钩藤超临界CO2流体萃取物化学成分的GC-MS分析*

2016-09-01廖彭莹

广州化工 2016年1期

关键词：钩藤乙酯超临界

廖彭莹

(广西中医药大学，广西　南宁　530001)

钩藤超临界CO2流体萃取物化学成分的GC-MS分析*

廖彭莹

(广西中医药大学，广西南宁530001)

采用超临界CO2流体萃取法提取钩藤的化学成分，应用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对其分析鉴定，共确定了65个化学成分的结构，已鉴定成分相对含量之和占萃取物总量的57.34%，含量较高的成分有棕榈酸(6.34%)和甲氧基肉桂酸乙酯(5.96%)等；该超临界流体萃取物含有多种化学成分，对其进行的分析研究为进一步阐明钩藤的化学物质基础提供了相关依据。

钩藤；超临界CO2流体；GC-MS分析

Abstracts: The chemical constituents of the supercritical CO2fluid extracts fromUncariarhynchophylla(Miq.) Miq. ex Havil. were analyzed by GC-MS method. 65 components were identified from the extracts, accounting for 57.34% of the total content.n-Hexadecanoic acid (6.34%) and 3-(4-methoxyphenyl)-2-propenoic acid ethyl ester (5.96%) were the main constituents. The studies on the supercritical CO2fluid extracts can lay the basis for the further elucidation of the chemical components of this plant.

茜草科钩藤属植物钩藤Uncariarhynchophylla(Miq.) Miq. ex Havil.产于广东、广西、云南、贵州等地，其带钩藤茎为著名中药钩藤，可息风止痉、清风平肝，主要用于治疗小儿惊风、夜啼、热盛动风、子痫等症[1]。该药材含有多种类型的化学成分，包括生物碱类[1]、萜类[2]、黄酮类[3]、脂肪酸类[4]等，生物碱类成分是主要有效成分，人们已经证实其具有多种生物活性，包括降压作用[5]、抗脑缺血作用[6]、抗血栓形成作用[7]等，而关于非生物碱类成分的报道不多。超临界CO2流体萃取法是利用超临界CO2为萃取剂，具有提取速度快、提取效率高、无有机污染、保护热敏性物质等优势，被广泛应用于中药化学成分的提取[8]。段少卿等考察了超临界CO2流体萃取法提取钩藤脂肪酸类成分的工艺条件，并对萃取物进行甲酯化反应，从中鉴定了66种化合物，主要有酯类、脂肪酸类、烯醇类、烯烃类和酚类[4]。为了更全面直接地认识中药钩藤的化学物质基础，特别是其中的非生物碱类成分，本研究采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对钩藤超临界CO2流体萃取物的化学组成直接进行了分析鉴定。

1　材　料

药材：钩藤于2013年6月采于广西靖西，经广西中医药大学韦松基教授鉴定为中药钩藤Uncariarhynchophylla(Miq.) Miq. ex Havil.，标本存放于广西中医药大学，药材自然晾干后粉碎备用。

仪器：超临界CO2流体萃取装置(HL-(5+1)/50MPa-IIAQ)，杭州华黎泵业有限公司；气相色谱-质谱联用仪(HP6890/5973N)，美国安捷伦科技有限公司。

试剂：无水硫酸钠；乙醚(国产分析纯)。

2　方法与结果

2.1超临界CO2流体萃取物的制备

钩藤约100 g经粉碎后采用超临界CO2流体萃取法提取1.5 h，提取条件：流量6.5 kg/h，萃取釜压力28 MPa，萃取温度：63 ℃，分离釜一压力2 MPa，温度88 ℃，分离釜二压力4 MPa，温度40 ℃，最终得到棕色粘稠状固体约4.8 g，用乙醚萃取3次，乙醚液用无水硫酸钠干燥，离心后取上清液用于进样分析。

2.2气相色谱-质谱联用仪分析条件

气相色谱条件：HP-5MS石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；载气为高纯氦气；进样量1 μL；分流比1:20；程序升温条件：柱温70 ℃，以10 ℃/min升温至200 ℃，维持3 min，以8 ℃/min升温至220 ℃，再以10 ℃/min升温至250 ℃，维持2 min，最后升温至280 ℃，维持3 min。质谱条件：电离方式EI，电子能量70 eV，离子源温度230 ℃，接口温度250 ℃，质量范围50～550 amu。

2.3结果

样品按上述实验条件进样，得到钩藤超临界CO2流体萃取物的总离子流图，对各峰进行质谱扫描，计算机检索NIST05a、Wiley275标准谱库，从中筛选出匹配度大于90%的成分，然后结合人工解析、文献比对等方法，分别对各峰进行鉴定，共确认了65个化学成分的结构，采用峰面积归一化法测定了各成分的相对含量，结果见表1。

表1　钩藤超临界CO2流体萃取物的GC-MS分析

续表1

3311.241,2,4a,5,6,8a-Hexahydro-4,7-dimethyl-1-(1-methylethyl)-naphthaleneC15H240.113411.32杜松烯;(1S-cis)-1,2,3,5,6,8a-hexahydro-4,7-dimethyl-1-(1-methylethyl)-naphthalene,C15H240.323511.61月桂酸;DodecanoicacidC12H24O20.113611.653,4-Dihydro-8-hydroxy-3-methyl-1H-2-benzopyran-1-oneC10H10O30.123712.05十六烷;HexadecaneC16H340.443812.14喇叭茶醇;LedolC15H26O0.523912.24绿花白千层醇;[1aR-(1aα,4β.,4aβ,7α,7aβ,7bα)]-decahydro-1,1,4,7-tetramethyl-1H-cycloprop[e]azulen-4-olC15H26O0.324012.36细辛脑;(Z)-1,2,4-trimethoxy-5-(1-propenyl)-benzeneC12H16O30.244112.86早熟素II;6,7-Dimethoxy-2,2-dimethyl-2H-1-benzopyranC13H16O31.134212.91β-桉叶醇;β-eudesmolC15H26O0.254313.05细辛脑;(Z)-1,2,4-trimethoxy-5-(1-propenyl)-benzeneC12H16O30.364413.161,6-Dimethyl-4-(1-methylethyl)-naphthaleneC15H180.294513.19十七烷;HeptadecaneC17H360.434613.44吉马酮;(E,E)-(1-methylethylidene)-3,7-Dimethyl-10-3,7-cyclodecadien-1-oneC15H22O0.324713.542,4,5-三甲氧基苯甲醛;2,4,5-Trimethoxy-benzaldehydeC10H12O40.394813.97肉豆蔻酸;TetradecanoicacidC14H28O20.294914.09甲氧基肉桂酸乙酯;3-(4-Methoxyphenyl)-2-propenoicacidethylesterC12H14O35.965014.47十八烷;OctadecaneC18H380.235115.20植酮;6,10,14-Trimethyl-2-pentadecanoneC18H36O0.145216.09十九烷;NonadecaneC19H400.595317.41棕榈酸;n-HexadecanoicacidC16H32O26.345417.75棕榈酸乙酯;HexadecanoicacidethylesterC18H36O21.985519.04松香三烯;(4aS-trans)-1,1,4a-trimethyl-7-(1-methylethyl)-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahydro-phenanthreneC20H301.135619.35二十一烷;HeneicosaneC21H441.115719.59叶绿醇;PhytolC20H40O3.415820.26亚油酸乙酯;LinoleicacidethylesterC20H36O22.595920.33油酸乙酯;EthyloleateC20H38O22.936020.63硬脂酸乙酯;OctadecanoicacidethylesterC20H40O20.836120.67二十二烷;DocosaneC22H460.586221.12二十五烷;PentacosaneC25H520.786322.041-氯二十一碳烷;1-ChloroeicosaneC20H41Cl0.886422.45铁锈醇;FerruginolC20H30O2.236522.74反式角鲨烯;(all-E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyl-2,6,10,14,18,22-tetracosahexaeneC30H500.97

从表1可知，已鉴定65种化学成分相对含量之和占萃取物总量的57.34%，类型包括脂肪族类(26.00%)、萜类(18.24%)和芳香族类(13.10%)，含量较高的成分有棕榈酸(6.34%)、甲氧基肉桂酸乙酯(5.96%)、叶绿醇(3.41%)、油酸乙酯(2.93%)、亚油酸乙酯(2.59%)、铁锈醇(2.23%)和棕榈酸乙酯(1.98%)。

3　讨　论

与文献[4]的研究相比，本研究从钩藤超临界CO2流体萃取物中也未检出生物碱类成分，同样检出十四烷、十五烷、十六烷、十八烷、十九烷、二十五烷、2,6-二叔丁基对甲酚、植酮、棕榈酸和反式角鲨烯，其余成分则均为首次从该植物检出。本萃取物所含部分化学成分生理活性较强，α-蒎烯有镇咳、祛痰、抗真菌等作用[9]；樟脑有局部刺激和防腐作用，可用于神经痛、炎症和跌打损伤的搽剂[10]；4-萜烯醇和α-松油醇具有平喘、抑菌作用[11]；百里香酚具有防腐性、可用于口腔卫生品中[12]；榄香烯能抑制癌细胞增殖，是抗癌的有效活性物质[13]；石竹烯具有一定的平喘作用，可治疗慢性支气管炎[14]；细辛脑具有解痉、抗惊厥作用[15]；2,6-二叔丁基对甲酚作为抗氧化剂被广泛应用于食品和药品行业中[16]；β-桉叶醇能够明显促进正常小鼠的胃肠运动，对胃肠运动机能有双向调节作用[17]。

超临界CO2流体萃取法提取温度低，可有效保护化学成分不受高温破坏，提取物的极性覆盖范围比水蒸气蒸馏法更宽，不仅包含大量挥发性成分，还包括一些低极性难挥发成分[18]。本研究所得钩藤超临界CO2流体萃取物含有多种活性成分，说明该法适合钩藤非生物碱类有效成分的提取，这为全面阐明中药钩藤的化学物质基础提供了一定的理论依据。

致谢：感谢国家中医药管理局科研三级实验室中(壮)药化学与质量分析实验室、广西高校中药提取纯化与质量分析重点实验室提供实验仪器及场所。

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1999(6):483.

[2]邓美彩,焦威,董玮玮,等.钩藤化学成分的研究[J].天然产物研究与开发,2009,21(2):242-245.

[3]薛梅,黄国强,闫豫君,等.钩藤中总黄酮的提取与含量测定[J].内蒙古中医药,2004,3(1):29.

[4]段少卿.钩藤化学成分及抗氧化活性研究[D].桂林:广西师范大学化学化工学院,2010.

[5]张丽心,孙涛,曹永孝.钩藤碱的降压及舒张血管作用[J].中药药理与临床,2010,26(5):39-41.

[6]胡雪勇,孙安盛,余丽梅,等.钩藤总碱抗实验性脑缺血的作用[J].中国药理学通报,2004,20(11):1254-1256.

[7]陈长勋,金若敏,李仪奎,等.钩藤碱抗血小板聚集和抗血栓形成的作用研究[J].医学研究通讯,1999,28(1):8.

[8]杨必成,杨义芳.超临界流体萃取中药及天然产物的样品制备和预处理方法研究进展[J].中草药,2010,41(8):1391-1394.

[9]杨永利,郭守军,马瑞君,等.下田菊挥发油化学成分的研究[J].热带亚热带植物学报,2007,15(4):355-358.

[10]吴立军.天然药物化学.6版[M].北京:人民卫生出版社,2014:238.

[11]蒋玲燕,李清,陈晓辉,等.GC法同时测定鱼腥草注射液中4种成分的含量[J].药物分析杂志,2011,31(4):664-667.