性24例。同时在术前取患者空腹静脉血2～3mL，待血液凝固后分离上清液，在-70℃下冰冻保存。另取10例正常人外周血作为正常对照。

1.2 免疫组织化学染色法：免疫组织化学染色（SP两步法）热修复抗原后采用两步法检测大肠癌和癌旁组织中CD44V6的表达。实验步骤严格按试剂盒说明书进行操作。CD44V6单克隆抗体为北京中杉金桥生物科技有限公司产品，工作浓度均为1：100。染色判断标准：按D.Horst等的标准。选择5个具有代表性的高倍视野（10×40），以细胞膜或细胞质出现棕黄或棕褐色为阳性染色。不着色为阴性（-），着色为（+）。

1.3 酶联免疫吸附实验（ELISA）：CD44V6 ELLSA试剂盒购买北京金杉公司，实验方法严格按照试剂盒说明书进行操作，检测血清中CD44V6的含量。

1.4 统计学分析：采用SPSS13.00统计软件包进行统计学处理，计量资料以均数±标准差（¯x±s）表示，两组数据间比较采用两独立样本t检验；分类资料采用χ2检验及校正χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

图1 免疫组织化学检测大肠癌组织中CD44V6的表达（400×）

图2 Kaplan-Meier生存分析CD44V6表达水平与大肠癌患者预后关系

2.1 CD44V6在大肠癌患者组织和血清中的表达：CD44V6阳性物质定位于细胞膜和（或）细胞质。大肠癌组织中CD44V6的阳性表达率为63.16%（36/57）；在正常癌旁组织中的阳性表达率为8.77%（5/57）。在大肠癌组织中的表达高于正常组织，差异有统计学意义（χ2=9.722、P=0.002）。大肠癌患者血清中CD44V6水平为14.62±3.344ng/mL，而正常对照组血清中CD44V6水平为3.22±1.65ng/mL，大肠癌组水平高于对照组，两组差异有统计学意义（t=1.523，P=0. 001）。

2.2 CD44V6在大肠癌组织和血清中的表达与临床病理特征的关系：不同年龄、不同性别及不同肿瘤大小的患者CD44V6在大肠癌组织中的表达差异均无统计学意义；而不同肿瘤浸润深度、不同组织学分化程度、有无淋巴结转移及不同临床病理分期者CD44V6在大肠癌组织中的表达差异均有统计学意义，见表1。

表1 CD44V6在大肠癌组织和血清中的表达与临床病理特征的关系

2.3 CD44V6在大肠癌患者组织中的表达与生存率的关系：在57例大肠癌患者中，5年后生存的患者34例，其中17例CD44V6表达阳性，阳性率为50.00%；死亡患者23例，其中19例CD44V6表达阳性，阳性率为82.61%。CD44V6阴性表达组平均生存时间为55.810 ±2.046，CD44V6阳性表达组平均生存时间为49.361± 2.136，两组差异有统计学意义（t=5.543，P=0.019），见图2。

3 讨 论

大肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，在恶性肿瘤中位居第3位。目前大肠癌的治疗主要采用以手术为主结合放化疗的综合治疗。但大肠癌的远期生存率并不高，其中肝转移是治疗失败的主要原因之一［1］。随着对大肠癌病因、发病机制的深入研究，人们发现了众多大肠癌早期诊断和预后有意义的肿瘤标志物，其中最广泛的就是CD44V6。

CD44是一种广泛分布的多功能、多结构的细胞表面跨膜糖蛋白［2］，属于未分类的细胞粘附分子。近年来研究发现，CD44能促进肿瘤细胞与血管内皮细胞之间的黏附，并促进与基底膜的浸润，同时影响细胞骨架蛋白的分布及构型，增加癌细胞的运动能力，进而促进肿瘤的转移［3］。CD44V6是CD44的变异体，参与了肿瘤细胞的粘附，生长调控，逃逸，分化以及游动。CD44V6是一组跨膜糖蛋白，是细胞外基质ECM家族中一个重要成员的受体，主要在大肠癌中表达［4］。CD44V6参与了很多重要的细胞活动过程，如粘附，生长调控，逃逸，分化以及游动，也因此被认为既是一种肿瘤抑制因子又是一种生长侵袭促进因子。Wielenga等［5］通过免疫组织化学法检测直肠癌组织中的CD44V6的表达情况，结果表明CD44V6能够提示癌症的远处转移，可以作为判断大肠癌预后的重要指标。王道荣等研究也表明在发生远处转移的大肠癌中CD44V6的表达水平要明显增高。

本研究采用免疫组化法检测大肠癌及癌旁组织中CD44v6蛋白的表达情况，结果显示，在57例大肠癌组织中CD44V6的表达率明显高于其在癌旁组织中的表达。随浸润程度的加重，CD44V6蛋白的阳性表达率增加，差异有统计学意义（P=0.034）；在肿瘤细胞的不同分化程度间，CD44V6的表达差异有统计学意义（P =0.001）。在临床分期上，Dukes C期病例组的阳性率高于Dukes A、B期病例组，差异有统计学意义（P=0. 000）。淋巴结转移组的阳性表达率也高于淋巴结未转移组（P=0.001）。以上结果提示CD44V6蛋白表达的大肠癌具有更强的侵袭力，易发生淋巴结转移，在大肠癌的临床病理进展和侵袭转移过程中发挥重要的促进作用。

［1］ Bourguignon L Y，Wong G，Earle C，et al.Hyaluronan-CD44v3 interaction with Oct4-Sox2-Nanog promotesmiR-302 expression leading to self-renewal，clonal formation，and cisplatin resistance in cancer stem cells from head and neck squamous cell carcinoma［J］.Biol Chem，2012，287 （39）：32800～32824.

［2］ Nurwidya F，Murakami A，Takahashi F，et al.Molecular mechanisms contributing to resistance to tyrosine kinase-targeted therapy for non-small cell lung cancer［J］.Cancer Biol Med，2012，9（1）：18～22.

［3］ Heider K H，Kiefer K，Zenz T，et al.A novel Fc-engineered monoclonal antibody to CD37 with enhanced ADCC and high proapoptotic activity for treatment of B-cellmalignancies［J］.Blood，2011，118（15）：4159～4168.

［4］ 高艳薇.喉和下咽鳞癌中CD44V6的表达及意义［J］.中国医药导报，2009，6（1）：76～78.

［5］ Bendardaf R，Algars A，Elzagheid A，et al.Comparison of CD44 expression in primary tumors and metastases of colorectal cancer［J］.Oncol Rep，2006，16（4）：741～746.

Expression and Clinical Significance of CD44V6 in Colorectal Cancer Tissues and Peripheral Blood

SONG Yunjun， JIANG Linhe， JIShiqiang， et al

（The Central Hospital of Chengde，Hebei Chengde 067000，China）

【Abstract】Objective：To investigate the expression of CD44V6 in colorectal cancer tissue and eripheral blood，to analyze the relationship between clinical pathological features and prognosis of patientswith colorectal cancer.M ethods：Serum samples in peripheral blood and tissue of colorectal cancer from 57 patientswere collected.The expression of CD44V6 was detected by immunohistochemicalmethod（SP）and enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）.The relationship between the clinical pathological characteristics and the prognosis of patientswith colorectal cancerwere analyzed.Results：The expression of CD44V6 was obviously higher （63.16%）in colorectal cancer tissue than that in the adjacent tissue（10.00%，P=0.002）.The expression levels of CD44V6 in serum was 14.62±3.344ng/mL，while thatwas3.22±1.65ng/mL in normal control group. There was significant difference between the two groups.There were relationship between the expression of CD44V6 and tumor depth，the degree of differentiation，lymph nodes and pathological degree.Kaplan-Meier survival analysis showed that the 5-year survival rate in CD44V7 high expression group was significantly higher than that in low expression group（P＜0.05）.Conclusions：CD44V67 is highly expressed in colorectal cancer tissues and serum，and may be an indicator for predicting the invasion and metastasis of colorectal cancer.

Colorectal cancer； CD44V6； Immunohistochemistry； ELISA

1006-6233（2016）08-1238-04

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2016.08.003

河北省承德市科学技术研究与发展计划项目，（编号：201601A016）