多参数流式细胞术在慢性淋巴细胞白血病中的应用
2016-09-08侯金霞李志平丁国胜魏莲花丁进芳甘肃省人民医院甘肃兰州730000
侯金霞,李志平,丁国胜,魏莲花,丁进芳(甘肃省人民医院,甘肃 兰州 730000)
多参数流式细胞术在慢性淋巴细胞白血病中的应用
侯金霞,李志平,丁国胜,魏莲花,丁进芳
(甘肃省人民医院,甘肃 兰州 730000)
目的 分析多参数流式细胞术免疫分型在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中的应用价值,为临床提供可靠的诊断依据。方法 收集我院2011年3月至2016年3月初诊CLL患者60例(CLL组),同时以60例增生性贫血患者为对照(贫血组)。使用多参数流式细胞术测定其免疫型,评价免疫型特征。结果 CLL组患者HLA-DR+、CD5+和CD22+均为45例,CD19+38例(63.33%),CD20+46例(76.67%),CD23+35例(58.33%),CD11c+22例(36.67%),CD38+7例(11.67%),CD11b+28例(46.67%),与贫血组比较,差异有显著性。但CD10和FMC7在CLL组和贫血组均无阳性表达,差异无显著性。结论 多参数流式细胞术免疫分型检测CLL相关抗原,可协助临床准确及时诊断和评估预后。
慢性淋巴细胞白血病;多参数流式细胞术;免疫分型
慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)是一种以体积小而形态成熟的淋巴细胞在外周血、骨髓和外周淋巴器官中克隆性增殖为特点的恶性疾病。2008年,WHO造血与淋巴组织肿瘤分类[1]中定义CLL均为B细胞型。该病在欧美国家发病率很高,近年来,随着先进技术的应用和对该病诊断水平的提高,我国患病率呈逐年上升趋势[2]。本研究利用多参数流式细胞术检测CLL患者免疫型表达情况,以协助临床诊断和评估预后。
1 对象与方法
1.1对象
收集我院2011年3月至2016年3月初诊CLL患者60例(CLL组),男39例,女21例,年龄38~82岁,中位年龄63岁,>60岁者44例。以60例临床确诊为增生性贫血患者为对照(贫血组),男40例,女20例,中位年龄56岁。CLL诊断符合3版《血液病诊断及疗效标准》[3]。鉴别诊断主要参考Moreau等[4]提出的免疫表型积分系统,见表1,典型CLL积4~5分。本研究经医院伦理委员会批准,纳入患者均签署知情同意书。
表1 CLL免疫表型积分系统
1.2研究方法
1.2.1试剂与仪器鼠抗人单克隆抗体CD45-PE、CD38-PE、CD20-FITC、CD10-FITC、CD5-FITC、FMC7-FITC、CD19-PE、CD3-PE、CD22-PE、CD23-APC、CD33-APC、HLA-DR-APC,阴性对照抗体小鼠IgG1-FITC、IgG1-PE、IgG1-Percp、IgG1-APC试剂和FACS Calibur多参数四色流式细胞仪(美国Becton Dickinson公司),光学显微镜BX-53 limps(日本Olympus公司)。
1.2.2方法 经无菌骨髓穿刺取0.2 ml骨髓液,涂片,瑞—姬氏染色,光镜下进行骨髓细胞形态学实验室诊断。另取2~4 ml骨髓液置于肝素钠抗凝管,用四色流式细胞仪的Cell Quest软件获取每管10 000个细胞进行分析,对数取样,通过CD45设门圈定淋巴细胞群,阳性水平根据FITC-/PE-/Per-cp-/APC-自发荧光范围确定。流式细胞术检测结果以荧光强度<102为阴性,102~103为弱阳性,>103为强阳性,膜抗原≥20%为表达阳性。
1.3统计学分析
采用病例对照研究,以Excel软件和SPSS 16.0进行统计学分析。计数资料以百分率表示,CLL组与贫血组免疫分型结果采用Fisher确切概率法。以P<0.05为差异有显著性。
2 结果
流式细胞术检测发现,HLA-DR+59例(98.33%),CD5+和CD22+均为45例(75.00%),CD19+38例(63.33%),CD20+46例(76.67%),CD23+35例(58.33%),CD11c+22例(36.67%),CD38+7例(11.67%),CD11b+28例(46.67%),与贫血组比较,差异有显著性(P<0.05)。但是,CD10和FMC7在CLL组和贫血组均无阳性表达,差异无显著性(P=1.000)。见表2。
3 讨论
(1)CLL是一种恶性度较低的单克隆淋巴细胞增殖性疾病,临床和病理表现往往有很大的异质性。近年来,随着我国人口老龄化,CLL发病率有逐年上升趋势,并且随着年龄的增长而增加。本研究发现,我院初诊的60例CLL患者中位年龄为63岁,其中>60岁44例,也是以老年人为主。
(2)流式细胞术白血病免疫分型是一种定量分析技术,利用荧光标记的单克隆抗体作为分子探针,多参数分析白血病细胞的免疫表型,由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及分化程度。本研究采用CD45设门圈定淋巴细胞群,进而对其免疫型进行分析,由于CLL患者的淋巴细胞具有特征性表型[5],B-CLL起源于B淋巴细胞恶性转化和克隆,按照WHO诊断标准[1],我们纳入的CLL患者均为B细胞型,即CD19+、CD5+,同时表达CD23、CD20,弱表达或不表达CD22或CD79b,不表达FMC7。本次研究发现,59例(98.33%)患者表达HLA-DR,高表达CD5、CD22、CD19、CD20、CD23、CD11c、CD11b,分别为45例(75.00%)、45例(75.00%)、38例(63.33%)、46例(76.67%)、35例(58.33%)、22例(36.67%)、28例(46.67%)。CD5+、CD23+是CLL的典型特征,本实验中二者双阳性为35例(58.33%),与贫血组比较,差异有显著性。同时,CD10和FMC7在CLL组和贫血组均无阳性表达,差异无显著性,与姚建新等[6]的研究结果基本一致。
表2 两组免疫分型结果比较[n(%)]
(3)CD38表达于前体B细胞,是一种促使白细胞活化和增殖的II类跨膜糖蛋白,是CLL侵袭性的重要标志,具有独立的预后意义。目前大部分研究认为CD38表达与CLL预后呈负相关[7],CD38+的CLL患者生存期明显缩短,显示出明显的激活和疾病进展状态。本次实验中由于CD38+的CLL患者仅7例(11.67%),因此需扩大检测标本量进一步验证其预后意义。
(4)总之,多参数流式细胞术可以协助临床医师对CLL进行诊断、评估预后,具有重要的临床意义,有利于进一步研究不同临床分期和药物治疗前后其免疫型变化,促进对CLL的认识与评价。
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R551.2
B
1671-1246(2016)15-0143-02