紫外分光光度法测定川射干叶的总黄酮含量※

罗 森 袁崇均 陈 帅 王 笳

紫外分光光度法测定川射干叶的总黄酮含量※

罗 森 袁崇均 陈 帅 王 笳

目的 建立川射干叶中总黄酮含量测定的方法。方法 采用紫外分光光度法测定川射干叶中总黄酮的含量，以射干苷为对照品，测定波长为 266 nm。结果 射干苷在 0.8244～9.0684 µg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系，r=0.9998，回收率为99.48%，RSD为1.23%，川射干总黄酮的平均含量为3.42%。结论 该方法操作简便、灵敏、准确、具有良好的重复性和回收率，可作为川射干叶的总黄酮含量测定方法。

紫外分光光度法；川射干叶；总黄酮；含量测定

【Abstract】Objective To establish a method for determination of total flavonoids in leaves of Iris tectorum Maxim. Methods Determination of total flavonoids in leaves of Iris tectorum Maxim. by UV spectrophotometry，Belamcandin as control sample，the detection wavelength was 266 nm.Results Belamcandin in 0.8244～9.0684 µg/ml range and absorbance showed good linear relationship，r=0.9998，recovery rate was 99.48%，RSD=1.23%，the average content of the total flavonoids in chuanshegan 3.42%.Conclusion The method is simple，sensitive，accurate and has good repeatability and recovery rate can be used for determination of total flavonoids content in leaves of Iris tectorum Maxim..

【Key words】Ultraviolet spectrophotometric method；The leaves of Iris tectorum Maxim.；Total flavonoids；Determination of content

川射干为鸢尾科植物鸢尾 Iris tectorum Maxim.的干燥根茎，主产于四川、重庆、贵州、云南、广西等省份，具有清热解毒、祛痰、利咽的功效，用于热毒痰火郁结，咽喉肿痛、痰涎壅盛、咳嗽气喘［1］，其总黄酮提取物有很强的药理作用［2-5］。而一种植物的不同部位，一般具有相似的化学成分，在川射干叶中发现其含有丰富的总黄酮成分，为了便于对其进行研究，本研究以射干苷为对照品，对川射干叶的总黄酮含量进行了测定。

1 仪器与材料

1.1 试验仪器 UV-2401PC型紫外分光光度计（岛津），CPA225D型电子天平（赛多利斯），KQ-500E型超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司）。

1.2 试验材料 川射干叶由本院中药种植与资源所夏燕莉副研究员提供，采自其川射干培育基地（四川省成都市双流县），经鉴定为鸢尾科鸢尾属植物鸢尾Iris tectorum Maxim.的叶，对照品射干苷（自制，批号：20130701，含量＞99%）。

1.3 试验试剂 乙醇为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备 取川射干叶鲜叶，洗净、剪碎、烘干，粉碎成细粉（过 60目筛），精密称取500 mg，置于具塞三角瓶中，加入50 ml 70%乙醇，称定重量，超声30 min，取出，补足减失的重量，混匀，过滤，取续滤液，摇匀，备用。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取经105 ℃干燥至恒重的射干苷对照品10 mg于50 ml容量瓶中。用70%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，备用。

2.3 含量测定方法 精密吸取对照品溶液 1.0 ml、供试品溶液1.0 ml分别置于50 ml容量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。以 70%乙醇为空白，按紫外分光光度法，在266 nm波长处测定吸收度，并计算其含量。

2.4 测定波长的选择 取2.1和2.2项下溶液各1.0 ml，分别置于50 ml容量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。以70%乙醇为空白，在200～400 nm范围内扫描吸收曲线，供试品与对照品的吸收曲线形状一致，在266 nm处有最大吸收峰。故确定266 nm为测定波长。

2.5 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2 ml 于50 ml容量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，在266 nm波长处以70%乙醇为空白，测定吸收度。以浓度C（横轴）对吸收度A（纵轴）作图，得一条略高于原点的直线，线性方程为y=0.1099x-0.017，r=0.9998（n=11），线性范围为0.8244～9.0684 µg/ml。

2.6 精密度试验 取2.1和2.2项下溶液各1.0ml，分别置于50 ml容量瓶中，按2.3项下含量测定方法重复测定 6次。测得的吸收度值无明显变化，对结果进行计算，RSD分别为0.42%、0.57%。

2.7 稳定性试验 取2.1和2.2项下溶液各1.0 ml，分别置于50 ml容量瓶中，按2.3项下含量测定方法于0、1、2、3、4、5、6 h进行测定。测得的吸收度值无明显变化，对结果进行计算，RSD=0.85%，表明对照品、供试品溶液在6 h内稳定。

2.8 重现性试验 取川射干叶细粉 6份，每份约500 mg，精密称定，按2.1项下方法制备供试品溶液，另取2.2项下对照品溶液，按2.3项下含量测定方法进行测定，对结果进行计算，结果样品总黄酮含量为 3.425，RSD=1.16%（n=6），表明该方法重现性良好。

2.9 加样回收率试验 取已知总黄酮含量（3.39%）的川射干叶细粉约250 mg，共6份，精密称定，加入适量的对照品，按2.1项下方法制备6份供试品溶液，并按2.3项下含量测定方法测定总黄酮含量，计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n=6）

2.10 样品含量测定 取川射干叶鲜叶，洗净、剪碎、烘干，粉碎成细粉（过60目筛），每份约500 mg，按2.1项下方法制备供试品溶液，按2.3项下含量测定方法进行测定，计算 5份样品的含量测定结果，见表2。

表2 川射干叶含量测定结果

3 讨论

在样品制备方法考察时，本研究比较了超声处理30 min和70%乙醇回流提取1 h两种处理方法，通过波长扫描和含量测定，结果无明显差异。对超声处理时间的选择上，分别选择 10、20、30、40、50、60 min进行比较，结果发现超声处理30 min以上样品含量达到最大，后续时间延长无显著差异，故选用超声提取30 min。

川射干的代表性成分，如射干苷、射干苷元、二甲基射干苷元等均为异黄酮成分，其总黄酮含量的高低是其实现药理作用的关键。川射干叶所含的代表性成分与药材相似，可能存在与川射干药材相似的药理作用。通过本研究方法可以对川射干叶的总黄酮含量进行测定，具有良好的重现性和准确性，为更好地研究利用这一植物药材资源提供了技术支持。

［1］ 中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典（2015年版一部）［S］.北京:中国医药科技出版社，2015:41-42.

［2］ 刘亚灵，宁楠，李利民.咽喉康胶囊的镇痛和止咳作用［J］.华西药学杂志，2007，22（6）:647-649.

［3］ 袁崇均，王笳，陈帅，等.川射干化学成分的研究［J］.天然产物研究与开发，2008，20（3）:444-446.

［4］ 袁崇均，王笳，陈帅，等.射干苷标准品质量标准研究［J］.中国药房，2008，19（33）:2594-2596.

［5］ 袁崇均，王笳，陈帅，等.川射干总黄酮含量测定方法的比较研究［J］.四川中医，2009，27（8）:58-59.

UV spectrophotometric Determination of Total Flavonoid in Leaves of Iris tectorum Maxim.

Luo Sen Yuan Chongjun Chen Shuai Wang Jia

R927.2；R284

A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.08.002

四川省中医药科学院，四川成都 610041

※四川省公益性科研院所基本科研项目（编号：A-2014N-3）

罗森（1982-），助理研究员。主要从事中药药学研究。E-mall：mnmls@163.com