神经节苷脂钠对中枢神经系统胶质瘤术后患者Treg及Th17细胞的影响

李兴，牟朝晖

(台州市第一人民医院 神经外科，浙江 台州 318020)

神经节苷脂钠对中枢神经系统胶质瘤术后患者Treg及Th17细胞的影响

李兴Δ，牟朝晖

(台州市第一人民医院 神经外科，浙江 台州 318020)

目的探讨神经节苷脂钠对中枢神经系统胶质瘤术后患者Treg及Th17细胞的影响。方法选取2014年3月～2015年12月台州市第一人民医院神经外科收治的Ⅱ-Ⅳ级中枢神经系统胶质瘤术后患者66例，按随机数字表法分为对照组和研究组，各33例。对照组给予同步放化疗治疗，研究组在对照组基础上联用神经节苷脂钠(100 mg/d)，分别测定2组外周血淋巴细胞亚群、Th17细胞及Treg细胞含量，同时对比临床疗效及不良反应情况。结果与治疗前相比，2组治疗后胶质瘤组织TGF-1、IL-10含量降低，胶质瘤组织基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-2、MMP-9含量降低；外周血CD3+CD4+、CD4+/CD8+含量升高，CD3+CD8+含量降低；外周血Th17细胞及Treg细胞含量降低，差异均具有统计学意义(P<0.05)；与对照组相比，研究组治疗后胶质瘤组织TGF-1、IL-10含量较低，胶质瘤组织MMP-1、MMP-2、MMP-9含量较低，外周血CD3+CD4+、CD4+/CD8+含量较高，CD3+CD8+含量较低，外周血Th17细胞及Treg细胞含量较低，差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论神经节苷脂钠对中枢神经系统胶质瘤术后具有辅助作用，可以降低Treg及Th17细胞含量，提高免疫功能。

神经节苷脂钠；中枢神经系统胶质瘤术后；Treg；Th17

中枢神经系统胶质瘤临床预后效果较差，据报道其5年生存率仅9.8%[1]，给患者生理及精神状态带来极大的影响。目前，胶质瘤推荐方案为手术治疗，术后采用放化疗对预后效果进行辅助治疗，取得了显著的临床疗效[2-3]，同时逐步受到临床医务人员重视。由于神经系统胶质瘤与机体健康组织连接，恶性程度较大，术后存在完全切除率低，复发率及死亡率高的缺陷。术后遗留的瘤体周围组织病理、功能障碍对长期预后产生影响，因此采取有效措施恢复神经功能，促进预后意义重大。随着研究的不断发展，发现神经节苷脂钠是治疗中枢神经疾病的有效药物之一[4]，具有抗氧化和修复神经元的作用[5]，对于脑肿瘤患者神经功能恢复方面具有巨大潜力。据报道诸多实验室指标例如Treg及Th17细胞与中枢神经系统胶质瘤患者术后恢复具有一定相关性[6]，近年来台州市第一人民医院采用神经节苷脂钠治疗中枢神经系统胶质瘤术后恢复，取得了一定的疗效，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年3月～2015年12月台州市第一人民医院神经外科收治的Ⅱ-Ⅳ级中枢神经系统胶质瘤常规开颅患者66例，按随机数字表法分为对照组和研究组，各33例。对照组：男性16例，女性17例；年龄19～58岁，平均(35.69±7.57)岁；组织病理：星型细胞瘤28例，胶质母细胞瘤5例。研究组：男性15例，女性18例；年龄18～57岁，平均(36.12±7.83)岁；组织病理：星型细胞瘤27例，胶质母细胞瘤6例。2组患者性别、年龄及组织病理等一般资料差异无统计学意义。本试验方案获得患者知情同意，并得到医院相关伦理委员会批准。

纳入标准：①经术后病理诊断确诊，符合《中国中枢神经系统胶质瘤诊断和治疗指南(2012精简版)》[7]中的诊断标准；②行常规开颅手术切除胶质肿瘤；③KPS评分≥60分且生存期限>3个月；④年龄18～58岁；⑤临床资料完整，意识清楚，无智力和表达障碍，遵医嘱按时服药，治疗过程中配合检查者。

排除标准：①年龄>58岁或<18岁；②合并严重的心肝肾、内分泌和消化性溃疡、不稳定糖尿病者；③合并多发性胶质瘤或伴有其他恶性肿瘤者；④既往未接受过其他放、化疗或存在禁忌证或过敏者；⑤癫痫、哺乳期或妊娠期妇女，严重精神障碍难以配合检查者；⑥治疗依从性较差、未按规定服药者。

剔除标准：①不符合上述标准而纳入治疗过程者；②治疗期间难以遵医嘱服药或使用研究以外的其他药物治疗者；③治疗期间难以忍受不良反应而放弃研究者；④治疗期间出现其他严重并发症难以继续治疗者。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法：2组入院后行常规治疗，降低颅内压、神经营养支持、脱水、抗感染等对症治疗，维持水、电解质及酸碱平衡；治疗期间，2组停用其他对疗效影响的药物，停止原有治疗方案，行常规生化、肝肾功能检测。对照组给予同步放化疗治疗，术后2～4 w采用直线加速器对全脑进行放射，靶体积为胶质肿瘤边界2～3 cm，放射剂量2Gy/次，5次/周，持续6 w；同时口服替莫唑胺胶囊(江苏天士力帝益药业有限公司，国药准字:H20040637)体表面积150 mg/m2·d，连续服用5 d，在血象允许范围内，下一周期调整服用药量200 mg/m2·d，连续服用5d，共持续5个周期。研究组在对照组基础上联用神经节苷脂钠治疗，单唾液酸四己糖神经节苷脂钠(京赛而生物药业有限公司，国药准字H20090335)100 mg静脉滴注，1次/天，连续治疗7 d。若存在恶心呕吐、头痛者给予20%甘露醇及地塞米松或昂丹司琼；癫痫急性发作服用癫痫药物。嘱咐勿使其过度劳累,禁食生冷、辛辣、黏腻食物。

1.2.2 肿瘤组织指标测定：①研磨并采用超声破碎肿瘤组织，3 000 r/min离心并收集上层液体，低温保存待测，采用酶联免疫吸附试验(Elisa)测定TGF-1、IL-10含量，酶标仪为上海永创医疗器械有限公司提供的SM600酶标仪，试剂盒由RayBio提供；②同样措施收集上层液体，低温保存待测，采用免疫组化SP法测定MMP-1、MMP-2、MMP-9含量，酶标仪为上海永创医疗器械有限公司提供的SM600酶标仪，试剂盒由长岛生物技术有限公司提供。由我院培训的专业人员于治疗前后进行测定，操作过程完全参照试剂盒要求进行。

1.2.3 血液学指标测定：①淋巴细胞亚群检测：抽取所有患者晨起空腹静脉血2 mL，免疫荧光染色，采用美国Beckman CouLter FC500流式细胞仪进行检测淋巴细胞亚群，包括外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+水平，试剂盒由美国Beckman CouLter公司提供；②外周血Th17及Treg细胞含量检测：抽取所有患者晨起空腹静脉血2 mL，免疫荧光染色，采用美国BeckmanCouLterFC500流式细胞仪进行检测，CD3+阳性表达、CD8+阴性表达且IL-17阳性表达的T细胞为Th17细胞；CD4+、CD25+高表达且CD127+低表达的T细胞为Treg细胞，试剂盒由美国Beckman CouLter公司提供。

1.2.4 临床疗效：治疗前后行颅脑MRI扫描，参照WHO实体瘤评判标准[8]制定如下临床疗效判定标准：①治疗后临床症状、体征完全缓解，病灶消失为完全缓解(complete remission，CR)；②治疗后临床症状、体征缓解，病灶体积缩小≥50%为部分缓解(partial remission，PR)；③治疗后病灶体积无变化或缩小<50%为稳定(stable disease，SD)；④病灶体积增加>25%为进展(progressive disease，PD)。有效率=(完全缓解+部分缓解)/总例数×100%。

1.2.5 安全性分析：治疗期间行体格检查及常规检测，同时记录并对比药物不良反应情况。

2 结果

2.1 2组胶质瘤组织TGF-1、IL-10含量比较 与治疗前相比，2组治疗后胶质瘤组织TGF-1、IL-10含量降低(P<0.05)；与对照组相比，研究组治疗后胶质瘤组织TGF-1、IL-10含量较低(P<0.05)。见表1。

表1 2组治疗前后胶质瘤组织TGF-1、IL-10含量比较Tab.1 Comparison of the content of TGF-1 and IL-10 in Glioma tissue between two groups before and after the treatment (±s,%)

*P<0.05，与治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组比较，compared with control group

2.2 2组胶质瘤组织基质金属蛋白酶含量比较 与治疗前相比，2组治疗后胶质瘤组织MMP-1、MMP-2、MMP-9含量降低(P<0.05)；与对照组比较，研究组治疗后胶质瘤组织MMP-1、MMP-2、MMP-9含量较低(P<0.05)。见表2。

表2 2组治疗前后胶质瘤组织基质金属蛋白酶含量比较Tab.2 Comparison the content of matrix metalloproteinases in glioma tissue between two groups before and after the treatment (±s,%)

*P<0.05，与治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组比较，compared with control group

2.3 2组间外周血淋巴细胞亚群检测含量比较 与治疗前比较，2组治疗后外周血CD3+CD4+、CD4+/CD8+含量升高(P<0.05)，CD3+CD8+含量降低(P<0.05)；与对照组比较，研究组治疗后外周血CD3+CD4+、CD4+/CD8+含量较高(P<0.05)，CD3+CD8+含量较低(P<0.05)。见表3。

*P<0.05，与治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组比较，compared with control group

2.4 2组间外周血Th17细胞及Treg细胞含量比较 与治疗前比较，2组治疗后外周血Th17细胞及Treg细胞含量降低(P<0.05)；与对照组比较，研究组治疗后外周血Th17细胞及Treg细胞含量较低(P<0.05)。见表4。

表4 2组间治疗前后外周血Th17细胞及Treg细胞含量比较Tab.4 Comparison the content of Th17cell and Treg cell in serum between two groups before and after the treatment (±s,%)

*P<0.05，与治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组比较，compared with control group

2.5 2组间临床疗效比较 治疗后，对照组治疗总有效率75.76%与研究组治疗总有效率84.85%相比，差异无统计学意义。见表5。

表5 2组间临床疗效比较[n(%)]Tab.5 Comparison of clinical effect in two groups[n(%)]

2.6 安全性分析 所有患者均获得随访，无病例脱落现象，治疗期间2组不良反应多表现为恶心呕吐、乏力、肝肾功能异常等，多为轻中度，予以止吐等处理后症状消失，对研究过程未产生影响，2组间不良率差异无统计学意义。

3 讨论

胶质瘤是中枢神经系统的恶性肿瘤，临床较为常见且预后较差[9]，约占颅内肿瘤的50%～60%，是引起临床死亡的主要肿瘤。多呈浸润性生长，具有侵袭性强、易复发的生物学特点。神经胶质瘤与正常脑组织之间的界限较为模糊，另外因脑组织解剖部位较为特殊，给治疗带来极大困难。临床治疗的金标准多以手术切除胶质瘤体为主，配合术后放疗、化疗等诸多措施来抑制胶质肿瘤周围组织恶化，提高生活质量，促进预后效果[10]。然而由于无法完全切除瘤体，多数胶质瘤患者术后易复发，对神经胶质瘤术后功能恢复产生一定局限性。随着对胶质肿瘤病理机制的研究进展，采用综合治疗已经成为必然趋势[11]。近年来多种药物不断出现，为脑胶质瘤术后恢复提供了治疗方案。神经节苷脂主要存在于中枢神经系统中，动物模型及临床试验显示孕妇补充神经节苷脂有利于胎儿大脑发育[12]，其在神经外科广泛应用于脑水肿、脑中风或颅脑手术后遗症的康复治疗。然而临床关于神经节苷脂钠对中枢神经系统胶质瘤术后患者Treg及Th17细胞影响的文献报道较少。

炎症因子指标对免疫功能具有一定的抑制作用。TGF-1、IL-10均是细胞免疫抑制因子，在中枢神经系统胶质瘤微环境中由肿瘤细胞分泌，抑制机体的免疫杀伤，促进胶质瘤的恶变及复发，可作为评价胶质瘤进展及预后的免疫指标[13]。本研究结果显示，经神经节苷脂钠治疗后胶质瘤组织TGF-1、IL-10含量将低，说明神经节苷脂钠对促进胶质瘤术后恢复与降低TGF-1、IL-10含量具有一定相关性。

随着中枢神经系统胶质瘤恶性程度增高，其分泌的基质金属蛋白酶含量也会相应增多，以MMP-1、MMP-2、MMP-9含量增高为主，可作为临床判断胶质瘤恶性程度、侵袭性及预后的指标[14-16]，因此探讨治疗后基质金属蛋白酶含量变化对判断中枢神经系统胶质瘤术后恢复具有重要意义。神经节苷脂在神经生长、分化过程中起必不可少的作用，促进神经轴突生长和突触形成、恢复神经支配功能，保护细胞膜，促进细胞各种酶活性恢复[17]。其应用于胶质瘤术后可以改善代谢，减少炎症因子，逐渐恢复神经功能和脑认知功能。本研究结果显示，经神经节苷脂钠治疗后胶质瘤组织MMP-1、MMP-2、MMP-9含量较低，说明神经节苷脂钠辅助治疗可以降低胶质瘤术后恶性增殖和复发，促进术后恢复效果。

中枢神经胶质瘤的发病过程与机体免疫功能具有一定相关性，检测淋巴细胞亚群含量成为判断其预后的重要指标，据报道胶质瘤患者体内淋巴细胞亚群改变，CD4+、CD25+、Treg水平升高，导致恶性胶质瘤患者免疫功能低下，促进肿瘤细胞的发生、发展[18-19]。神经节苷脂能够诱导中枢神经系统脑胶质瘤细胞U251自噬性死亡，为恶性脑胶质瘤的治疗提供新的方向[20-21]。本研究结果显示，经神经节苷脂钠治疗后外周血CD3+CD4+、CD4+/CD8+含量较高，CD3+CD8+含量较低，外周血Th17细胞及Treg细胞含量较低，说明神经节苷脂钠促进胶质瘤术后恢复与降低Treg及Th17细胞含量、调节细胞免疫及体液免疫功能关系密切。

本次研究发现神经节苷脂钠辅助治疗中枢神经系统胶质瘤术后疗效确切，可降低Treg及Th17细胞含量，提高免疫功能，安全性高。但由于本次研究时间、样本数有限，关于神经节苷脂钠辅助治疗中枢神经系统胶质瘤术后的恢复效果需要循证医学来证实。

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(编校：苗加会)

EffectsofgangliosidesodiumonTregandTh17cellsinpostoperativepatientswithgliomaofthecentralnervoussystem

LI XingΔ, MOU Chao-hui
(Department of Neurology, Taizhou First People’s Hospital, Taizhou 318020, China)

ObjectiveTo investigate effects of ganglioside sodium on Treg and Th17 cells in postoperative patients with glioma of the central nervous system.Methods66 cases of II-IV central nervous system glioma patients were selected from March 2014 to December 2015,randomly divided into 2 groups,33 cases respectively.Control group

chemoradiation therapy,experiment group combined with ganglioside sodium for injection (100 mg/d) on the basis of the control group,The levels of lymphocyte subsets,Th17 cells and Treg cells in peripheral blood were measured, and compared the clinical efficacy and adverse reactions.ResultsCompared with before treatment,the levels of TGF-1 and IL-10 in glioma tissue decreased after treatment,the expression of MMP-1, MMP-2 and MMP-9 in glioma tissue was decreased;The levels of CD3+CD4+and CD4+/CD8+increased,CD3+CD8+decreased;The content of Th17 cells and Treg cells in peripheral blood decreased,all the difference were statistically significant(P<0.05).Compared with the control group, the contents of TGF-1 and IL-10 in glioma tissues were lower in the experiment group after treatment, the content of MMP-1, MMP-2 and MMP-9 in glioma tissues were lower,levels of CD3+CD4+and CD4+/CD8+in the peripheral blood were higher,CD3+CD8+content were lower,Th17 and Treg cells in the peripheral blood were lower,all the difference were statistically significant(P<0.05).ConclusionGanglioside sodium for injection in the treatment postoperative glioma of central nervous system was effective, and its possible mechanism may due to the reducing of the content of Treg and Th17 cells, and the improving of the immune function.

ganglioside sodium; central nervous system glioma after surgery; Treg; Th17

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.10.013

李兴，通信作者，男，硕士，住院医师，研究方向：脑血管病的外科治疗，E-mail:lixingsad@163.com。

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