甘肃纹党参指纹图谱研究*

常红星，窦　霞

（1.甘肃省武威市第二人民医院，甘肃　武威　733000；2.甘肃中医药大学附属医院，甘肃　兰州　730000）

甘肃纹党参指纹图谱研究*

常红星1，窦霞2

（1.甘肃省武威市第二人民医院，甘肃武威733000；2.甘肃中医药大学附属医院，甘肃兰州730000）

研究纹党参的指纹图谱。应用高效液相色谱法。通过指纹图谱的分析研究，可以作为党参质量控制的方法。

党参；纹党参；指纹图谱

党参为桔梗科植物Codonopsis pilosula（Franch）Nann.f。具有补中益气，健脾益肺的功能，用于脾肺虚弱，气短心悸，食少便溏，虚喘咳嗽，内热消渴［1］。党参的商品有西党、东党、潞党、条党及白条党（纹党）。

指纹图谱技术自20世纪70年代出现发展至今，已经得到了突飞猛进的发展，目前由最初的研究阶段进入到实际应用阶段。并且，这项技术从总体上对中药的质量控制起到了推动作用。中药指纹图谱由于其能够从整体上来表征中药的内在特征，目前被国际上公认为控制天然药物质量的有效手段之一［2］，为真正实现中药走向世界提供了极为有利的质量保证。

我们用高效液相色谱法对甘肃产纹党参进行了指纹图谱研究该研究结果对纹党参道地性研究也具有重要意义。

1　仪器与试药

1.1实验仪器

LC-20AD高效液相色谱仪 （日本岛津公司）：SPD-M20D二极管阵列检测器；BP210S电子分析天平（Sarlorius公司）；SK7200H超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；IECMicromax离心机 （美国ThermoElectron公司）。

1.2实验材料

党参，产于甘肃渭源县，由兰州市冠兰中药饮片厂提供，经杨锡仓主任中药师鉴定为来源于桔梗科的党参；党参炔苷对照品：（批号：110796-200514，购买自中国生物制品药品检定所）。乙腈（色谱纯），水（超纯水），其余试剂均为分析纯。

2　色谱条件及检测波长的选择

2.1色谱条件

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 （色谱柱：Thermo Hypersil Gold-C18：150×4.6mm，5μm）；流速为1mL？min-1；以乙腈为流动相A，水为流动相B，洗脱程序见表1：

表1　色谱条件

2.2检测波长选择

党参中主要成分党参炔苷最大吸收波长为268nm。［3］为全面反映样品中的主要成分，经218 nm、230nm、245nm、275nm、300nm五个波长测定指纹图谱的比较分析（如图1～6所示），由于在268nm波长的指纹图谱中，较好地体现各主要峰，且各峰分离度好，基线较平稳，故确定268nm波长下为党参指纹图谱的检测波长。

图1　218nm波长所测指纹图谱

图2　230nm波长所测指纹图谱

图3　245nm波长所测指纹图谱

图4　268nm波长所测指纹图谱

图5　285nm波长所测指纹图谱

图6　300nm波长所测指纹图谱

2.3指纹图谱系统适应性及延长时间检测，如图7～10所示。

图7　党参炔苷参照物指纹图谱

图9　空白溶剂指纹图谱

图10　延长时间120分钟指纹图谱

2.3.1参照物溶液的制备

取党参炔苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含50μg的对照品溶液，即得［4］。

2.3.2供试品溶液的制备

取纹党参约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，超声30min，过滤，取续滤液作为供试品溶液，即得。（因含量测定研究中考察过本品供试品制备方法，故本研究中不再重复。）

2.3.3精密度试验

取纹党参，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品，连续进样6次测定。结果表明，各供试品溶液中共有峰的保留时间及各主要峰 （占总峰面积5%以上）的峰面积基本保持一致（RSD＜3%），以第1次进样所得指纹图谱做为对照图谱计算相似度，结果相似度均不小于0.95，符合指纹图谱的相关技术要求。表明该方法精密度良好。

2.3.4稳定性试验考察

取纹党参，按正文中供试品溶液制备方法制备供试品溶液，每隔3h测定一次指纹图谱，共测6次，以0h所得指纹图谱为对照，计算相似度，各指纹图谱相似度结果均不小于0.99，符合指纹图谱相关技术要求（应不小于0.95）。表明供试品溶液15h内稳定。

2.3.5重复性试验

取纹党参，按正文中供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，同法制备供试品溶液6份，依法测定，计算相似度，相似度结果均不小于0.99，符合指纹图谱的技术要求（不小于0.95），说明本方法重复性良好。

2.3.610批纹党参的测定及对照指纹图谱的获得

取10批纹党参样品，按正文中供试品溶液制备方法分别制备供试品溶液，依法测定，计算相似度，用相似度软件以这10批样品指纹图谱为基础获得“共有模式”作为党参对照指纹图谱，如图11～12所。

图11　10批纹党参指纹图谱共有模式

图12　10批纹党参指纹图谱共有模式

根据10批纹党参指纹图谱与对照指纹图谱计算相似度，根据多批次数据积累，确定纹党参指纹图谱与对照指纹图谱经相似度软件计算，相似度应不低于0.80。

3　讨论

本试验过程中，为全面反映纹党参的指纹特征，分别选用不同波长检测样品，经过在218nm、230 nm、245nm、275nm、300nm五个波长所测定指纹图谱的比较，发现218nm及230nm基线较差，300nm波长下峰较少，而且峰面积非常小，245nm及275nm基线较平稳，峰较多，但是相比较，268nm波长下的峰面积较大，能够较好地体现样品各主要峰，且各峰分离度好，基线较平稳，故最终确定268nm波长为党参指纹图谱的检测波长。

通过以上各项试验，指纹图谱的分析，作为纹党参主要鉴别手段，可以为纹党参质量控制提供依据［5］。

［1］ 封士兰，胡芳弟，刘欣，等.HPLC研究甘肃产白条党参指纹图谱［J］.中成药，2005（07）745-748.

［2］ 邵建强.中药指纹图谱的研究进展［J］.中草药，2009（06）994-997.

［3］ 窦霞，甘肃党参超微粉的制备及其质量标准研究［D］.南京：中医药大学，2014（学位论文）.

［4］ 孙永成，窦霞，尚强，等，桂枝茯苓胶囊（精制）多成分指纹图谱的研究［J］.世界科学技术（中医药现代化），2010，12 （2）：294-297.

［5］ 武果桃，贺东昌，张李俊，刘红霞，任杰，孟冬霞.中药党参的HPLC指纹图谱研究［J］.中兽医医药杂志，2009（05）54-56.

p632+.8

2014年度甘肃中医学院中青年科研基金（ZQ2014-31）。