实验猕猴细菌性痢疾的治疗

王　宏,韦秋奖,陈智岗,江海天

(1.云南中科灵长类生物医学重点实验室,云南昆明650550;2.昆明亚灵生物科技有限公司,云南昆明650550)

实验猕猴细菌性痢疾的治疗

王宏1,2,韦秋奖2,陈智岗1,江海天2

(1.云南中科灵长类生物医学重点实验室,云南昆明650550;2.昆明亚灵生物科技有限公司,云南昆明650550)

细菌性痢疾是猕猴常见的一种消化道传染病,具有很强的传染性,发病快,病程短,死亡率高,若不及时采取有效的治疗措施,患病猕猴将很快死亡,严重影响了实验猕猴的品质.本文通过对细菌的分离培养与鉴定、结合药敏试验并采取积极有效的治疗措施,结果表明,头孢他啶和左氧氟沙星治疗细菌性痢疾效果最佳,治愈率达到100%,诺氟沙星和环丙沙星也有一定的疗效,治愈率分别达到88.89%和77.78%.本文研究对实验猕猴的生产培育具有重要的生产意义和科学价值.

恒河猴;志贺菌;痢疾;治疗

猕猴(Macaca mulatta)作为重要的实验动物之一,在生物医学研究中具有极其重要的作用,随着生命科学的快速发展,科研活动中对实验猕猴的品质要求愈来愈高.细菌性痢疾是猕猴最常见的一种消化道传染病,是志贺菌属(痢疾杆菌)引起的肠道传染病,该病传播迅速,病程短,死亡率高,易复发,若不及时采取有效的治疗措施,患病猕猴将很快死亡,严重影响了实验猕猴的品质,尤其在实验过程中,猕猴突发细菌性痢疾,将直接影响试验结果.因此,建立有效检测猕猴细菌性痢疾的方法,并采取积极有效的治疗措施,具有重要的生产意义和科学价值.

1　材料与方法

1.1患病猕猴临床症状及病理表现猕猴细菌性痢疾临床症状为腹泻,粪便呈脓血黏液状,精神和食欲差,患病中后期脱水现象明显,皮肤松弛、弹性差,眼睛深陷.患病猕猴剖检可发现病变主要在盲肠和结肠上,肠壁增厚、水肿、出血,有的出现溃疡病灶(见中插彩版图1A);有的肠黏膜脱落,肠内充满暗红色胶胨样内容物(见中插彩版图1B),肠系膜淋巴结充血和水肿.镜检发现患有痢疾的猕猴肠壁内腔白细胞增多(见中插彩版图1C),尤其是嗜中性粒细胞增多明显,伴有脱落的上皮细胞.

1.2诊断试剂

1.2.1志贺菌多价诊断血清兰州生物制品研究所有限责任公司生产.

1.2.2药敏纸片北京天坛药物生物技术开发公司生产.

1.2.3沙门菌-志贺菌琼脂培养基(S.S.琼脂培养基)杭州天和微生物试剂有限公司生产.

1.2.4三糖铁琼脂(TSI)杭州天和微生物试剂有限公司生产.

1.3诊断方法细菌的分离培养及鉴定.获取表现为消化道疾病患病猕猴的新鲜粪便262份,分区划线法在S.S.琼脂培养基上接种,37℃培养24 h,志贺菌在S.S.培养基上形成无色透明、圆形、扁平或微凸起,光滑湿润,边缘整齐,直径约2 mm的菌落.在生物安全柜内用接种针挑取2～3个上述可疑菌落接种TSI培养基,置37℃培养18～ 24 h,可见斜面不产酸,底层产酸不产气.取一片洁净的载玻片,滴一小滴志贺菌多价诊断血清于载玻片上,用接种环取TSI培养基上可疑菌落和诊断血清混合,并以生理盐水作为对照,搅拌均匀后判定结果,如果在1 min内呈现明显凝集者为阳性,呈均匀混浊者为阴性.

1.4药敏试验用棉拭子沾取混合志贺菌的菌液,均匀涂布在营养琼脂平板上,然后用镊子夹取药敏纸片按2 cm距离放置在营养琼脂平板上后轻压,药敏纸片包括诺氟沙星、阿莫西林、青霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢他啶、庆大霉素、头孢唑啉和氨苄西林,将标签贴好后于37℃培养18～24 h,最后用直尺测量每一种抗生素圆盘的直径,根据说明书判断抗生素敏感性.

1.5治疗方案

1.5.1对患有细菌性痢疾,且脱水明显的病猴,采用补液、抗生素治疗为主.一般利用5%葡萄糖氯化钠+抗生素,0.9%生理盐水+维生素C静脉滴注.

1.5.2对患有细菌性痢疾,处于早期且脱水不明显的病猴,采取抗生素治疗及辅助疗法相结合.静脉输注0.9%生理盐水+抗生素,肌肉注射维生素C注射液.

1.5.3对少数反复发病,且采取治疗的患病猕猴将慢慢转变成慢性肠炎,此类病猴需经长时间的食物调理,并结合粪便培养和药敏试验,视病情轻重采取适当的治疗措施.

2　结果

2.1粪便培养及鉴定结果通过对262份表现为消化道疾病患病猴的粪便样本进行分离培养及鉴定,检测出患有志贺菌痢疾的病猴有38只,检出率为14.5%.

2.2药敏试验结果通过药敏试验,对志贺菌菌株显示敏感的药物有诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星和头孢他啶,其中头孢他啶对志贺菌菌株最敏感(敏感率为92.11%);中度敏感药物有庆大霉素和头孢唑啉;不敏感药物有氨苄西林、阿莫西林和青霉素,具体结果见表1.

表1　志贺菌菌株药敏试验

2.3治疗效果根据药敏试验结果,对患有细菌性痢疾的病猴采用敏感药物予以治疗,结果表明,头孢他啶和左氧氟沙星治疗效果最佳,治愈率可以达到100%,治疗时间持续5 d即可达到满意效果;而诺氟沙星和环丙沙星也有一定的疗效,治愈率分别达到88.89%和77.78%,治疗时间需持续7 d左右.对患有志贺菌痢疾的38只病猴进行治疗分析,总治愈率达到92.11%(见表2).

表2　敏感抗生素的治疗

3　讨论

细菌性痢疾是猕猴最普遍的一种肠道疾病之一,传播途径从口腔进入消化道,人类带菌者是主要的传播源,通过苍蝇或蚊子等传染给健康的猕猴,致使猕猴发病,还可造成重复感染或再感染而反复多次导致猕猴发病.实验猕猴在繁育过程中,细菌性痢疾的感染率很高,在过分拥挤和卫生状况差的情况下,猕猴痢疾发病率高达100%,死亡率达60%以上[1-3],因此对患病带菌猴的诊断除早期治疗以及消灭传染源外,还应采取切断传播途径等综合措施.对患病动物进行严格的隔离和消毒处理,防止疾病交叉感染,应每天上午和下午对笼舍、地面、粪便等饲养环境进行人工喷雾消毒,消毒处理应持续2个星期;与此同时,还应对食物(青料、水果、膨化饲料等)彻底做好清洁卫生以及防蝇防鼠等工作,饮用水也应适当投放漂白粉消毒.

通过药敏试验结果显示,对志贺菌敏感的药物有诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星和头孢他啶,中度敏感的药物有庆大霉素、头孢唑林,而不敏感药物有氨苄西林、阿莫西林和青霉素.唐东红等[4]的药敏试验表明,头孢唑啉药物对志贺菌敏感,而庆大霉素、青霉素对志贺菌不敏感.杨智勇等[5]研究发现,环丙沙星对拉脓血便的猴子无效,而氧氟沙星对治疗猕猴痢疾疗效一般.这些不一致的研究结果,可能与不同的养殖场选择不同的抗生素且长期使用有关.同时,Goossens等[6]的研究表明,细菌暴露于抗生素的时间越长,其获得耐药性的机会就越大,赵克雷等[7]的研究也表明了耐药基因的水平传播和抗生素环境的选择压使不耐药菌株被淘汰,从而产生越来越多的耐药菌株.本文通过药敏试验,对患有细菌性痢疾的病猴采用对志贺菌敏感的抗生素治疗,总治愈率达到92.11%,略低于唐东红等[4]97.9%的治愈率,因此,在治疗猕猴细菌性痢疾时,临床用药结合药敏试验结果来进行药物选择,意义重大.本研究结果为规模化实验猕猴养殖场防治细菌性痢疾提供了科学依据.

细菌性痢疾一般宜采取抗菌、消炎、补液和纠正酸碱平衡等方法给予治疗,每天应多次仔细观察猴群的粪便、精神状态、采食情况,一旦发现病猴,马上隔离并及时采用适当的抗生素静脉输注治疗,同时,消化道疾病增加维生素C的补充,能有效加速肠道疾病的愈合且能提高患病猕猴的免疫力,将会大大提高患病猕猴的治愈率.

[1]Hale T L.Genetic basis of virulence in Shigella species[J].Micro⁃biol Rev,1991,55(2):206-224.

[2]Sansonetti P I.Shigella plays dangerous games[J].ASM News,1999,65(9):612-617.

[3]Philpott D J,Edgeworth J D,Sansonetti P J.The pathogenesis of Shigella flexneri infection:lessons from in vitro and in vivo stud⁃ies[J].Philosophical Transactions of the Royal Society of London,2000,355(1397):575-586.

[4]唐东红,孙晓梅,匡德宣,等.实验恒河猴猴群暴发细菌性痢疾的治疗及控制[J].中国实验动物学杂志,2002,12(4): 229-231.

[5]杨智勇,艾伟昌,申洁梅,等.猕猴痢疾治疗初探[J].河南林业科技,2001,21(1):34-35.

[6]Goossens H,Ferech M,Stichele R V,et al.Outpatient antibiotic use in Europe and association with resistance:a cross-national database study[J].Lancet,2005,365(9459):579-587.

[7]赵克雷,李旭鑫,帕哈尔定,等.圈养林麝脓肿病病原菌分离鉴定及药敏分析[J].四川动物,2011,30(4):522-526.

Bacillary dysentery treatment of laboratory macaques

WANG Hong1,2,WEI Qiu-jiang2,CHEN Zhi-gang1,JIANG Hai-tian2
(1.Yunnan Key Laboratory of Primate Biomedical Research,Kunming 650550,China; 2.Kunming Biomed International,Kunming 650550,China)

Bacillary dysentery is one of the common digestive tract infectious diseases of rhesus monkey,which has a strong in⁃fectivity,fast morbidity,short disease course,and high mortality.Macaques will soon die without timely effective treatment mea⁃sures,and bacillary dysentery seriously affects the quality of experimental macaques.In this study,using the separation,culturing and identification of bacteria,combining with the antibiotics sensitive experiment and taking effective treatment measures,we showed that Ceftazidime and Levofloxacin were the best efficiency treatment,and treatment rate was 100%,Norfloxacin and Cipro⁃floxacin were definitly efficiency,and treatment rate are 88.89%and 77.78%,respectively.

Rhesus monkey;Shigella;Dysentery;Treatment

WANG Hong

S858.9

A

0529-6005(2016)06-0097-02

2015-12-10

云南省技术创新人才项目(2014HB090);昆明市科技计划项目(2014-04-A-S-02-3074);云南省技术创新项目(2015XA33)

王宏(1975-),男,副研究员,硕士,研究方向为实验动物学与人类疾病动物模型研究,E-mail:wangh@kbimed.com