化学发光免疫分析法检测乙肝病毒感染性标志物的临床应用

杨 梅，晏 红

（四川省江油市第二人民医院，1.检验科，2.输血科，四川　江油　621701）

化学发光免疫分析法检测乙肝病毒感染性标志物的临床应用

杨 梅1，晏 红2

（四川省江油市第二人民医院，1.检验科，2.输血科，四川江油621701）

目的 探讨化学发光免疫分析法检测乙肝病毒感染性标志物的临床应用效果。方法 抽取我院2013年1月至2014年1月接收的疑似乙型肝炎病人800例，采用化学发光免疫分析法（CLIA）和酶联免疫吸附试验法（ELISA）分别检测患者的乙肝病毒血清标志物。结果 HBsAg、HBeAg、HBeAb的检出率CLIA高于ELISA（P＜0.01），两种方法HBsAb、HBcAb的检出率无明显差异（P＞0.05）；低水平HBsAg检测ELISA敏感性低于CLIA；ELISA检出的最低浓度为0.128 IU/mL，CLIA法检出的最低浓度为0.031IU/mL。结论 采用CLIA检测乙肝病毒感染性标志物相比ELISA更准确，可有效应用于乙肝临床诊断和病情动态监测。

化学发光免疫法； 乙肝病毒； 临床应用

乙型肝炎病毒（HBV）简称乙肝病毒，该病毒感染率较高，感染后表现为急慢性肝炎、肝硬化和肝癌等多种临床特征，危害人类身体健康，给家庭带来严重的身心和经济负担，因此及时并准确地监测HBV感染对于防治乙肝意义重大［1］。通常临床上判断乙肝感染主要是根据乙肝的血清标志物，但通过酶联免疫吸附试验（ELISA）对HBV血清标志物检测不能进行定量分析，临床上难以判断患者HBV感染复制状况［2］。化学发光免疫分析将化学发光反应与免疫反应相结合，该方法灵敏度高、特异性强、能进行快速定量分析，弥补了ELISA检测的不足，已逐渐应用于HBV血清学标志物的定量测定［3-4］。本文采用化学发光免疫分析法（CLIA）和酶联免疫吸附试验法（ELISA）分别检测患者的乙肝病毒血清标志物，并对比分析检测结果。

DOI：10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.04.027

收稿日期：2015-10-12；修回日期：2015-11-12

作者简介：杨梅（1974—），女，四川江油人，大专，主管检验技师，研究方向：免疫。Tel：15328117832；E-mail：yangmei_7832@ 163.com

材料和方法

1 临床资料

抽取我院2013年1月至2014年1月接收的疑似乙型肝炎病人800例，其中男性患者424例，女性患者376例；病人年龄在27～78岁之间，平均年龄为43.4±6.5岁。所有患者均早餐空腹抽取静脉血，在室温环境下30min以后开始凝固收缩并逐步析出血清。

2 仪器与试剂

乙肝ELISA诊断检测仪采用上海科华实验系统有限公司KHB-st-360型酶标仪，检验试剂为厦门新创科技有限公司生产。化学发光法检测仪为安图生物LUMO化学发光仪，检测试剂为安图化学发光试剂。由国家卫生部临床检验中心提供乙肝血清标志物的定值参比血清［5］。

3 方法

将提取的800例患者血清平均分为两份，分别运用ELISA和CLIA两种方法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb五项乙肝病毒血清学标志物指标，具体操作方式按照试剂盒说明进行，质控以定值参比血清为标准。

4 判断标准

ELISA和CLIA两种方法判断标准为：测定值≥参考值上限为阳性，否则为阴性。HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的参考值上限分别为0.2ng/mL、10.0mIU/mL、0.05NCU/mL、2.0NCU/mL、1.5NCU/mL［6］。

5 统计学处理

采用SPSS17.0统计学软件对ELISA和CLIA两种方法的检测结果进行两组配对χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

结 果

1 ELISA与CLIA检测HBV血清标志物的结果

800例患者HBsAg、HBeAg、HBeAb的检出率CLIA高于ELISA（P＜0.01），两种方法HBsAb、HBcAb的检出率无明显差异（P＞0.05），见表1。

表　1 ELISA与　CLIA检测　800例患者血清　HBV标志物结果

2 ELISA与CLIA低水平HBsAg检测

500例CLIA检测HBsAg结果为低水平阳性标本，ELISA检测出368例（73.6%），见表2，当HBsAg低水平检测值大于1.0 IU/mL时，ELISA与CLIA方法检测结果相同。小于1.0 IU/mL时ELISA检测结果低于CLIA法（P＜0.01）。

表2　CLIA方法与ELISA检测低水平HBsAg结果

3 CLIA方法检测HBsAg灵敏度

取1.0ng/mL HBsAg定值参比血清，运用阴性血清进行倍比稀释，运用两种方法同时开展灵敏度检测，结果显示：ELISA最低检出浓度为0.128IU/mL，CLIA法最低检出浓度为0.031 IU/mL。

讨 论

目前，准确检测乙肝病毒血清标志物是诊断和治疗乙肝患者的关键，传统的乙肝诊断方法是ELISA检测方法，该方法快速简便，对乙肝的疾病诊断和疗效具有一定作用。但该方法不能进行定量检测，其检测结果会出现不稳定现象。随着医学技术在临床上的发展，需要灵敏度高、特异性强的方法，CLIA法可以进行定量检测，有效弥补ELISA方法检测上的不足，已成为HBV血清学标志物测定的重要手段。

从本文ELISA与CLIA检测患者的乙肝病毒血清标志物结果可以看出，HBsAg、HBeAg、HBeAb的检出率CLIA高于ELISA（P＜0.01），两种方法HBsAb、HBcAb的检出率无明显差异（P＞0.05）。由于CLIA法采用的固相载体为顺磁性微粒，颗粒体积小、表面积大，因此具有更大的反应面积［7］。同时由于标志物的循环利用，可以延长发光时间，增加强度，准确地显示HBV感染进程，提高了检测灵敏度和检出率［8-9］。

本文ELISA检出的HBsAg最低浓度为0.128IU/mL，CLIA法检出的HBsAg最低浓度为0.031IU/mL，低水平HBsAg检测ELISA法敏感性低于CLIA法。检测结果表明通过CLIA法可以对急性乙型肝炎患者更加迅速检测出HBsAg，有效避免低水平HBsAg样本的假阴性及漏检现象。

综上所述，采用化学发光免疫分析法检测乙肝病毒感染性标志物相比ELISA法更准确，可有效应用于乙肝临床诊断和病情动态监测，值得进一步推广和应用。

［1］陈瀑，史静，邹麟.HBsAg定量检测在慢性乙型肝炎自然病程中的意义.中国微生态学杂志，2013，25（8）：928-930.

［2］谭凌卉.ELISA法检测HBV血清标志物影响因素的分析.湖南师范大学学报（医学版），2009，6（2）：20-23.

［3］朱雪娟，张欣欣.乙型肝炎病毒HBsAg定量检测的临床意义.中华肝脏病杂志，2011，19（8）：637-640.

［4］卫晓青，黄秋芳，戴悦，等.低水平HBsAg 3种方法检测结果比较.检验医学与临床，2013，10（3）：283-286.

［5］李琦，尚晓泓.化学发光微粒子免疫分析法与酶联免疫吸附法检测感染性疾病抗原抗体的比较.国际检验医学杂志，2012，33 （7）：846-847.

［6］葛君利，王丽娜.影响ELISA法检测乙型肝炎病毒血清标志物的因素.国际检验医学杂志，2010，31（3）：289-290.

［7］张冬梅.乙肝五项定量检测的应用体会.当代医学杂志，2007，13 （2）：75-76.

［8］王海燕.定量检测乙型肝炎病毒标志物与乙肝病毒DNA的临床意义.医学新知杂志，2010，20（3）：196-199.

［9］黄晶，林花，奚丽，等.化学发光法检测77286例乙型肝炎病毒血清标志物结果分析.临床肝胆病杂志，2010，26（3）：324-325.

（潘子昂编辑）

Chemiluminescence Immunoassay Detection of Hepatitis B Virus Infection and Its Clinical Application

YANG Mei，YAN Hong
（Clinical Laboratory，The Second People’s Hospital of Jiangyou City，Jiangyou 621701，China）

Objective To explore chemiluminescence immunoassay detection of hepatitis B virus（HBV）and its clinical application as HBV infection marker.Methods Samples were extracted from January 2013 to January 2014，a total of 800 suspected hepatitis B patients.Chemiluminescence immunoassay（CLIA）and enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）were used to detect hepatitis B virus.Results Detection rates of HBsAg，HBeAg and HBe，Abby CLIA is higher than by ELISA（P＜0.01）；the detection rates in HBsAb，HBcAb has no obvious difference between two methods（P＞0.05）.Detection of HBsAg at lower concentration by ELISA had lower sensitivity than by CLIA.The minimum detectable concentration by ELISA was 0.128 IU/mL；the lowest detectable concentration by CLIA was 0.031 IU/mL.Conclusion Using chemiluminescence immunoassay to detect hepatitis B virus infection markers is more sensitive than use of ELISA.It is recommended to be applied in clinical diagnosis of hepatitis B and dynamic monitoring.

Chemiluminescence immunoassay； Hepatitis B virus； Clinical application