膀胱癌CD34及podoplanin表达情况与淋巴结转移及组织浸润的关系分析

苏震李建玲滕小慧夏嘉鼎李汝泓#承德医学院附属医院重症医学科，麻醉科，河北承德 67承德市中心医院骨伤科，河北承德 67

膀胱癌CD34及podoplanin表达情况与淋巴结转移及组织浸润的关系分析

苏震1李建玲2滕小慧3夏嘉鼎1李汝泓2#
承德医学院附属医院1重症医学科，2麻醉科，河北承德 0670003承德市中心医院骨伤科，河北承德 0670000

目的探讨膀胱癌组织中CD34及肾小球足突细胞膜黏蛋白（podoplanin）的表达情况，并分析其与淋巴结转移及组织浸润的关系。方法以45例膀胱癌患者作为观察组，10例正常者为对照组，对比两组膀胱组织中CD34及podoplanin表达情况；同时根据淋巴结是否发生转移，将观察组患者又分为无转移组及转移组，对比组间CD34及podoplanin表达情况；根据组织浸润情况，将观察组分为浸润未超过肌层的未浸润组及超过肌层的浸润组，对比两组间CD34及podoplanin表达情况。结果观察组患者CD34及podoplanin阳性表达率均高于对照组，差异比较具有统计学意义（P＜0.05）；转移组CD34及podoplanin阳性表达率均高于无转移组，差异比较亦具有统计学意义（P＜0.05）；浸润组CD34及podoplanin阳性表达率均高于无浸润组，差异比较具有统计学意义（P＜0.05）。结论膀胱癌患者膀胱组织中CD34及podoplanin表达阳性率较正常者膀胱组织升高，且组织浸润超过肌层及发生淋巴结转移亦可使CD34及podoplanin阳性表达率升高。

膀胱癌；CD34；肾小球足突细胞膜黏蛋白；淋巴结转移；组织浸润

Oncol Prog，2016，14（5）

膀胱癌为男性最为常见的恶性肿瘤之一，其在临床具有高死亡率及高复发率的特点，临床预后也较差［1-2］。目前，随着人们生活及饮食习惯的改变，使得本病在我国的发病率呈上升趋势［3］。因膀胱癌的发病机制尚未明确，因此临床尚缺乏针对本病的特效治疗方法。为更深入地分析膀胱癌的发生机制，并有效的治疗本病，本研究对近年来收集的膀胱癌患者的临床资料进行分析，分别对比膀胱癌组织中CD34及肾小球足突细胞膜黏蛋白（podoplanin）的表达情况，并探讨CD34及podoplanin表达与淋巴结转移及组织浸润的关系，现将结果报道如下。

1　对象与方法

1.1研究对象

选取2008年7月至2009年8月在承德医学院附属医院治疗的45例膀胱癌患者作为观察组，同时收集10例正常者为对照组。入选标准为：①有无痛性肉眼血尿，尿痛、尿急、尿频等，晚期可在下腹部触到肿块。②经膀胱镜检和影像学检查确诊为膀胱癌。③所有入选者均签署知情同意书。排除标准：①合并其他部位原发性恶性肿瘤者。②存在继发性恶性肿瘤者。③预计生存期＜3个月。对照组标本均取自接受耻骨上经膀胱前列腺摘除术治疗的前列腺增生症患者，观察组标本均取自膀胱癌切除术患者，且患者术前未接受介入治疗及放疗，化疗和免疫治疗。观察组男性35例，女性10例，年龄33～82岁，平均年龄（58.51± 10.06）岁；临床分期为：Ⅰ期37例，Ⅱ～Ⅲ期8例。对照组男性6例，女性4例，年龄33～80岁，平均年龄（58.53±10.05）岁。两组患者的年龄、性别比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2观察方法

首先，比较对照组正常膀胱组织与观察组膀胱癌组织中CD34（图1）及podoplanin阳性表达率的差异；同时根据是否发生淋巴结转移，将观察组患者分为无转移组及转移组，对比两组间CD34及podoplanin表达情况；根据组织浸润情况，将观察组分为浸润未超过肌层的未浸润组及超过肌层的浸润组，对比两组间CD34及podoplanin表达情况。

1.3标本检测方法

应用10%福尔马林及石蜡对标本进行固定及包埋，应用旋转式切片机对标本进行切片，切片厚度为4 μm，并于80℃的温度下进行恒温烘烤，完成烘烤后进行脱蜡及脱水。随后将标本放入3%过氧化氢中进行10 min室温孵育，用蒸馏方式冲洗，放入PBS中浸泡5 min。完成浸泡后，将标本进行15 min沸腾枸橼酸钠缓冲液浸泡，完成后于室温下放置40 min。随后按顺序进行3次PBS冲洗，加入50 μl一抗，进行10 h的4℃静置，并再次进行PBS冲洗3次及二抗处理，进行15 min室温孵育，再次进行PBS冲洗3次。完成以上操作后，应用DAB及苏木素进行染色及复色，再将标本放置于显微镜下观察。在所观察的标本结果中，以棕黄色细胞质占10%为阳性。以KIT-5010免疫组化试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司）对标本进行制作，以DAB-0031显色试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司）进行DAB染色。

1.4统计学方法

应用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，所有计量资料均用均数±标准差（±s）表示，采用t检验；计数资料均用百分率（%）表示，采用χ2检验。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2　结果

2.1两组患者CCDD3344及podopllaanniinn表达率比较

观察组患者CD34及podoplanin阳性表达率均高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），详见表1。

表1　两组患者CDCD3434及podoplaninlanin表达率比较［n（%）］

2.2观察组患者中无转移组与转移组CCDD3344及podopllaanniinn表达率比较

转移组患者CD34及podoplanin阳性表达率高于无转移组患者，差异具有统计学意义（P＜0.05），详见表2。

表2　无转移组与转移组CDCD3434及podoplaninlanin表达率比较分析［n（%）］

2.3观察组患者中无浸润组与浸润组CCDD3344及podopllaanniinn表达率比较

浸润组患者CD34及podoplanin阳性表达率均高于无浸润组患者，差异具有统计学意义（P＜0.05），详见表3。

表3　无浸润组与浸润组CDCD3434及podoplaninlanin表达率比较［n（%）］

3　讨论

目前，虽然临床对于恶性肿瘤的研究已较为深入，但对其发生机制未完全明确，因而导致临床对恶性肿瘤的治疗仍缺乏特效方法。近年有学者报道，在包括膀胱癌在内的多种恶性肿瘤组织中，多种炎性因子可呈阳性表达，因此推测恶性肿瘤的产生及发展可能与炎性因子密切相关［4-8］。

图1　CD34在膀胱癌组织中的典型表达（免疫组化染色，×200200）

文献资料表明，CD34及podoplanin均为恶性肿瘤临床诊疗过程中具有重要意义的观察指标［9-11］。其中CD34在造血干细胞膜及血管内皮细胞中具有较高的阳性表达率，可作为评价血管内皮细胞情况的重要标志物，同时也可用于衡量肿瘤血管的形成情况［12-13］。相关研究观察了CD34蛋白在肝细胞癌中的表达水平，结果发现，在肝癌患者病变组织中，CD34蛋白呈阳性表达，均高于正常肝组织中的表达水平［14-15］。闫圣男等［16］的研究发现，CD34蛋白阳性表达率在肾细胞癌中显著增高，且高病理分期患者中CD34阳性表达率显著高于低分期患者中的表达水平。而podoplanin为淋巴管内皮细胞中表达较高的物质，其可应用于评价恶性肿瘤淋巴管生长情况［17-18］。林文俐等［19］的研究中，对podoplanin在肿瘤间质肌成纤维细胞上的表达与肿瘤淋巴管形成及淋巴道转移的相关性进行了分析，结果发现，podoplanin在非小细胞肺癌细胞间质中呈显著阳性表达，其表达水平与组织分化程度，淋巴结的转移均具有显著相关性（P＜0.05）。这一研究结果提示，高表达podoplanin能促进非小细胞肺癌新生淋巴管的形成，淋巴道的转移等。

本研究为了深入探讨膀胱癌的发生机制，并对临床诊断及治疗提供参考，将CD34及podoplanin两种炎性物质作为观察指标，分析其在膀胱癌肿瘤组织中的表达情况。结果显示，观察组膀胱组织中CD34及podoplanin阳性表达率均高于对照组膀胱组织（P＜0.05），可见膀胱癌组织中CD34及podoplanin阳性表达率升高。因组织浸润及淋巴结转移为恶性肿瘤的临床特征，因此本研究根据患者组织浸润及淋巴结转移情况，将膀胱癌患者进一步分组，以分析肿瘤组织不同浸润程度及淋巴结转移组织中CD34及podoplanin阳性表达率情况，结果显示，转移组CD34及podoplanin阳性表达率均明显高于无转移组，比较差异具有统计学意义（P＜0.05）；浸润组CD34及podoplanin阳性表达率均明显高于无浸润组，比较差异亦具有统计学意义（P＜0.05）。可见在膀胱癌组织中，发生组织浸润及淋巴结转移后，患者组织内的CD34及podoplanin阳性表达率可显著升高（P＜0.05）。

综上所述，膀胱癌组织内CD34及podoplanin表达阳性率明显升高，且组织浸润超过肌层及发生淋巴结转移亦可使CD34及podoplanin表达阳性率升高。因此在膀胱癌的临床诊疗过程中，可将CD34及podoplanin作为临床指标进行观察。

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The expression of CD34 and podoplanin in bladder cancer and the correlation with lymph node metastasis and muscular invasion

SU Zhen1LI Jian-ling2TENG Xiao-hui3XIAJia-ding1LI Ru-hong2#
1Department of ICU，2Department of Anesthesiology，Affiliated Hospital of Chengde Medical College，Chengde 067000，Hebei，China3Department of Orthopaedics and Traumatology，Central Hospital of Chengde City，Chengde 067000，Hebei，China

ObjectivectiveTo investigate the expression of CD34 and podoplanin in bladder cancer and analyze the correlation with lymph node metastasis and muscular invasion.Methodethod45 cases of bladder cancer patients were included as study group，while another 10 cases of normal adults were enrolled as control group，in which the CD34 and podoplanin expression of the two groups were compared；and the study group was further stratified as subgroups of lymph node metastasis vs no metastasis，and muscular invasion vs non-muscular invasion to compare the inter-subgroup expression levels，respectively.ResultesultThe positive expression rates of CD34 and podoplanin in study group were significantly higher than that of the control group（P＜0.05）；and were higher in lymph node metastasis subgroup than in no metastasis subgroup（P＜0.05）；and were also higher in muscular invasion subgroup than in non-muscular invasion subgroup（P＜0.05）. ConclusionusionBladder cancer tissues have higher CD34 and podoplanin positive expression than normal tissues，furthermore，muscular invasion and lymph node metastasis may also increase positive expression of CD34 and podoplanin.

bladder cancer；CD34；podoplanin；lymph node metastasis；muscular invasion

R737.14

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.05.21

（corresponding author），邮箱：ruhongli1027@163.com

2015-11-30）