HPLC法测定清血脂I号胶囊中含姜黄素的量

刘　幸，闫　静，张立剑

(黑龙江中医药大学 药学院，哈尔滨 150040)



HPLC法测定清血脂I号胶囊中含姜黄素的量

刘幸，闫静，张立剑

(黑龙江中医药大学 药学院，哈尔滨 150040)

为建立测定清血脂I号胶囊中姜黄素含量的方法，采用高效液相色谱法，以胶囊中主要有效成分姜黄素为控制指标，进行含量测定方法学考察.采用药典推荐方法，可以快速地进行质量控制检查，该方法重复好，简便易行.可作为清血脂I号胶囊药材的质量控制方法.

清血脂I号胶囊；姜黄素；高效液相色谱法；含量测定

姜黄素(curcumin)是从姜科、天南星科中的一些植物的根茎中提取得到的一种多酚类植物成分，其中，姜黄约含3%～6%，为中药姜黄中的主要有效成分.实验研究证明，姜黄素具有抗氧化、抗炎、抗癌、神经保护作用[1]清除自由基、抗微生物以及对心血管系统、消化系统等多方面药理作用，其抗氧化能力强于维生素E，约为其抗氧化能力的10倍[2].可降低LPS所致小胶质细胞炎症因子的释放[3].减少氧化所致的细胞死亡[4]，也有文献对其在血中代谢等进行了报道[5].

姜黄素是清血脂I号胶囊中的主要成分，作为含量控制的主要指标，本文利用HPLC对其含量进行了研究.

1　材料与仪器

1.1实验材料

清血脂I号胶囊为本室自制产品.

1.2仪器和试剂

1.2.1 仪 器

Agilent1100系列高效液相色谱仪，带Agilent工作站，色谱柱：Waters ODS柱(4.6×150 mm，5 μm)，带1 cm预保护柱.

1.2.2对照品

姜黄素(购自中国药品生物制品检定研究院，批号：110823-200603，试剂：乙腈为色谱纯(天津四环)、甲醇为色谱纯(Fisher公司产品)、其他试剂为分析纯.

2　方法和结果

2.1实验条件的选择

2.1.1流动相及实验条件选择

参照现版药典方法[6]，选择乙腈-水流动相系统的分离效果即可，在水相中加入少量磷酸，可以改善峰形拖尾.选择水相中加入0.1% 时，pH呈酸性，分离效果较佳.

2.1.2实验条件为

流动相：乙腈-水(含0.1%磷酸)(48∶52)，流速：1 mL/min，柱温：25 ℃；检测波长：430 nm.进样体积为10 μL.

图1　清血脂I号胶囊测定HPLC

2.2样品处理

2.2.1对照品溶液的配制

精密称取姜黄素对照品约25 mg，置25 mL容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液.

2.2.2供试品溶液的制备

取清血脂I号胶囊粉末(100目)约5 g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入70%的甲醇25 mL，精密称定，超声处理30 min，取出，振摇，静置至室温，补足质量，取上清液用0.45 μm滤膜滤过，即得.

2.3方法学研究

2.3.1线性范围考察

分别精密吸取上述对照品储备溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL、分别置于25 mL量瓶中，分别加入70%甲醇稀释至刻度，摇匀，按照上述实验条件进样，测定峰面积，以峰面积与进样量作线性回归.线性方程为：

Y=781.28X+0.13，r=0.999 5(n=6)，

线性范围为0.4～2.4 μg，从结果中可以看出浓度与峰面积呈良好的线性相关.

2.3.2精密度试验

取对照品储备溶液2.0 mL，置于25 mL量瓶中，加入70%甲醇稀释至刻度，摇匀，按照上述实验条件进样，测定峰面积，重复进样6次，根据平均值计算RSD，结果为1.21%.

2.3.3重现性试验

取同一份样品多次取样，称量，按上述供试品溶液的制备方法及色谱条件，测定峰面积，计算RSD为1.89%.

2.3.4加样回收率试验

取已经测定含量的同一种样品各约2 g，共6份，精密称定，各自加入一定量的对照品溶液，按含量测定方法项下方法制备供试品溶液，测定含量.根据测得含量减去加入对照品加入量计算回收率，结果见表1.

表1　加样回收率测定结果

2.3.5含量测定

精密称取不同批号的清血脂I号胶囊粉末各5 g，分别按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，再按上述色谱条件进样测定，计算含姜黄素的量，结果见表2.

表2　清血脂I号胶囊中含姜黄素量测定结果

3　结果与讨论

1)在本实验中，进行了不同流动相条件的考察，以乙腈-水-冰醋酸(50∶50∶1)为流动相，流速0.8 mL/min时也可以分离，但本文参照药典方法，采用0.1%的磷酸为流动相，避免了色谱基线的波动.

2)柱温在25～30 ℃的色谱条件下，姜黄素色谱峰能与其他组分的色谱峰达到基线分离.与其邻近色谱峰的分离度达到1.8，目标峰与杂质峰完全分开.姜黄素类含多个羟基，在原植物有相似的双键、酚羟基等，在可见光条件很好地与本品中的其他杂质分开.

[1]王涵东, 梁维邦. 姜黄素的研究进展[J]. 江苏医药, 2014, 40(10): 1193-1194.

[2]崔群力, 孙圣刚. 姜黄素通过抗氧化作用拮抗鱼藤酮所致PC12细胞损伤的研究[J]. 华中科技大学学报, 2010, 39(1): 37-46.

[3]ZHANG L, WU C, ZHAO S,etal. Demethoxycurcumin, a natural derivative of curcumin attenuates LPS-induced pro-inflammatory responses through down-regulation of intracellular ROS-related MAPK/NF-kappaB signaling pathways in N9 microglia induced by lipopolysaccharide [J]. Int Immunopharmacol, 2010, 10(3): 331-338.

[4]SONG S X, GAO J L, WANG K J,etal. Attenuation of brain edema and spatial learning decits by the inhibition of NADPH oxidase activity using apocynin following diffuse traumatic brain injury in rats [J]. Mol Med Rep, 2013,7(1): 327-331

[5]张聪聪, 金若敏. HPLC法测定大鼠血浆中姜黄素的含量及其药动学研究[J]. Chinese Journal of New Drugs, 2014, 23(15): 1829-1832.

[6]国家药典委员会. 中华人民共和国药典(第一部)[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2010. 247.

Content determination of curcumin in Qingxuezhiyihao capsule by HPLC

LIU Xing, YAN Jing, ZHANG Li-jian

(School of Pharmacy, Heilongjiang University of Chinese Traditional Medicine, Harbin 150040, China)

A method for determining the content of curcumin in the capsule of Qingxuezhiyihao was established. HPLC method was used to determine the contents of curcumin as the main active ingredient in Qingxuezhiyihao capsule. According to the method of Pharmacopoeia, the quality control can be carried out quickly by HPLC. This method is repeatable and can be used for quality control of Qingxuezhiyihao capsule.

Qingxuezhiyihao capsule; curcumin; HPLC; content determination

2015-08-24.

刘幸(1992-)，女，硕士，研究方向：配合物药物合成、中药微量元素形态分析及药物质谱学研究.

张立剑(1975-)，男，硕士，副教授，研究方向：中草药活性成分及质量标准的研究.

R286

A

1672-0946(2016)04-0418-03