广州市非缺失型α-地贫基因诊断和产前诊断结果分析

屈艳霞，陈桂兰，唐　盈，江　帆，左连东，辜俊梅，李志华

广州市非缺失型α-地贫基因诊断和产前诊断结果分析

屈艳霞1，陈桂兰1，唐盈1，江帆1，左连东1，辜俊梅2，李志华3

（1. 广 州市妇女儿童医疗中心，广东广州510623；2. 番禺区人口和计划生育技术服务站，广东广州 518000；3. 广 州医科大学附属第三医院，广东广州510150）

目的： 分析广州市非缺失型α-地中海贫血(α-地贫)的临床特征、基因突变类型及构成比，为临床遗传咨询提供依据。方法：259例受检者均进行血液常规和高效液相色谱分析(HPLC)，筛查阳性者采用跨越断裂点PCR(Gap-PCR)和PCR结合反向杂交(PCR-RDB)技术进行α-地贫基因分析。夫妇为同型α-地贫携带者进一步行胎儿α-地贫基因诊断，产后随防。结果：259例受检者中，ααQS/αα 170例、ααWS/αα 43例、ααCS/αα 34例、--SEA/ααQS6例、--SEA/ααCS4例、-α3.7/ααQS1例、-α4.2/ααQS1例。同性别的患者3种非缺失型α-地贫红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白量(MCH)比较差异有统计学意义(P＜0.05)，而血红蛋白(HGB)比较差异无统计学意义(P＞0.05)。经产前基因诊断检出非缺失型HbH(--SEA/ααT)病胎儿5例，胎儿引产后留脐血进行复核，均与产前基因诊断结果一致。结论：广州市非缺失型α-地贫发生率高，以ααQS/αα最常见，对疑似非缺失型α-地贫携带者进行基因检测，可显著降低非缺失型HbH病患儿的发生率。

非缺失型α-地贫；突变；基因诊断；产前诊断

【ABSTRACT】OBJECTIVE: To explore the gene mutation types and proportions of non-deletion αthalassemia，and to provide clinical basis for genetic counselling. METHODS：The gene mutation types and frequencies of 259 suspected non-deletion α-thalassemia patients were analyzed by Gap-PCR and PCR-RDB. 30 pregnant women whose husband had the same type of thalassemia received thalassemia prenatal diagnosis. We completed follow-up works. RESULTS：Among the 259 cases，170 cases of ααQS/αα，43 cases of ααWS/αα，34 cases of ααCS/αα，6 cases of --SEA/ααQS，4 cases of --SEA/ααCS，one case of -α3.7/ααQS，and one case of -α4.2/ααQSwere found. Compared with normal control group，there were statistical significances in MCV，MCH in different types of non-deletion α-thalassemia (P＜0.05). 5 fetuses with non-deletion HbH disease were confirmed by prenatal diagnosis. The results of postpartum follow-up were consistent with prenatal diagnoses. CONCLUSION：Guangzhou is a high incidence area of non-deletion α-thalassemia. The most common genotype is ααQS/αα. To reduce the birth of children with non-deletion HbH disease，non-deletion thalassemia genotype carriers s hould be t ested.

【KEY WORDS】non-deletion α-thalassemia；mutation；gene diagnosis；prenatal diagnosis

α-地中海贫血(α-地贫)是一种遗传性溶血性疾病，由α-珠蛋白基因缺陷所致。根据其基因改变类型的不同，可分为缺失型α-地贫和非缺失型α-地贫，前者是由于α-珠蛋白基因大片段缺失所致，是主要的变异类型；后者是由于α-珠蛋白基因或其调节序列发生点突变(包括单碱基置换和一个或几个核苷酸的缺失或插入)造成的。α-地贫具有高度的遗传异质性，其分子缺陷具有某种程度的种族特异性[1-2]。为了初步了解广州市非缺失型α-地贫的临床及血液学特点，基因突变类型和构成比，为地贫的遗传咨询和产前基因诊断提供临床参考，以降低患儿出生，现将广州市259例常见非缺失型α-地贫的基因检测情况进行汇报。

1　对象与方法

1.1研究对象

选取2007年9月至2013年2月完成筛查和产前诊断，2014年10月完成随访，来自于广州市黄埔区、番禺区、增城区、天河区参加出生缺陷干预工程的已孕夫妇259例，男性年龄23～39岁，平均(28.35±3.62)岁；女性年龄21～35岁，平均(26.22±3.40)岁。所有受试者均知情同意。

1.2方法

1.2.1地贫筛查抽取受检者空腹外周静脉血2～4 mL，乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，应用五分类全自动血常规分析仪进行血液学检测，参照《血红蛋白病实验室诊断指南》[3-4]，即红细胞指标测定用于地贫初筛，高效液相色谱分析(high performance liquid chromatography， HPLC)用于α-地贫和β-地贫的分型。1.2.2 基因型鉴定以DNA提取试剂盒(购自北京天根生化科技有限公司)和/或磁珠法全血DNA自动提取试剂(DNA自动提取仪配套试剂，厦门百维信生物科技有限公司)提取基因组DNA。采用跨越断裂点PCR (gap polymerase chain reaction，Gap-PCR)技术检测3种缺失型α-地贫基因突变类型(--SEA、-α3.7和-α4.2)，采用PCR结合反向杂交(PCR-reverse dot blot，PCR-RDB)技术检测非缺失型α-地贫基因3种常见突变类型(αCS，αQS和αWS)，所有地贫基因诊断试剂盒均购于深圳益生堂生物技术有限公司，具体操作按试剂盒说明进行。

1.2.3 产前基因诊断对于一方为东南亚缺失型α-地贫(--SEA/αα)携带者，或夫妻双方同为非缺失型α-地贫携带者的孕妇，在其知情同意下转诊至广州医科大学附属第三医院。孕妇于术前进行遗传咨询，签署产前诊断相关术前知情同意书。在B超引导下，经孕妇腹壁行羊膜腔穿刺抽取羊水15 mL(孕18周～24周)，进行胎儿地贫基因诊断。

1.2.4随访根据胎儿地贫基因诊断结果，对所有受检者进行优生咨询和指导。随访所有受检者的妊娠结局，并于产后3～12个月对新生儿进行跟踪随访。

1.3统计方法

所有数据采用SPSS 16.0统计软件进行统计学处理，数据用±s表示，组间比较采用F检验，以α= 0.05为检验水准。

2　结　果

2.1非缺失型α-地贫基因检测结果

259例受检者中，ααQS/αα最为常见，占65.64%，见表1。其中1对夫妇同为ααQS/αα携带者，1对夫妇分别携带ααQS/αα和ααCS/αα，28例(其中ααQS/αα 13例，ααWS/αα 7例，ααCS/αα 8例)一方为东南亚缺失型α-地贫(--SEA/αα)携带者。

表1　259例非缺失α-地贫基因检测结果

2.2血液学指标

3种常见非缺失α-地贫的血常规初筛结果见表2和表3。男、女4组(对照组、ααQS/αα组、ααWS/αα组和ααCS/αα组)血红蛋白(hemoglobin，HGB)、红细胞平均体积(mean corpuscular volume，MCV)、红细胞平均血红蛋白量(mean corpuscular hemoglobin，MCH)均值之间分别进行比较，差别均有统计学意义(P均＜0.05)；男、女3种非缺失突变组(ααQS/αα组、ααWS/αα组和ααCS/αα组)之间比较，MCV、MCH均值的差别均有统计意义(P均＜0.05)，而HGB均值的差别无统计学意义(P＞0.05)。

2.3产前基因诊断结果

夫妻双方同为非缺失α-地贫携带者，或一方为非缺失α-地贫携带者，另一方为东南亚缺失型地贫携带者的30个家庭，均选择进行了产前基因诊断，结果见表4。

2.4随访结果

5例经产前诊断确诊为非缺失型HbH(--SEA/ααT)病的孕妇，在知情同意下选择了终止妊娠，其余25例选择了继续妊娠。胎儿引产或出生后留脐血进行复核，均与产前基因诊断结果一致。

3　讨论

非缺失型α-地贫是由于α珠蛋白基因或其调节序列发生点突变、少数几个核苷酸的缺失或插入而引起(以αT表示累及的基因)。非缺失型a-地贫的基因型，目前已报道80余种，大多数的突变位于α2基因内[5]。很多非缺失型α-地贫突变会影响mRNA的加工、翻译以及合成的α-珠蛋白的稳定性[6]。发生非缺失型α-地贫突变会让α-珠蛋白链合成量减少，而且比缺失型的减少更明显，从而使α-链/β-链比例失衡，引起溶血。

表2　3种常见非缺失α-地贫的血液学指标情况

表3　--SEA/ααT及-α/ααT的血液学指标情况

表4　30例胎儿地贫基因结果

从血液学指标来看，非缺失型α-地贫杂合子多无临床表现，HGB、MCV、MCH的值正常或轻度下降，表现为静止型α-地贫，初筛易漏诊。本文中男、女4组(对照组、ααQS/αα组、ααWS/αα组和ααCS/αα组)HGB、MCV、MCH均值之间差别均有统计学意义(P均＜0.05)；男、女3种非缺失型α-地贫杂合子组(ααQS/αα组、ααWS/αα组和ααCS/αα组)之间比较，MCV、MCH均值之间差别均有统计学意义(P＜0.05)，HGB均值之间差别无统计学意义(P＞0.05)。ααQS/αα携带者的血液学表型相对较重些，该结果与以往报道[6-7]的结果基本一致。

从基因突变类型来看，广州地区最常见的非缺失型α-地贫基因突变类型是ααQS/αα(65.64%)，其次是ααWS/αα(16.60%)和ααCS/αα(13.13%)，基因突变类型构成比与既往文献[8]报道的以ααCS/αα常见有较大差异。该检测结果表明非缺失型α-地贫基因突变构成比存在有很大差别。

HbH病有两种常见类型：缺失型 HbH病和非缺失型 HbH病。由于非缺失型突变绝大多数位于功能较强的α2基因，比缺失型导致更严重的α-珠蛋白链合成减少，因此非缺失型HbH病的临床表现和血液学改变均比缺失型HbH(--SEA/-α)病严重[9]。非缺失型HbH病患者的临床表现差异大[1，6-7，10]。患者有不同程度贫血，有的终生稳定，有的合并生长发育迟缓、黄疸、肝脾肿大、胆结石等严重的并发症，部分患者需要定期输血治疗。此外，还有ααQS/ααQS、ααCS/ααCS、--SEA/ααQS等引起胎儿水肿综合征的报道[11-12]。因此，在东南亚缺失型α-地贫携带率高的地区，当夫妻一方为--/αα时，另一方就应进行基因诊断，以排除为非缺失型α-地贫携带者，尤其是后者血液学表型阳性而常见缺失型α-地贫基因和β-地贫基因未检测到突变时，更应该考虑对非缺失型α-地贫基因检测。如果配偶为非缺失型α-地贫基因携带者，则他们的子女有25%机率为HbH (--SEA/ααT)病。

本文259例受检者中，2对夫妇均为非缺失型α-地贫基因携带者，28例另一方为东南亚缺失型α-地贫携带者。此30例孕妇均在知情同意下，选择了产前基因诊断，其中12例胎儿完全正常，13例为轻型地贫，5例为非缺失型HbH病。对所有受检者进行了遗传咨询，非缺失型HbH病胎儿的孕妇均知情同意选择了终止妊娠。对所有受检者进行妊娠结局的随访，并于产后3～12个月对新生儿进行跟踪随访，结果均与产前基因诊断结果相符。

目前，对地中海贫血虽无很好的根治办法，但可防可控制，通过采取孕前检查以及产前筛查和诊断等防控措施，可有效减少重型地贫患儿的出生。随着优生遗传学的发展和辅助生殖技术的进步，可以选择胚胎移植前诊断，选择正常基因的胚胎进行移植，避免中期妊娠诊断胎儿异常终止妊娠带给孕妇的身心痛苦。在α-地贫高发地区开展非缺失型α-地贫的筛查与诊断尤为必要，可以为双方均为α-地贫携带者的夫妇提供更加准确的遗传咨询和优生指导，是识别高危人群，预防重型地贫患儿出生的重要手段。

[1] Harteveld CL，Higgs DR. a-thalassaemia[J]. Orphanet J Rare Dis，2010，5(1)：13-34.

[2] Bing Li，Xiao-zhuang Zhang，Ai-hua Yin. High prevance of thalassemia in migrant population in Guangdong province，china[J]. BMC Public Health，2014，14(8)：905.

[3] Old JM. Screening and genetic diagnosis of haemoglobin disorders[J]．Blood Rev，2003，17(1)：43-53.

[4] Ryan K，Bain BJ，Worthington D，et al. Significant thaemoglobin opathies：guidelines for screening and diagnosis[J]．Br J Haematol，2010，149(1)：35-49．

[5] 唐海深，江陵，陆林苑，等. 罕见α-地中海贫血的新生儿筛查与诊断[J]. 中国产前诊断杂志(电子版)，2014，6(1)：13-17.

[6] 许涓涓，丘小霞，杜娟，等. 3种少见α地中海贫血点突变杂合子与双重杂合子的临床特征[J]. 国际生殖健康/计划生育杂志，2014，33(3)：172-174.

[7] 徐湘民. 地中海贫血预防控制操作指南[M]. 北京：人民军医出版社，2011：56-57.

[8] 黄忠，张新华，阮丽明，等. 6000对新婚夫妇非缺失型α-地中海贫血检测结果分析[J]. 检验医学与临床，2011，12(8)：1409-1410.

[9] 余新圆，陈萍，陈文强，等. 广西地区200例儿童α地中海贫血血红蛋白H病基因突变的研究[J]. 广西医科大学学报，2011，28(3)：365-368.

[10] Li J，Liao C，Zhou JY，et al. Phenotypic variability in a Chinese family with nondeletional HbH-Hb Quong Sze disease [J]. Hemoglobin，2011，35(4)：430-433.

[11] Li DZ，Liao C，Li J，et al. Hemoglobin H hydrops fetal is syndrome resulting from the association of the --SEAdeletion and the alpha Quong Sze alpha mutation in a Chinese woman[J]. Eur J Haematol，2005，75(3)：259-261.

[12] Charoenkwan P，Sirichotiyakul S，Chanprapaph P，et al. Anemia and hydrops in a fetus with homozygous hemoglobin constant spring[J]. J Pediatr Hematol Oncol，2006，28(12)：827-830.

Analysis on screening and prenatal diagnosis of non-deletion α-thalassemia in Guangzhou

QU Yanxia1，CHEN Guilan1，TANG Ying1，JIANG Fan1，ZUO Liandong1，GU Junmei2，LI Zhihua3
(1. Guangzhou women and Children’s Medical Center, Guangzhou 510623; 2. Family Planning Service Station of Panyu District, Guangzhou 518000; 3. The Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University, Guangzhou 510150，Guangdong, China)

R715.5

A

1004-616X(2016)02-0145-04

1 0.3969/j.issn.1004-616x.2016.02.013

2015-08-17；

2015-10-26

国家科技支撑计划项目(2006BAI05A02，2012BAI09B01)；广东省计划生育委员会基金项目(2010208，20132031)；广东省科技厅科技基础条件建设项目(2010B060100014)

作者信息： 屈艳霞，E-mail：quyanxia2008@163.com