TS水平在晚期胃癌患者中对替吉奥化疗疗效的影响

张丹　陈妍妍

[摘要]目的 探讨胸苷酸合成酶（TS）水平对晚期胃癌（AGC）患者接受替吉奥（S-1）化疗方案疗效的影响。方法 选取2014年2月～2015年2月我院收治的AGC患者共50例，所有患者均经病理确诊。使用RT-PCR法检测所有患者化疗前外周血TS mRNA水平，将患者分为TS mRNA高表达组与低表达组，之后给予口服S-1化疗，并观察化疗效果与TS mRNA水平的关系，进行相应分析。结果 所有患者外周血中TS mRNA表达水平平均为2.61。两组相比，高表达组患者远处转移发生率为96.27%，高于低表达组的69.56%，差异有统计学意义（P<0.05）。而在性别、年龄、肿瘤大小及浸润深度方面的分布差异无统计学意义（P>0.05）。同时，高表达组总有效率为66.67%，低于低表达组的总有效率91.30%，差异有统计学意义（P<0.05），TS mRNA表达量与化疗疗效呈负相关，r=-3.4512。结论 外周血TS mRNA表达水平与AGC患者S-1化疗疗效呈负相关陛，其水平越高，化疗有效率越低，患者生存时间越短，反之亦然。

[关键词]胸苷酸合成酶；晚期胃癌；替吉奥；疗效

[中图分类号]R735.2 [文献标识码]B [文章编号]2095-0616（2016）12-166-04

目前我国的胃癌发生率正逐年上升，且其发病隐匿，初期临床表现往往不能引起患者的足够重视，待来院就诊，常已为中晚期，错过最佳治疗时机。替代吉奥（S-1）是近年来临床上常用的晚期胃癌患者化疗药物，其效果稳定，但一直缺乏特异性的疗效评价标靶。本研究选取2014年2月～2015年2月我院收治的晚期胃癌（AGC）患者共50例，探讨TS mRNA水平在晚期胃癌患者中对接受S-1化疗方案后疗效的影响，结果令人满意。现报道如下。

1.资料与方法

1.1一般资料

选取2014年2月-2015年2月我院收治的AGC患者共50例，其中男28例，女22例，年龄45-77岁，平均（65.4±7.5）岁。纳入标准：（1）经病理学确诊胃癌原发灶，经MR或CT等影像学检查有1处以上转移灶；（2）18岁≤年龄≤80岁；（3）功能状态评分（Ps评分）≥2分；（4）无化疗治疗史或距末次化疗史>6个月；（5）预计生存期≥3个月。排除年龄过大或过小，以及合并有心、脑、肺、肾严重器质性病变者。所有患者均经患者本人知情同意，并经医院伦理委员会审核。

1.2治疗方法

使用S-1胶囊（山东新时代药业，H20130802），80mg/（m²×d），分2次口服。共口服14d。以3周为一个周期。化疗期间，本研究中所有患者均给予保肝、止吐、止泻、移酸、防过敏、升白细胞和血小板等对症支持治疗。

1.3疗效评估标准

使用计算机断层扫描在每2个周期结束后对患者可测量病灶采用UICC标准进行评估。病灶完全消失，并持续1个月以上定义为完全缓解（CR）；病灶缩小超过50%，时间超过4周定义为部分缓解（PR）；病灶缩小未达到50%或增大不超过25%定义为疾病稳定（SD）；病灶出现增大，并超过25%，甚至出现新病灶定义为疾病进展（PD）。化疗有效率=（CR+PR）/n×100%，化疗无效率=（SD+PD）/n×100%。总生存期（overall survival，OS）为患者人组至任何原因致其死亡的时间。对本研究所有患者进行从入组开始到失访或死亡的随访工作。

1.4实验试剂与方法

1.4.1实验试剂 RNA提取试剂盒购自美国Invitrogengen公司，逆转录试剂盒购自美国Promega公司，PCR扩增试剂盒购自美国Promega公司。TS引物序列为：上游为5-ACC AAC CCT GAC GACAGA AG-3，下游为5-ATG CGG ATT GTA CCCTTC AA-3，由美国Invitrogengen公司合成。

1.4.2实验方法 取患者外周血10mL，抗凝处理，使用Ficoll-Hypaque法对其有核细胞进行分离后，用经焦磷酸二乙酯（DEPC）处理的PBS液进行洗涤，共2次。使用RNA提取试剂盒根据说明书操作提取总RNA，并以之为模板，根据RT-PCR试剂盒说明书操作进行RT-PCR循环，在94℃条件下变性30s后，以55℃退火1min，之后在68℃下延伸2min，共35个循环。使用琼脂糖凝胶电泳对产物进行分析。

1.5统计学分析

使用SPSS18.0软件包进行统计学分析。根据Ts mRNA表达水平的均值，将所有患者分为高表达组与低表达组。使用x2检验统计Ts mRNA表达水平与临床病理特征间的关系，以Spearman相关分析法分析TS mRNA表达水平与化疗疗效的关系。P<0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 TSmRNA表达水平与临床病理特征间的相关性

本研究中，所有患者外周血中TS mRNA表达水平经RT-PCR法检测显示，相对于B-actin相对分数范围为0.89～12.75，平均2.61。将2.61作为分界，TS mRNA表达水平>2.61为高表达组，共27例患者；Ts mRNA表达水平≤2.61为低表达组，共23例患者。在与临床病理特征关系的结果中显示，高表达组中有远处转移的患者为26例，占高表达组患者的96.27%，高于低表达组中远处转移发生率（69.56%），差异有统计学意义（P<0.05）。而两组患者在性别、年龄、肿瘤大小及浸润深度方面的分布差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.2两组患者S-1436疗疗效情况

两组患者化疗效果对比分析结果显示，TSmRNA高表达组，CR、PR分别为5例和13例，总有效率为66.67%。而Ts mRNA低表达组中，CR与PR分别为8例和13例，总有效率91.30%，高于高表达组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 TS mlLNA表达量与S-HE疗疗效相关性分析

采用Spearman相关分析法分析TsmRNA表达量与S-1化疗有效率之间的关系得知r=-3.4512，表明TsmRNA表达量与S-1化疗有效率成负相关关系。

3.讨论

作为由替加氟、吉美嘧啶与奥替拉西按照1.0：0.4：1.0摩尔比所构成的复方化疗药剂，S-1目前正逐渐成为晚期胃癌患者的一线临床治疗药物。其中，5-Fu前体药物替加氟能够通过体内转化达到抗肿瘤目的；吉美嘧啶则可以通过抑制5-Fu在体内的分解代谢，延长5-Fu的有效浓度维持时间，增加S-1抗瘤活性；奥替拉西则通过阻断5-Fu的磷酸化，对其口服后在胃肠组织中的分布造成影响，大大降低5-Fu的毒性副作用。三者的复合制剂S-1经过国内外专家学者的研究显示，在治疗晚期胃癌患者有疗效可靠，耐受性好，毒副作用小等诸多优点。

而5-Fu作为S-1的主要抗瘤成分，是通过代谢为活性产物5-fluoro-deoxyuridine-monopho-sphate（FdUMP）发挥作用。dUMP甲基化为dTMP需要Ts进行催化，因此，Ts是S-1正常代谢并发挥抗瘤作用的重要DNA聚合靶酶。关于TS表达水平与S-1抗肿瘤化疗疗效的相关性，国内外学者研究结果不一。Miyazaki I等通过研究认为，TS蛋白表达水平在预测S-1化疗效果中有重要价值，但Fujiwara H等的研究结果却显示，在人胃癌裸鼠模型中，TS酶活性与S-1的抗肿瘤活性并无联系。Miyamoto s等通过免疫组化法检测Ts表达水平，也得出Ts表达水平与S-1抗瘤活性无关的结论。而在本研究中，笔者使用RT-PCR法对TS mRNA表达水平进行检测，结果显示TS mRNA表达高水平组的患者，其治疗总有效率低于低表达组患者，且与临床病理特征关系的研究也显示，高表达组患者远处转移发生率为96.27%，高于低表达组的69.56%。通过量化TS mRNA表达量，用Spearman相关分析方法分析其与S-1化疗方案疗效相关性得出，相关系数r=-3.4512。以上结果均提示，外周血Ts mRNA表达水平与AGC患者S-1化疗疗效呈负相关。TS mRNA低表达的AGC患者使用S-1化疗效果较好，且远处转移发生率低。但本研究样本量有限，对于TS水平对AGC患者S-1化疗的预测价值，仍有待于进一步的研究。

综上所述，外周血TS mRNA表达水平与AGC患者S-1化疗疗效呈负相关性，其水平越高，化疗有效率越低，患者生存时间越短，反之亦然。