泥鳅肉骨泥对小鼠体内抗氧化能力的影响

周 杨，刘海英（江南大学食品学院，江苏无锡214122）

泥鳅肉骨泥对小鼠体内抗氧化能力的影响

周 杨，刘海英*
（江南大学食品学院，江苏无锡214122）

研究了泥鳅肉骨泥对小鼠抗氧化指标的影响。将小鼠分为空白组、模型组、泥鳅低剂量组和泥鳅高剂量组四组。除空白组外，其余三组均颈背部皮下注射浓度为500 mg/kg·bw的D-半乳糖溶液，制备小鼠氧化衰老模型，空白组注射相同剂量的生理盐水。将泥鳅制成肉骨泥给小鼠灌胃。以小鼠体重计，给小鼠灌胃100 mg/kg·bw的泥鳅肉骨泥为泥鳅低剂量组，给小鼠灌胃500 mg/kg·bw的泥鳅肉骨泥为泥鳅高剂量组，其余两组均灌胃同剂量生理盐水。动物实验结束后取血清、肝脏检测氧化指标。结果显示，与空白组相比，模型组血清SOD、肝脏CAT活性均显著降低（p＜0.05），而两个泥鳅肉骨泥组与空白组差异不显著。与空白组相比，模型组血清和肝脏MDA含量均显著增加（p＜0.05），而两个泥鳅肉骨泥组与空白组差异不显著。另外，与空白组相比，模型组血糖显著降低（p＜0.05），两个泥鳅肉骨泥组与空白组无显著差异。但是实验也表明，灌胃泥鳅肉骨泥对小鼠高、低密度脂蛋白影响不大，各组之间并无显著差异。

泥鳅，肉骨泥，抗氧化，调节免疫

泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus），是鳅科小型淡水鱼类，在我国大部分地区均有分布。泥鳅肉质细腻，营养丰富。同时，传统中医理论认为，泥鳅具有补中益气、除湿退黄、益肾助阳等药用价值。现代医学证明［1］，泥鳅中富含的亚精胺是精氨酸的前体物质，大量摄入有利于预防心脏病和肝病，能够抗衰老、增强生殖能力。研究认为泥鳅粘液多糖具有一定生理功能。钦传光等证明泥鳅多糖具有免疫作用［2］，降低小鼠的肝损伤［3］，泥鳅粘液有抗炎作用［4］。张晨晓等［5］报道了泥鳅多糖可以促进小鼠脾脏淋巴细胞和巨噬细胞的增殖，还可以抑制肿瘤细胞的增殖。此外，有研究表明酶解泥鳅多肽也具备抗氧化等生理功能。游丽君等［6］通过酶解泥鳅制备抗氧化肽，李莹等［7］通过酶解泥鳅制备了高活性降血压肽。代伟长等［8］证明酶解泥鳅蛋白对酒精致肝损伤有明显的保护作用。上述实验表明，泥鳅是一种食用和药用价值很高的水产品。但是，现阶段我国泥鳅的加工产品品种少，多以调味休闲软罐头食品为主。这些产品成本高，因此市场接受度不高。

肉骨泥是骨泥和肉泥的混合产品，不但具备肉泥口感好、高蛋白、易吸收的特点，还具有骨泥钙和矿物质含量高的优点，是新型高附加值食品。本研究以泥鳅具备高营养的特点出发，将其进一步制备成含骨高钙的泥鳅肉骨泥，通过动物实验检验其对小鼠血液及肝脏抗氧化指标的影响，为泥鳅肉骨泥的应用提供可用依据。

1.1 材料与仪器

泥鳅 购于无锡北桥水产市场；ICR小鼠 苏州希诺赛生物科技有限公司，SPF级；D-半乳糖 上海国药集团，分析纯；总超氧化物歧化酶（T-SOD）测试盒、过氧化氢酶（CAT）测试盒、蛋白定量测试盒、丙二醛（MDA）测试盒 南京建成生物工程研究所。

手动绞肉机 常州欧克厨具销售有限公司；JM-60立式胶体磨 上海帅发包装印刷设备有限公司；匀浆器 德国普鲁克公司；DZQ真空包装机 上海尤溪机械设备有限公司；灭菌锅 上海申安医疗器械厂。

1.2 实验方法

1.2.1 泥鳅肉骨泥的制备工艺流程

1.2.2 工艺要点

1.2.2.1 预处理 鲜活泥鳅购入后用清水冲洗，去头去内脏，切成长2 cm的小段。

1.2.2.2 制备肉骨泥 泥鳅段上蒸锅蒸制30 min，绞肉机绞碎至5 mm颗粒，之后将颗粒置于胶体磨破碎至100目，真空装袋，采用高温高压灭菌，温度121℃，灭菌20 min。为了动物实验方便，故将产品冷冻干燥备用。

1.2.3 动物实验

1.2.3.1 小鼠氧化模型的制备 实验用9～11周龄雄性ICR小鼠60只，在温度为22～27℃，日温差≤3℃，相对湿度为50%～60%条件下的实验动物中心暂养一周。一周后称体重并随机分为4组：空白组、模型组、泥鳅低剂量组、泥鳅高剂量组。每组15只，分三笼饲养，各组均自由摄食饮水。

除空白组小鼠外其余3组均每日颈背部皮下注射5%D-半乳糖溶液，按小鼠体重注射剂量为500 mg/kg·bw，空白组注射相同剂量的生理盐水。泥鳅低剂量组每日灌胃100 mg/kg·bw泥鳅肉骨泥，泥鳅高剂量组每日灌胃500 mg/kg·bw泥鳅肉骨泥。泥鳅肉骨泥要配制成悬浊液，在灌胃前均需再次匀浆，空白组和模型组均灌胃相同剂量的生理盐水。每周对小鼠体重进行称量。

动物实验进行42 d后将所有小鼠禁食不禁水12 h，在一个相对封闭空间内用棉花沾取乙醚对小鼠进行麻醉，摘眼球取血后用颈椎脱臼法处死小鼠，取肝脏备用。取脾脏进行准确称量，以小鼠脾脏湿重/体重量（mg/g）来表示小鼠的脾脏指数。

1.2.3.2 泥鳅肉骨泥对小鼠生理指标的影响 取得血液4℃静置后，3000 r/min离心15 min分离血清。一部分血清用于检测SOD和MDA值，用南京建成试剂盒测试，方法依据试剂盒说明书。另一部分血清用于测定血清中血糖、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量，使用FH-400全自动血液生化分析仪测定。

取新鲜肝脏用生理盐水稀释制得10%的匀浆液，3000 r/min离心15 min后取上清液，用于检测SOD、CAT和MDA值。用南京建成试剂盒测试，方法依据试剂盒说明书。

1.2.4 统计学分析 各数据以平均值±标准差表示，采用SPSS 18.0进行ANOVA单因子方差分析和Ducan’s多重检验，p＜0.05表示差异有显著性。

2 结果与分析

2.1 小鼠体重及脾脏指数

2.1.1 各组实验小鼠体重变化 如表1所示，小鼠实验前后体重各组之间差异变化并不显著，增长趋势差异也不明显。

2.1.2 泥鳅肉骨泥对小鼠脾脏指数的影响 由表2可知，与空白对照组相比，模型组小鼠脾脏指数显著降低（p＜0.05）。泥鳅低剂量组和泥鳅高剂量组脾脏指数与空白组差异不显著（p＞0.05），而与模型组相

比显著升高（p＜0.05）。

表1 实验前后各组小鼠体重的变化（±s）Table1 The change of mice body weight（±s）

表1 实验前后各组小鼠体重的变化（±s）Table1 The change of mice body weight（±s）

组别 泥鳅肉骨泥灌胃剂量（mg/kg bw） 实验前体重（g） 实验后体重（g） 体重增长量（g）空白组 0 38.85±1.52 44.93±1.93 6.07±2.22模型组 0 38.95±2.38 43.42±2.59 4.47±3.06泥鳅低剂量组 100 39.01±2.11 43.98±3.05 4.97±2.55泥鳅高剂量组 500 38.31±1.85 43.93±1.93 5.63±2.00

表2 实验前后小鼠脾脏指数的变化（±s）Table2 The change of mice spleen index（±s）

表2 实验前后小鼠脾脏指数的变化（±s）Table2 The change of mice spleen index（±s）

注：字母不同表示处理间有显著性差异（p＜0.05）；表3～表8同。

组别 泥鳅肉骨泥灌胃剂量（mg/kg bw）脾脏指数（mg/g）空白组 0 4.13±0.93a模型组 0 3.19±0.28b泥鳅低剂量组 100 4.46±1.68a泥鳅高剂量组 500 4.81±1.41a

2.2 小鼠血清生化指标

2.2.1 泥鳅肉骨泥对小鼠血清血糖含量的影响 由表3可知，与空白对照组相比，模型组小鼠血清血糖含量显著降低（p＜0.05），显示出低血糖症状。泥鳅低剂量组和泥鳅高剂量组变化不显著（p＞0.05）。与模型组相比，泥鳅高剂量组血清血糖含量显著升高（p＜0.05），泥鳅低剂量组变化不显著（p＞0.05）。

表3 实验后小鼠血清血糖含量的变化（±s）Table3 The change of GLU content in mice plasma（±s）

表3 实验后小鼠血清血糖含量的变化（±s）Table3 The change of GLU content in mice plasma（±s）

组别 泥鳅肉骨泥灌胃剂量（mg/kg bw）血糖含量（mmol/L）空白组 0 3.36±0.91a模型组 0 1.90±0.46b泥鳅低剂量组 100 2.71±1.39ab泥鳅高剂量组 500 3.27±1.37a

2.2.2 泥鳅肉骨泥对小鼠血清高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的影响 由表4可知，经过模型制作及泥鳅肉骨泥饲喂，各组小鼠血清中高密度脂蛋白及低密度脂蛋白含量变化并不显著（p＞0.05），即D-半乳糖模型对小鼠血清中高密度脂蛋白及低密度脂蛋白含量无显著影响。

表4 实验后小鼠血清高密度脂蛋白及低密度脂蛋白含量的变化（±s）Table4 The change of HDL and LDL content in mice plasma （±s）

表4 实验后小鼠血清高密度脂蛋白及低密度脂蛋白含量的变化（±s）Table4 The change of HDL and LDL content in mice plasma （±s）

组别 泥鳅肉骨泥灌胃剂量（mg/kg bw）高密度脂蛋白（mmol/L）低密度脂蛋白（mmol/L）空白组 0 4.07±0.58 0.66±0.19模型组 0 4.24±0.96 0.76±0.26泥鳅低剂量组 100 3.88±0.95 0.73±0.43泥鳅高剂量组 500 4.55±0.74 0.75±0.24

2.3 小鼠抗氧化指标

2.3.1 泥鳅肉骨泥对小鼠血清SOD的影响 由表5知，实验42 d后，与空白对照组相比，模型组小鼠血清SOD活性显著降低（p＜0.05），泥鳅低剂量组和泥鳅高剂量组SOD活性与空白组相比不显著（p＞0.05）。而与模型组相比，泥鳅低剂量组和泥鳅高剂量组小鼠血清SOD活性显著升高（p＜0.05）。

表5 实验后小鼠血清SOD活性的变化（±s）Table5 The change of SOD activities in mice plasma（±s）

表5 实验后小鼠血清SOD活性的变化（±s）Table5 The change of SOD activities in mice plasma（±s）

组别 泥鳅肉骨泥灌胃剂量（mg/kg bw）SOD活性（U/mL）空白组 0 205.73±20.15a模型组 0 173.81±15.12b泥鳅低剂量组 100 191.59±14.26a泥鳅高剂量组 500 199.08±19.68a

2.3.2 泥鳅肉骨泥对小鼠血清MDA的影响 由表6所示，与空白对照组相比，模型组小鼠血清MDA含量显著增加（p＜0.05）。而与空白对照组相比，泥鳅高剂量组和低剂量组小鼠血清MDA含量无显著区别（p＞0.05）。

表6 实验后小鼠血清MDA含量的变化（±s）Table6 The change of MDA content in mice plasma（±s）

表6 实验后小鼠血清MDA含量的变化（±s）Table6 The change of MDA content in mice plasma（±s）

组别 泥鳅肉骨泥灌胃剂量（mg/kg bw）MDA含量（nmol/mL）空白组 0 16.68±1.57b模型组 0 18.69±1.93a泥鳅低剂量组 100 17.64±1.46ab泥鳅高剂量组 500 16.56±1.44b

2.3.3 泥鳅肉骨泥对小鼠肝脏SOD和CAT的影响 由表7可知，小鼠肝脏SOD数据各组之间变化并不显著。相反，与空白对照组相比，模型组小鼠肝脏CAT活性显著降低（p＜0.05），而泥鳅低剂量组和泥鳅高剂量组CAT活性变化不显著（p＞0.05）。

表7 实验后小鼠肝脏SOD和CAT活性的变化（±s）Table7 The change of SOD and CAT activities in mice liver（±s）

表7 实验后小鼠肝脏SOD和CAT活性的变化（±s）Table7 The change of SOD and CAT activities in mice liver（±s）

组别 泥鳅肉骨泥灌胃剂量（mg/kg bw）SOD活性（U/mgprot）CAT活性（U/mgprot）空白组 0 378.52±59.53 19.61±3.68a模型组 0 340.49±39.51 16.35±2.05b泥鳅低剂量组 100 360.48±32.26 17.34±3.24ab泥鳅高剂量组 500 348.68±40.44 18.11±3.56ab

2.3.4 泥鳅肉骨泥对小鼠肝脏MDA的影响 由表8可知，与空白对照组相比，模型组小鼠肝脏MDA含量显著增加（p＜0.05），而泥鳅低剂量组和泥鳅高剂量

组MDA含量差异均不显著（p＞0.05）。与模型组相比，泥鳅低剂量组和泥鳅高剂量组MDA含量显著减少（p＜0.05）。

表8 实验后小鼠肝脏MDA含量的变化（±s）Table8 The change of MDA content in mice liver（±s）

表8 实验后小鼠肝脏MDA含量的变化（±s）Table8 The change of MDA content in mice liver（±s）

组别 泥鳅肉骨泥灌胃剂量（mg/kg bw）MDA含量（nmol/mgprot）空白组 0 1.04±0.20b模型组 0 1.32±0.34a泥鳅低剂量组 100 1.05±0.28b泥鳅高剂量组 500 1.07±0.11b

3 讨论

3.1 小鼠体重和脾脏指数

由于所用ICR小鼠实验前为9～11周龄，正常此周龄雄性小鼠体重基本趋于稳定，增长幅度并不大，因此实验结束后小鼠体重增长不大，各组之间增长趋势并不显著。脾脏作为机体重要的免疫器官控制抗体和免疫细胞的生成，是免疫系统的重要组成部分［9］，脾脏指数的大小直观反映了机体的免疫能力。本实验中，长期注射D-半乳糖使实验组小鼠产生氧化应激，较长时间的应激造成了机体的氧化损伤，使机体免疫力下降，因此模型组小鼠脾脏指数显著低于空白组。但灌胃泥鳅肉骨泥的实验组，脾脏指数恢复正常。证明泥鳅肉骨泥产品对小鼠氧化损伤起到一定的缓解作用，能够增强免疫力。

泥鳅中含有泥鳅多糖及多肽等多种活性成分，多糖类物质对免疫系统有重要的调节作用，能够激活巨噬细胞，提高机体对抗病毒的能力。钦传光等［10］给昆明小鼠连续灌胃泥鳅多糖30 d，采用常规方法检测小鼠各项免疫指标，结果证明小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力显著增强，腹腔巨噬细胞和抗体生成细胞能力均显著增强，从而证明泥鳅多糖具有免疫调节作用。而本研究证明泥鳅全骨泥也具备较强的增强免疫力能力。

3.2 小鼠血清生化指标

血糖作为机体提供能量的主要成分，在机体受到一定应激刺激时，会消耗更多的能量来抵御外界的应激，这就会造成血清中血糖含量的降低［11］。实验中，模型组血糖含量显著降低，说明机体为了抵抗D-半乳糖的应激消耗了部分能量，而灌胃了泥鳅肉骨泥的小鼠，样品中的有效成分抵抗了D-半乳糖的应激作用，减少了对能量的需求，使得机体并未有较多的能量消耗。实验显示泥鳅低剂量组和高剂量组小鼠血糖均显示出一定的恢复。

3.3 小鼠抗氧化指标

利用D-半乳糖制作动物的衰老模型的科学性在较早便得到了证实［12］，近来这种造模技术也越来越成熟，运用的越来越广泛［13-15］。模型组小鼠体内会产生大量的自由基，这种自由基的堆积使得机体脂质过氧化水平升高，导致其直接产物丙二醛（MDA）含量增加，对机体造成损伤。超氧化物歧化酶［16］（SOD）是一种重要的自由基清除酶，可以催化超氧化物阴离子发生歧化反应，从而生成过氧化氢，细胞中存在的过氧化氢酶［17］（CAT）又会分解过氧化氢，防止自由基对细胞的毒害。

SOD、CAT和MDA均与机体的抗氧化反应有关，它们的活性及含量的高低与机体抗氧化能力有着密不可分的关系。SOD和CAT活性的降低代表着机体受到了氧化损伤导致抗氧化能力降低，使得脂质过氧化产物MDA含量增加。

本实验中，模型组小鼠的血清SOD及肝脏CAT均显示出明显的降低趋势，这说明D-半乳糖对它们的机体造成了一定的氧化损伤，破坏了其氧化酶系统的稳定性。灌胃泥鳅组与模型组相比，SOD及CAT活性有了一定的升高，证明泥鳅的有效成分对这种氧化损伤起到一定缓解作用。模型组血清及肝脏中MDA含量均显著高于空白组，说明模型组小鼠脂质过氧化水平升高。而灌胃泥鳅组MDA含量又明显降低甚至恢复到正常水平，证明泥鳅肉骨泥对小鼠的氧化损伤起到一定缓解作用。

此前有研究认为泥鳅中含有的有效成分泥鳅多糖是一种游离性的中性多糖，在抗氧化、清除机体自由基方面有显著的作用［18-19］。李迎军等［20］通过给小鼠灌胃白酒造成急性酒精性肝损伤模型，模型组小鼠连续给药泥鳅粉3周，检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶活性明显降低，肝组织中丙二醛含量显著减少，谷胱甘肽过氧化物酶水平显著提高，证明泥鳅粉具有抗酒精性肝组织损伤，抗氧化及保肝护肝作用。而泥鳅全骨泥也具备较强的抗氧化功能，为本研究首次证明。

4 结论

本实验初步证明了泥鳅肉骨泥产品对衰老小鼠的血清和肝脏中的抗氧化性均具备一定增强效应，并可以提高脾脏指数，提高免疫力。同时，食用泥鳅肉骨泥可以恢复水牢小鼠的血糖水平，明显提高血清和肝脏中的抗氧化酶水平，降低脂质氧化水平。本研究可为泥鳅肉骨泥产品的开发及泥鳅的功能性研究提供有用的依据。

［1］张竹青，李正友，胡世然，等.人工养殖泥鳅含肉率及肌肉营养成分分析［J］.贵州农业科学，2010（5）：159-162.

［2］钦传光，黄开勋，徐辉碧.泥鳅多糖对小鼠脾细胞免疫应答的影响（英文）［J］.中国药理学报：英文版，2002（6）：56-60.

［3］商萌萌，凌去非，汪务诚，等.泥鳅不同部位冻干粉对小鼠四氯化碳化学性肝损伤保护作用［J］.辽宁中医药大学学报，2013（1）：53-54.

［4］钦传光，黄开勋，徐辉碧.泥鳅及其粘液抗炎作用的实验研究［J］.中国药学杂志，2000，35（12）：846-847.

［5］张晨晓，黄开勋.泥鳅多糖免疫调节和抗肿瘤活性的机理研究［A］.中国生物化学与分子生物学会糖复合物专业委员会、中国生物工程学会糖生物工程专业委员会.2008年全国糖生物学学术会议论文摘要［C］.中国生物化学与分子生物学会糖复合物专业委员会、中国生物工程学会糖生物工程专业委员会：2008：1.

［6］游丽君.泥鳅蛋白抗氧化肽的分离纯化及抗疲劳，抗癌功效研究［D］.广州：华南理工大学，2010.

［7］李莹.泥鳅蛋白源ACE抑制肽的酶法制备及其降压活性研究［D］.南京：南京农业大学，2012.

［8］代伟长.酶解泥鳅蛋白对酒精致肝损伤的保护作用［J］.长春中医药大学学报，2010，26（4）：490-491.

［9］徐明，鲁建国，马庆久.脾神经与脾脏免疫功能研究进展［J］.现代生物医学进展，2010（11）：2177-2179.［10］钦传光，黄开勋，徐辉碧.泥鳅多糖的免疫作用研究［J］.中国药学杂志，2002，37（8）：588-591.

［11］赵文竹.玉米须功能因子活性评价及其降血糖机理研究［D］.长春：吉林大学，2014.

［12］李崭，刘仁慧，康学，等.肾虚衰老模型的建立及其与D-半乳糖衰老模型的比较研究［J］.中国中药杂志，2012，16：2435-2438.

［13］黄双.D-半乳糖致小鼠衰老模型剂量和给药方式探讨［D］.南宁：广西医科大学，2014.

［14］邢秋娟，施杞，王拥军.D-半乳糖诱导衰老动物模型的机制及其在中医药方面的应用［J］.上海中医药大学学报，2010 （3）：93-98.

［15］魏洁，李开济，赵毓芳，等.赖氨大黄酸对D-半乳糖致衰老模型小鼠的肾脏保护作用及其作用机制［J］.吉林大学学报（医学版），2015，41（4）：680-684.

［16］孟凡丽，苏晓田，郑毅男.人参皂苷Rb_3对糖尿病模型小鼠的降血糖和抗氧化作用［J］.华南农业大学学报，2013（4）：553-557.

［17］王君巧，聂少平，余强，等.黑灵芝多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节和抗氧化作用［J］.食品科学，2012（23）：274-277.

［18］张良栓.泥鳅多糖抗氧化及抗蛋白质非酶糖基化活性研究［D］.哈尔滨：哈尔滨医科大学，2010.

［19］Zhang L S，Wang X，Dong L L.Antioxidation and antiglycation of polysaccharides from Misgurnus anguillicaudatus［J］.Food chemistry，2011，124（1）：183-187.

［20］李迎军，于海玲，张红英.泥鳅粉对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用［J］.延边大学医学学报，2011（3）：172-174.

The Misgurnus anguillicaudatus meat bone paste on antioxidant ability in mice

ZHOU Yang，LIU Hai-ying*
（School of Food Science and Engineering，Jiangnan University，Wuxi 214122，China）

The effects of Misgurnus anguillicaudatus meat bone paste on antioxidant parameters in mice were investigated in this study.Mice were randomly divided into four groups：control group，model group，low-dose and high-dose misgurnus anguillicaudatus meat bone paste groups.The 500 mg/kg·bw D-galactose were injected subcutaneously into the naps of mice to induce aging model except the control group.Mice in the control group were injected with the same dose of physiological saline.Misgurnus anguillicaudatus were made into meat bone paste.The mice of low-dose and high-dose groups were given by gavage with Misgurnus anguillicaudatus meat bone paste solutions of 100 mg/kg·bw and 500 mg/kg·bw respectively.Meanwhile，mice in control and model groups were given by gavage with the same dose of physiological saline.Plasma and liver samples were used for determination of antioxidant parameters.In the model group，the activities of plasma superoxide dismutase（SOD）and liver catalase（CAT）were significantly decreased compared with the control group（p＜0.05），and there were no significant differences among the control group，low-dose and highdose groups.In the model group，the content of malondialdehyde（MDA）in plasma and liver were significantly increased compared with the control group（p＜0.05），while there were no significant differences among the control group，low-dose and high-dose groups.Plasma glucose concentrations in the model group were significantly lower than in the control group（p＜0.05），and there were no significant differences among the control group，low-dose and high-dose groups.While this experiment also indicated that giving Misgurnus anguillicaudatus meat bone paste had little effect in high and low density lipoprotein in mice，no significant differences were found among the four groups.

Misgurnus anguillicaudatus；meat bone paste；antioxidant；immune regulation

TS254.9

A

1002-0306（2016）08-0347-05

10.13386/j.issn1002-0306.2016.08.065

2015-09-29

周杨（1991-），女，硕士研究生，研究方向：食品科学，E-mail：zhouy_email@163.com。

*通讯作者：刘海英（1973-），男，博士，副教授，研究方向：水产品加工及贮藏工程，E-mail：liuhaiying@jiangnan.edu.cn。

苏北科技专项资金（BN2014054）。