DC-CIK联合放化疗对小细胞肺癌患者免疫功能的影响

康红刚张静 王宝中 刘美荣聊城市人民医院肿瘤科，山东聊城252

DC-CIK联合放化疗对小细胞肺癌患者免疫功能的影响

康红刚#张静 王宝中 刘美荣
聊城市人民医院肿瘤科，山东聊城2520000

目的探讨细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）、树突状细胞（DC）免疫治疗联合放化疗对小细胞肺癌患者外周血淋巴细胞亚群的影响及疗效。方法收集60例小细胞肺癌患者资料，其中32例患者采用DC-CIK联合放化疗（化疗方案为依托泊苷+顺铂/依托泊苷+卡铂/伊立替康+顺铂，放疗方案为适形调强放疗技术）为联合治疗组；28例进行放化疗的患者为对照组。治疗结束2周后采用流式细胞仪检测外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK细胞、Treg细胞及相关因子IFN-γ、IL-2、IL-10、TGF-β1的变化，并评价疗效。结果联合治疗组IFN-γ治疗后较治疗前升高，IL-10、TGF-β1较治疗前降低（P＜0.05）；联合治疗组患者外周血CD3+CD8+、CD3+CD4+、NK细胞治疗后水平高于对照组（P＜0.05）；而Treg细胞、IL-10、TGF-β1治疗后水平低于对照组（P＜0.05）。对照组患者外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK细胞治疗后较治疗前下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；细胞因子在治疗前后无变化。虽然联合组疾病控制率较对照组高，但差异无统计学意义（87.50%vs 71.43%，P＞0.05）。结论自体DC-CIK治疗可以改善小细胞肺癌联合放化疗患者的细胞免疫功能，是否能改善生存需进一步研究。

DC-CIK；小细胞肺癌；过继性免疫细胞治疗；放化疗

Oncol Prog，2016，14（5）

小细胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）是肺癌的一种主要类型，恶性程度高，侵袭性强，临床进展明显快于非小细胞肺癌，预后差。目前主要治疗方法为同步放化疗，对于耐受差的患者可行序贯化放疗。放化疗对机体的免疫功能有一定的损伤［1］，在杀伤肿瘤细胞的同时，也可能通过免疫抑制而增加恶性肿瘤患者疾病进程中复发、转移的概率。细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer，CIK）具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀灭肿瘤细胞的优点，且增殖快，具有肿瘤识别能力，已经作为新一代抗肿瘤过继细胞免疫治疗在临床中广泛应用。树突状细胞（dendritic cell，DC）是目前所知的体内功能最强大的专职抗原递呈细胞，是唯一能激活幼稚T细胞的抗原递呈细胞［2］，与肿瘤的发生、发展有着密切关联。DC与CIK共培养可促进CIK的增殖，并增强细胞免疫应答的功能，从而发挥抗肿瘤的功能［3］。本研究通过检测治疗前后T细胞亚群比例及细胞因子水平的变化从而观察DC-CIK联合放化疗对小细胞肺癌患者免疫功能的影响。

1　资料与方法

1.1一般资料

选取聊城市人民医院2012年5月至2014年3月收治的经病理学检查确诊为小细胞肺癌的患者共60例，患者心脏、肝、肾功能可耐受化放疗及生物治疗，血象正常，Karnofsky评分≥70分。32例接受化放疗及DC-CIK治疗的患者为联合治疗组，28例单纯行化放疗患者为对照组，两组临床资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（表1）

表1　两组患者的临床特征

1.2治疗方案

两组采用的化疗方案：依托泊苷+顺铂/依托泊苷+卡铂/伊立替康+顺铂，根据化疗疗效2～4个周期后行三维适形放疗，放疗后根据病情至少进行2个周期化疗。联合治疗组生物治疗方案：在化疗前采用单采机采集患者外周单个核细胞，体外培养DC及CIK，CIK经DC诱导后将培养好的DC及CIK细胞回输给患者。回输时避开化疗，分3次回输（细胞数＞10×109/次），患者每个月进行一次治疗，直至病情进展或放弃治疗，至少完成3次治疗。

1.3检测指标

在第一次回输DC-CIK前及完成3次DC-CIK治疗结束后2周抽血送检，采用流式细胞仪检测T细胞亚群：CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK细胞、Treg细胞的变化情况；应用ELISA检测治疗前后γ-干扰素（interferon-γ，IFN-γ）、白介素-2（interleukin-2，IL-2）、白介素-10（interleukin-10，IL-10）、转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）变化情况。

1.4近期疗效评价

按照RECIST实体瘤近期疗效判定标准分为完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、疾病稳定（SD）、疾病进展（PD）。治疗结束后2周评价疗效，疾病控制率=（CR+PR+SD）例数/总例数×100%，患者出院后医院对其进行定期跟踪随访，统计每组病例的无疾病进展时间（PFS）。

1.5统计学方法

应用SPSS19.0软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用方差分析，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2　结果

2.1两组患者治疗前后外周血 TT细胞亚群水平的比较

两组患者均完成了放化疗，且治疗前两组免疫功能指标比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。在放化疗结束时，联合治疗组患者共接受3个周期以上的DC-CIK治疗。治疗后联合治疗组CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK细胞比例高于对照组，而Treg细胞比例低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。联合治疗组CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+比例治疗后较治疗前比较，差异无统计学意义（P＞0.05），NK细胞比例比治疗前升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK细胞治疗后较治疗前降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。（表2）

表2　两组患者外周血中T T细胞亚群水平的比较（%±s）

表2　两组患者外周血中T T细胞亚群水平的比较（%±s）

注：*与同期对照组比较，P＜0.05；#与本组治疗前比较，P＜0.05

指标CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+Treg细胞NK细胞联合治疗组（n=32）治疗前61.41±10.05 31.82±7.21 33.12±5.02 6.03±0.16 14.70±4.87治疗后64.14±12.51 33.61±9.12*36.15±7.76*3.40±0.14*23.31±4.21*#对照组（n=28）治疗前62.10±4.12 32.25±7.01 32.42±2.32 5.97±0.18 15.20±3.35治疗后49.36±9.82#21.03±7.54#20.83±2.12#4.96±0.13 8.31±4.16#

2.2两组患者治疗前后细胞因子水平比较

治疗前两组患者IFN-γ、IL-2、IL-10、TGF-β1水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗结束后2周时，联合治疗组IFN-γ水平较治疗前升高，而IL-10和TGF-β1水平较治疗前下降，且低于对照组治疗后水平，差异均有统计学意义（P＜0.05）。对照组各种细胞因子与治疗前比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表3）

表3　两组患者治疗前后IFN-IFN-γ 、IL-IL-2 2、IL-IL-1010、TGF-TGF-β 1 1水平比较（pg/ml，±s）

表3　两组患者治疗前后IFN-IFN-γ 、IL-IL-2 2、IL-IL-1010、TGF-TGF-β 1 1水平比较（pg/ml，±s）

注：*与同期对照组比较，P＜0.05；#与本组治疗前比较，P＜0.05

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2.3两组疗效的比较

联合治疗组中位随访时间12个月（8～24个月），中位PFS 6.3个月（4～11个月），其中17例尚在随访中；对照组中位随访时间9个月（6～24个月），中位PFS 5.1个月（3～10个月），其中13例尚在随访中；两组PFS比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。联合治疗组的疾病控制率为87.50%，虽高于对照组的71.43%，但差异无统计学意义（P＞0.05）。（表4）

表4　两组患者的近期疗效

3　讨论

小细胞肺癌恶性程度高，在确诊的时候多数为局部晚期或广泛期。对于局部晚期肿瘤，以放化疗为主的综合治疗为主要治疗手段，广泛期则选择化疗或姑息减症治疗。近十余年，随着免疫学及分子生物学在恶性肿瘤治疗决策中的深入研究和广泛应用，免疫治疗已成为肿瘤治疗领域的研究热点。免疫治疗通过提高机体免疫系统识别和杀伤肿瘤细胞的能力而发挥作用，且不良反应轻微，具有广阔的研究和应用前景。与其他恶性肿瘤相比，小细胞肺癌在免疫治疗方面仍未取得突破，可能与确诊时即出现较大的肿瘤负荷，复杂的肿瘤异质性，缺乏特异性的治疗靶点等有关。既往研究提示亦可能通过免疫治疗来诱导小细胞肺癌患者的免疫应答，从而达到抗肿瘤的目的［4］。

肿瘤患者自身免疫力较正常低，在进行放化疗后免疫力会进一步降低［1］。DC-CIK是目前改善患者免疫力及抗肿瘤的常用免疫治疗方法。DC和CIK是目前临床上抗肿瘤过继性细胞免疫治疗的两种常用细胞，前者识别肿瘤抗原，激活细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL），主导Th1型免疫应答，后者通过细胞毒作用，分泌细胞因子（如IL-2、IL-12、IFN-γ等）及诱导细胞凋亡等途径杀伤肿瘤细胞。DC与CIK共培养后，既可促进DC的成熟，又能促进CIK的增殖，表达CD3+CD56+双阳性的细胞增多，从而产生特异性和非特异性双重抗肿瘤效应，DC-CIK还可释放炎性因子，如TNF、IFN-γ、GM-CSF等，不仅对肿瘤细胞有直接杀伤作用，而且还可以通过重建和提高患者全身的机体免疫功能，降低免疫抑制T细胞（Treg）及减少相关细胞因子（IL-10、TGF-β1），从而使其抑制T细胞的增殖、活性及使NK细胞介导的细胞毒作用降低［5］。DC-CIK已经在非小细胞肺癌［6-7］、肾癌［8］、宫颈癌［9］、食管癌［10］、胃癌［11］等高抗原表达的中晚期恶性肿瘤中进行临床试验，研究结果均显示DC-CIK细胞治疗的不良反应轻微，改善机体免疫力及抗肿瘤作用明显，患者能获得较长的生存期，较高的疾病缓解率及生存质量。

人体外周血淋巴细胞CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK细胞、Treg细胞、IL-2、IFN-γ、IL-10、TGF-β1等是反映人体特异性和非特异性细胞免疫及体液免疫功能的指标［12］。本研究中联合治疗组治疗后CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK细胞比例高于单纯化放疗组，而Treg细胞低于单纯化疗组，结果提示DC-CIK治疗改善了联合治疗组患者的免疫。联合治疗组治疗后与治疗前比较，CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+细胞比例无明显变化，NK细胞、IFN-γ较治疗前升高，而IL-10、TGF-β1治疗后较治疗前降低，这一结果可能是因为DC-CIK治疗抵消了放化疗对机体免疫功能的损伤。对照组患者虽然免疫抑制细胞、抑制性细胞因子治疗前后变化不明显，但NK细胞降低，考虑与肿瘤的免疫抑制及放化疗的免疫抑制作用有关。研究表明DC-CIK细胞可以提高机体的细胞免疫及体液免疫功能，弥补了放化疗对免疫功能的损伤，迅速增强人体免疫系统，提高患者自身抗肿瘤能力，延长患者的生存期。这与国内张俊萍等［13］的研究结果一致。

本研究结果显示DC-CIK细胞联合放化疗治疗与单纯放化疗患者比较，联合治疗提高了疾病控制率及PFS时间，但差异无统计学意义。国内钟国成等［14］在晚期小细胞肺癌进行DC-CIK细胞姑息治疗中发现患者免疫功能好转，且反应率比姑息治疗组提高。本研究结果与其改善免疫功能的结果一致。Ding等［15］在小细胞肺癌进行DC-CIK维持治疗的临床试验中发现局限期小细胞肺癌患者中PFS无差异，但提高了OS；而广泛期患者PFS及OS都有提高。以上两项关于小细胞肺癌的研究，客观缓解率及PFS都有改善，但本研究未得到阳性结果，分析其原因可能与选择的患者情况有关，所有的患者都为初治，且小细胞肺癌对放化疗都比较敏感，且与病例数较少有关，需要进一步延长随访时间及扩大样本量。

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The effect of DC-CIK combined with chemoradiotherapy on the immune function of SCLC patiennttss

KANG Hong-gang#ZHANG Jing WANG Bao-zhong LIU Mei-rong
Department of Oncology，People's Hospital of Liaocheng，Liaocheng 252000，Shandong，China

ObjectivectiveTo evaluate the effect of dendritic cell（DC）-cytokine induced killer cells（CIK）combined with chemoradiotherapy in T-lymphocyte subsets of small cell lung cancer（SCLC）patients.Methodethod60 patients with SCLC were included in this study，in which 32 patients who were treated by DC-CIK+chemoradiotherapy（etoposide/irinotecan+ cisplatin/carboplatin；conformal modulating radiotherapy）were stratified as the study group；another 28 patients were treated with chemoradiotherapy alone during the same period，which was the control group.Flow cytometry was applied to detect the changes of CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD8+，NK cell，Treg cell and related cytokines of IFN-γ，IL-2，IL-10，TGF-β1 in peripheral blood.ResultesultThe IFN-γ level was increased（P＜0.05），while IL-10 and TGF-β1 levels were significantly decreased after treatment in study group（P＜0.05）；the levels of CD3+CD8+，CD3+CD4+，and NK were higher in study group than that of control group after treatment（P＜0.05）；furthermore，the levels of Treg cell and IL-10，TGF-β1 were significantly lower in study group as compared with control group（P＜0.05）；in the control group，the levels of CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD8+，and NK cells were significantly decreased after treatment（P＜0.05），while the cytokines remained stable.The study group had a higher though insignificant disease control rate as compared with control group （87.50%vs 71.43%，P＞0.05）.ConclusionusionTreatment with autologous DC-CIK therapy combined with chemoradiotherapy improve the immune function of patients with small cell lung cancer，while further study is needed to determine the potential survival benefits.

rdsDC-CIK；small cell lung cancer；adoptive immune cell therapy；chemoradiotherapy

R734. 2

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.05.17

（corresponding author），邮箱：sdkhg80@126.com

2015-11-05）