MiRNA- 423-5p与急性心肌梗死后心室重构的关系

贾敏　刘震　罗义　阳军　雷晓明　陈平安

510095广州市胸科医院内二科(贾敏)；510180广州市第一人民医院心内科(刘震、罗义、阳军、雷晓明、陈平安)



·临床研究·

MiRNA- 423-5p与急性心肌梗死后心室重构的关系

贾敏刘震罗义阳军雷晓明陈平安

510095广州市胸科医院内二科(贾敏)；510180广州市第一人民医院心内科(刘震、罗义、阳军、雷晓明、陈平安)

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者血浆miRNA- 423-5p水平与心肌梗死后心室重构严重程度的关系及对AMI患者临床预后的影响。方法选择2012年6月至2014年6月在我院心内科住院并诊断为急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者248例，根据入院血浆miRNA- 423-5p水平的三分位数间距将患者分为低水平组(miRNA- 423-5p<0.35)80例，中水平组(0.36≤miRNA- 423-5p≤0.72)86例和高水平组(miRNA- 423-5p>0.72)82例。测定患者入院即刻N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平，并于入院7～10 d内及半年后行超声心动图测定患者左室舒张末期内径(LVEDd)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)、左室射血分数(LVEF)。动态追踪观察三组患者随访期间(6个月内)心脏不良事件(MACE)的发生情况。结果三组患者随miRNA- 423-5p水平升高，NT-proBNP水平升高，术后半年的LVEDV和LVESV显著增加，LVEF降低[(1075.33±98.54) pg/L比(832.17±86.55) pg/L比(552.66±68.58) pg/L；(132.35±11.56) ml比(130.66±12.25) ml比(127.51±10.35) ml；(61.86±11.53) ml比(59.92±10.25) ml比(59.02±11.23) ml；47.05%±4.16%比48.14%±3.78%比49.82%±4.53%，均为P<0.05]，STEMI患者miRNA- 423-5p与NT-proBNP水平呈正相关(r=0.412，P<0.05)。直接PCI术后随访6个月，Kaplan-Meier生存分析发现三组患者累积无MACE事件生存率差异有统计学意义(96.25% 比90.70% 比81.71%，Logrank=9.605，P=0.008)，多因素Logistic回归分析显示miRNA- 423-5p、NT-proBNP均为STEMI患者近期MACE发生的独立预测因子。结论AMI患者入院血浆miRNA- 423-5p水平与心肌梗死后心室重构密切相关，并对AMI患者的近期预后具有预测意义。

miRNA- 423-5p；心肌梗死；心室重构

Fund program：Project of Guangzhou Municipal Science and Technology Plan(No.2012Y2- 00025)

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)后心室重构是导致患者心力衰竭及预后不良的主要因素[1]。MicroRNA(miRNAs)是一组高度保守的单链非编码小分子RNA，参与多种生物过程的调控[2]。近年来的研究发现miRNAs在心力衰竭的病理生理过程中扮演重要的角色。已有报道心衰患者血浆miRNA- 423-5p水平显著升高[3]。本研究旨在探讨血浆miRNA- 423-5p水平与急性心肌梗死后左心室重构的关系及对患者临床预后的影响。

1　对象和方法

1.1研究对象与分组

前瞻性选择2012年6月至2014年6月在我院心内科住院初次发生急性ST段抬高型心肌梗死(ST-segment elevated acute myocardial infarction，STEMI)并在起病12 h内成功接受直接经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention，PCI)行再灌注的患者248例，STEMI诊断符合2001年中华医学会心血管病分会制定的《急性心肌梗死诊断和治疗指南》标准[4]。该研究通过广州市第一人民医院的伦理委员会审查，入选的研究对象均对本研究知情并签署知情同意书，研究对象均排除严重肝肾功能不全、重症感染、血液系统疾病、恶性肿瘤、心原性休克等。患者入院后即刻抽取静脉血，采用荧光定量PCR技术(realtime fluorescent quantitive PCR，qRT-PCR)测定miRNA- 423-5p水平(相对表达量)，根据患者miRNA- 423-5p水平的三分位间距将患者分为低水平组(miRNA- 423-5p<0.35)80例，中等水平组(0.36≤miRNA- 423-5p≤0.72)86例和高水平组(miRNA- 423-5p>0.72)82例。

1.2方法

患者入院后均接受标准的急性冠状动脉综合征强化药物治疗(抗凝、抗血小板、强化降脂、改善心肌缺血)并接受直接PCI，手术均由具有介入手术资格的心血管科医师(PCI例数大于50例/年)实施。若无禁忌证，患者术后及随访期间均规范接受阿司匹林0.1 g/d、氯吡格雷75 mg/d的双联抗血小板治疗，并继续使用β受体阻滞剂、他汀类降脂药和血管紧张素转换酶抑制剂等。对入选患者住院期间进行严密观察，出院后通过住院病历记录、门诊及电话随访(随访率100%)共6个月，记录新发生的主要心脏不良事件(major adverse cardiac event，MACE)，包括死亡、非致命性心肌梗死或再梗死、缺血性心绞痛发作再次血运重建、恶性心律失常(室性心动过速、心室颤动、Ⅱ或Ⅲ度房室传导阻滞)、急性心力衰竭等。

1.3指标的测定

血浆miRNA- 423-5p的检测[5]：患者入院即刻抽取静脉血2 ml，置于乙二胺四乙酸(EDTA-K2)无菌抗凝试管中，2 h内分离血浆，血浆miRNA- 423-5p采用qRT-PCR进行检测(Promega公司，美国)，以人snRNA U6(Human snRNA U6)为内参，定义ΔCt=目的基因(miRNA- 423-5p)Ct-内参(U6)Ct；ΔΔCt=待测样品中目的基因(miRNA- 423-5p)ΔCt-参照样品中目的基因(miRNA- 423-5p)ΔCt，相对样品模板量RQ=2-ΔΔCt(注：Ct值的含义：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数)。以相对样本模板量表示循环miRNA- 423-5p的相对表达量。NT-proBNP水平检测(采用德国Roche公司E170电化学发光仪，并按照Roche公司proBNP检测试剂盒的说明书留取标本及检测)。于入院PCI术后7～10 d及半年后由超声室医师使用美国GE公司VIVID7彩色多普勒超声仪对患者行超声心动图检查，测定患者左室舒张末期内径(LVEDd)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)、左室射血分数(LVEF)。

1.4统计学方法

数据使用SPSS 13.0统计软件处理，计量资料以均数±标准差表示，计数资料以百分数表示，两组间计数资料比较采用χ2检验，两组间均数比较采用t检验，各指标间相关性分析采用Spearman相关性分析，三组间计量资料比较采用One-WayANOVA方差分析，无MACE事件生存分析采用Kaplan-Meier曲线，并采用多因素Logistic回归分析性别、吸烟、高血压、糖尿病、泵衰竭、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、血浆miRNA- 423-5p、NT-proBNP、HDL-C、LDL-C、总胆固醇(CHOL)、空腹血糖(FBS)、血尿酸等多个因变量与STEMI患者随访6个月内MACE发生的关系，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1患者基线临床资料

本研究共纳入248例患者，年龄45～76岁，平均(62.4±7.9)岁，男性141例，女性107例。三组患者在基线临床资料及冠脉病变特点方面差异无统计学意义(均为P>0.05)，见表1。

2.2患者左室重构指标变化

三组患者入院NT-proBNP水平、入院7～10天及半年后超声心动图检查指标的比较，见表2。

表1　三组患者的临床基线资料

注：BMI：体质指数；ACEI：血管紧张素转换酶抑制剂；β-blocker：β受体阻滞剂

表2　三组患者左室重构指标的比较±s)

注：与低水平组比较，aP<0.05，bP<0.01；与中水平组比较，cP<0.05，dP<0.01；LVEDd：左室舒张末期内径；LVEDV：左室舒张末期容积；LVESV：左室收缩末期容积；LVEF：左室射血分数

2.3血浆miRNA- 423-5p与NT-proBNP水平的相关性

Spearman相关分析显示，STEMI患者入院时血浆miRNA- 423-5p水平与NT-proBNP水平呈正相关(r=0.412，P<0.05)。

2.4三组患者随访期间无MACE事件生存率的比较

入选患者定期随访6个月，低水平组患者发生MACE 3例(3.75%)，中水平组患者共发生MACE 8例(9.30%)；高水平组患者共发生MACE 15例(18.29%)。Kaplan-Meier生存分析发现低水平、中水平、高水平三组患者累积无事件生存率差异有统计学意义(96.25% 比90.70% 比81.71%，Logrank=9.605，P=0.008)，见图1。

图1　三组STEMI患者随访期间无MACE事件生存曲线比较

2.5血浆miRNA- 423-5p水平近期预后的预测价值

多因素Logistic回归分析显示，血浆miRNA- 423-5p、NT-proBNP与糖尿病、泵衰竭2级以上、多支冠脉病变均是STEMI患者直接PCI术后发生MACE的独立预测因子，见表3。

3　讨论

近年来的研究报道循环miRNAs作为一类单链内源性非编码小分子RNA，其在患者生理或病理状态下的变化早于其他生物标志物，并且具有良好的抗RNA酶降解能力和较高的稳定性，这就为血清/血浆miRNAs作为疾病的生物标记物进行检测提供了可能[6]。以往的研究已发现miRNA- 423-5p与心力衰竭有着密切的关系，但目前关于循环miRNA- 423-5p与急性心肌梗死后心室重构和心力衰竭的关系及机制如何，国内外对此的研究报道甚少。本研究通过观察入院不同血浆miRNA- 423-5p水平组STEMI患者PCI术后超声心动图左室重构指标的差异，旨在探讨miRNA- 423-5p水平对心肌梗死后左心室重构的预测价值，并观察其对患者临床预后的影响。

Tijsen等[7]发现心力衰竭患者血浆miRNA- 423-5p水平明显升高，并且与NT-proBNP和LVEF水平具有良好的相关性，Goren等[8]也报道了循环miRNA- 423-5p在心衰患者中表达升高，并且对心衰的鉴别具有较高的灵敏度和特异度，但上述研究均未探讨循环miRNA- 423-5p与心室重构指标的关系，尤其是在急性心肌缺血坏死情况下两者的关系。本研究将入选的STEMI患者按入院后血浆miRNA- 423-5p水平三分位间距分为三组，研究结果发现，PCI术后7～10 d内三组患者超声心动图检测结果LVEDd、LVEDV，LVESV、LVEF差异无统计学意义，但半年后血浆miRNA- 423-5p高水平组患者LVEDd、LVEDV较低水平组患者明显增加，而LVEF显著降低，表明STEMI患者血浆miRNA- 423-5p水平与心肌梗死后左室重构存在一定的关系。既往的研究[9]已证实NT-proBNP对心肌梗死后心功能不全有预测价值，心肌梗死后NT-proBNP水平的持续升高对反映心室重构的进展具有重要的意义，本研究发现miRNA- 423-5p水平越高组患者NT-proBNP水平越高，Spearman相关分析显示STEMI患者miRNA- 423-5p与NT-proBNP水平呈正相关。表明循环miRNA- 423-5p可能与NT-proBNP一样，可作为反映STEMI患者心室重构严重程度和心力衰竭的一个重要生物学标志物。

表3　血浆miRNA- 423-5p与STEMI患者PCI术后近期预后的关系

本研究对接受直接PCI治疗的STEMI患者随访6个月，miRNA- 423-5p高水平组患者累积无MACE事件生存率(81.71%)明显低于miRNA- 423-5p低水平组的患者(96.25%)。多因素Logistic回归分析示血浆miRNA- 423-5p、NT-proBNP水平是STEMI患者直接PCI术后近期MACE发生的独立预测因子，表明联合检测STEMI患者循环miRNA- 423-5p、NT-proBNP水平有助于判断患者的临床预后。Thum等[10]研究发现受损的心肌细胞miRNA- 423-5p表达上调，所以推测循环miRNA- 423-5p可能来自于缺血坏死心肌细胞的释放。STEMI患者循环miRNA- 423-5p水平越高，可能预示心肌缺血坏死更严重及心室重构进展越迅速。蔡家炉等[11]研究发现miRNA- 423-5p通过增强氧化应激和炎症反应、损伤血管内皮细胞、影响脂质代谢使糖尿病患者微血管并发症显著升高，因此推测miRNA- 423-5p在急性心肌梗死时可能通过上述机制使冠状动脉的微循环受损，导致PCI术后心肌灌注水平降低，从而使患者更容易发生心室重构，致使心力衰竭、心律失常及急性冠脉缺血事件发生率增加，从而影响患者的临床预后。

综上所述，AMI患者循环miRNA- 423-5p水平与心肌梗死后左室重构密切相关，并对接受直接PCI治疗的STEMI患者临床预后有重要的预测价值。但目前对于如何调控心肌梗死患者的miRNAs的水平，在分子水平上对患者进行治疗，仍存在着许多争议，这将成为未来研究的重点。而且本研究存在样本量小、随访时间短等缺陷，其结论仍有待进一步的大型临床随机对照试验证实。

利益冲突：无

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(本文编辑：周白瑜)

Relationship between miRNA-423-5p and left ventricular remodeling in patients with acute myocardial infarction

Jia Min，Liu Zhen，Luo Yi，Yang Jun，Lei Xiaoming，Chen Ping′an

Department of 2ndIntern Med，Guangzhou Chest Hospital，Guangzhou 510095，China (Jia M)；Department of Cardiology，Guangzhou First People′s Hospital，Guangzhou 510180，China (Liu Z，Luo Y，Yang J，Lei XM，Chen PA)Corresponding author：Liu Zhen，Email：LZ71826@163.com

ObjectiveTo investigate the relationship between miRNA-423-5p and left ventricular remodeling in patients with acute myocardial infarction，and the predictive values of miRNA-423-5p for patients′ prognosis. MethodsA total of 248 patients with STEMI who underwent primary percutaneous coronary intervention (PCI) from June 2012 to June 2014 in our department of cardiology were enrolled and followed up. Patients were divided into three groups according to the plasma miRNA-423-5p levels on admission：low-level group (miRNA-423-5p<0.35) including 80 cases；mid-level group (0.36≤miRNA-423-5p≤0.72) including 86 cases and high-level group (miRNA-423-5p>0.72) including 82 cases.NT-proBNP of patients on admission was measured，and patients accept echocardiography examination 7-10 days and 6 months after PCI.Major cardiac adverse events (MACE) of patients in three groups during follow-up were recorded.ResultsCompared with low-level group，patients in mid-level or high-level group had higher NT-proBNP levels，worse indicators of left ventricular remodeling and lower LVEF 6 months after PCI.After 6 months of follow-up，Kaplan-Meiersurvival analysis showed patients in three groups had significantly different cumulative non-events survival rates (96.25%vs. 90.70%vs. 81.71%，Logrank=9.605，P=0.008).BinaryLogisticregression analysis showed that both miRNA-423-5p and NT-proBNP were strong independent predictors of recent prognosis in STEMI patients. ConclusionsMiRNA-423-5p is associated with left ventricular remodeling in patients with AMI and is valuable in predicting recent prognosis of AMI patients.

miRNA- 423-5p；Myocardial infarction；Ventricular remodeling

刘震，电子信箱：LZ71826@163.com

10.3969/j.issn.1007-5410.2016.04.004

广州市科技计划项目(2012Y2-00025)

2016- 05-27)