鸡鸭鹅新城疫病毒毒力及生物学特性的研究

路振香，，张训海，，郭伟娜，，杨　平，徐义巧，刘　畅，（.安徽科技学院动物科学学院，安徽 凤阳 3300；.家禽疫病防控监测安徽省重点实验室，安徽 凤阳 3300）

鸡鸭鹅新城疫病毒毒力及生物学特性的研究

路振香1，2，张训海1，2，郭伟娜1，2，杨平1，徐义巧1，刘畅1，2
（1.安徽科技学院动物科学学院，安徽 凤阳 233100；2.家禽疫病防控监测安徽省重点实验室，安徽 凤阳 233100）

为了测定鸡、鸭、鹅新城疫病毒的毒力强弱。测定其血凝价、血凝素热稳定性试验、血凝解脱试验、氯仿敏感性试验、耐酸性试验，并对3株病毒进行理化特性测定；测定其1日龄雏鸭脑内接种致病指数、6周龄鸭静脉接种致病指数和对13日龄非免疫鸭胚的半数感染量（EID50）。结果鸡、鸭、鹅新城疫病毒的血凝价依次为29、28、28；血凝素热稳定性指数分别为5、15、15 min；血凝均为快速解脱型；对氯仿敏感；对pH值3.0、pH值5.0均敏感；1日龄雏鸭脑内致病指数分别为0.59、0.84、1.04；6周龄静脉接种致病指数均为0；对13日龄鸭胚的半数感染量（EID50）分别为：10-5.31/0.1 mL、10-6.5/ 0.1 mL，10-7.79/0.1 mL。表明鸡新城疫为中等偏弱毒力毒株，而鸭、鹅新城疫病毒均为中等毒力毒株。

新城疫病毒；生物学特性；毒力测定

鸡新城疫是由鸡新城疫病毒（Newcastle dis⁃ease virus，NDV）引起的一种主要侵害鸡、火鸡、野禽和观赏鸟，亦可感染人的高度接触性、急性、致死性传染病。以往人们一直认为，鹅感染新城疫病毒后一般只带毒和排毒，但不发病。自1997以来，鹅发生新城疫的报道较多，并引起很高的发病率和死亡率[1]，从而改变了人们认为NDV对水禽不致病的观点。

为了弄清从送检的疑似新城疫的病死鸡、鸭、鹅的脑组织中分离的新城疫病毒的毒力强弱，本文对3株新城疫病毒的毒力及生物学特性进行研究。

1　材料与方法

1.1材料非免疫的13日龄鸭胚180枚，采用血凝抑制试验抽检其新城疫病毒的抗体效价为0，购自凤阳武店，在安徽科技学院畜牧科技园孵化至13日龄；病毒 鸡、鸭、鹅新城疫病毒均分别从送检的疑似新城疫的鸡、鸭、鹅的脑组织中分离鉴定得到；9～10日龄SPF鸡胚，购自南京药械厂；1日龄雏鸭50只，购自凤阳某孵化室，6周龄鸭为购买的1日龄雏鸭经隔离饲养获得。

1.2方法

1.2.1血凝试验按参考文献[2]方法进行。

1.2.2病毒理化特性测定血凝素热稳定性试验参考诸敏等[3]、范根成等[4]方法进行；血凝解脱试验参考范根成等[4]、姜平等[2]方法进行；氯仿敏感性试验按文献[1、6]方法进行；耐酸性试验按文献[1]方法进行。

1.2.3病毒毒力测定1日龄雏鸭脑内致病指数（ICPI）参考文献[7]方法进行。6周龄鸭静脉接种致病指数（IVPI）参考文献[7]方法进行。鸡、鸭、鹅新城疫病毒对鸭胚半数感染量（即EID50）的测定。

按参照文献[1]的方法进行。将病毒液进行10倍递进梯度稀释，即病毒的稀释倍数依次为1∶ 10，1∶102，……，至1∶1012，每一稀释度病毒液接种5枚鸭胚，接种部位为绒毛尿囊腔内，每胚接种0.1 mL，另设对照组，即每枚鸭胚接种0.1 mL生理盐水。接种后将鸭胚继续置于37.5℃孵化，每天上、下午各照蛋1次，弃去24 h内死亡的鸭胚，观察至小鸭出壳，对死亡鸭胚进行记录。死亡鸭胚，置4℃过夜，然后观察鸭胚病变。

2　结果

2.1鸡、鸭、鹅新城疫病毒的血凝价依次为：29、28、28。

2.2病毒理化特性测定结果。

2.2.1血凝素热稳定性试验结果见表1。

表1　血凝素热稳定性试验结果

由表1可看出，鸡、鹅新城疫病毒的血凝价在56℃，5 min内迅速下降，前者在20 min后血凝性完全消失，后者则在40 min后血凝性完全消失；鸭新城疫病毒在56℃，5 min内仅下降1个滴度，15 min内迅速下降，40 min后血凝性完全消失。以血凝价下降21的最短受热时间作为该毒株的血凝素热稳定性指数，所以鸡、鸭、鹅新城疫病毒的血凝素热稳定性指数分别为5、15、15 min。

2.2.2血凝解脱试验结果见表2。

表2　血凝解脱试验结果

由表2可以看出，鸡、鸭、鹅新城疫病毒在第1次悬浮过夜和第2次悬浮2 h后的血凝价均变为0，表明3种病毒均不凝集，可判定这3株病毒为快速解脱型。

2.2.3氯仿敏感性试验结果见表3。

从表3可看出，3株病毒与对照组相比，试验组血凝价均明显下降，说明鸡、鸭源、鹅新城疫病毒均对氯仿敏感。

2.2.4耐酸性试验结果见表4。

表4　耐酸性试验结果

由表4可看出，3株病毒经pH值5.0、pH值3.0处理后，试验组的血凝价均比对照组明显下降，表明3株病毒对pH值5.0、pH值3.0均敏感。

2.3病毒毒力测定结果

2.3.11日龄雏鸭脑内致病指数（ICPI）测定结果

鸡、鸭、鹅新城疫病毒的1日龄雏鸭脑内致病指数分别为0.59、0.84和1.04。

2.3.26周龄鸭静脉接种致病指数（IVPI）测定结果3株新城疫病毒的6周龄静脉接种致病指数均为0，接种后小鸭均未发病。

2.3.3鸡、鸭、鹅新城疫病毒对鸭胚的EID50的测定结果分别为：10-5.31/0.1 mL、10-6.5/0.1 mL和10-7.79/0.1 mL。

2.3.4鸡、鸭、鹅新城疫病毒感染鸭胚后，死亡鸭胚的病理变化3株新城疫病毒致死的鸭胚病理变化基本相同：死亡鸭胚的喙、头、颈出血较严重（呈出血斑），爪出血最严重（基本上都出血），背部弥漫性点状出血。

接近29日龄死亡的鸭胚，剖检后可见有大量白色尿酸盐沉积，而且胚体出血。接种病毒未致死的鸭胚孵出的小鸭，体型较小，发育不良。

3株新城疫病毒使鸭胚致死的时间集中在第2天至第7天，即接种后36～168 h之间，接种后36 h开始死亡，36～108h之间出现死亡高峰，接种204 h后停止死亡，接种病毒组共孵化出9只小鸭。

另外，5枚接种生理盐水的对照组鸭胚全部孵出健康小鸭。

3　讨论

近些年来，国内陆续报道发生鸭、鹅副黏病毒病，从而改变了NDV不引起水禽发病的观点。本试验从血凝素热稳定性、血凝解脱速度、胰蛋白酶消化、氯仿敏感性及对酸敏感性等方面对鸡、鸭、鹅新城疫病毒株进行理化特性研究，结果表明，3株毒株血凝素热稳定性指数分别为5、15、15 min；血凝均为快速解脱型；对胰蛋白酶、氯仿均敏感；对pH值3.0，pH值5.0均敏感。这些符合新城疫病毒的特性。

鸡、鸭、鹅新城疫病毒脑内接种1日龄雏鸭致病指数（ICPI）分别为0.59、0.84、1.04；6周龄静脉接种致病指数（IVPI）均为0，表明6周龄鸭对3株新城疫病毒均具有抵抗力。从上述两项结果可判定，鸡新城疫病毒属于中等偏弱毒力毒株，鸭、鹅新城疫病毒属于中等毒力毒株。从3株新城疫病毒对鸭胚的EID50可知，鹅新城疫病毒的致病力最强，鸭新城疫病毒的致病力次之，鸡新城疫病毒的致病力最弱，但它们对鸭胚的致病力都很强。

[1]殷震，刘景华.动物病毒学[M].2版.北京：科学出版社，1997：743-750，736-766.

[2]姚火春.兽医微生物学实验指导[M].2版.北京：中国农业出版社，2002：105-106.

[3]诸敏，陈昌.鸽新城疫病毒QL株一些理化及培养特性[J].中国兽药杂志，2001，35（5）：9-10.

[4]范根成，朱万光，王永玲，等.新城疫病毒强毒株的分离与鉴定[J].中国兽医学报，1999，19（2）：114-117.

[5]姜平，陈溥言，蔡宝祥.从鹌鹑分离的一株新城疫病毒的性状研究[J].畜牧与兽医，1990，22（1）：9-10.

[6]孙泉云，周锦萍，张苏华，等.蛋鸡新城疫病毒的分离与鉴定[A].中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五界全国会员代表大会暨第九次学术研讨会论文集[C].山东省烟台市2001：609-609.

[7]郑明球.家畜传染病学实验指导[M].3版.北京：中国农业出版社，2001：107-108.

Experimental Research on Virulent Biological Characteristics of thechicken and duck and gooseNewcastlediseasevirus

LU Zhen-xiang1，2，ZHANG Xun-hai1，2，GUO Wei-na1，2，YANG Ping1，XU Yi-qiao1，LIU Chang1，2
（1.Anhui Science and Technology University，Animal Science College，Fengyang 233100，China；2.Anhui Key Laboratory of Poultry Infectious Disease Prevention and Control，Fengyang 233100，China）

To test NDV from chicken，duck and goose.The biological characteristics of three NDVs were tested by digesting trypsin test，thermostability of haemagglutinin test，Hemagglutinin hot stability test，Hemagglutination free trial of strains to chloro⁃form，and hydrochloric acid test.Their virulences were analyzed by intracerebral pathogenicity index（ICPI）for one-day-old ducks and intravenous pathogenicity index（IVPI）in 6-week-old ducks，and 13-day-old non-immune infection of duck embryo（EID50）. The haemagglutinin index of NDV from chicken，duck and goose was 29，28，and 28，respectively.Thermostability index of three strains was 5 minutes，15minutes，and 15 minutes at 56℃，respectively.The haemagglutination elution test showed their rapid elut⁃ing pattern.There were sensitive to choloroform and trypsin，pH3.0 and pH5.0.The intracerebral pathogenicity index（ICPI）for oneday-old chicks was 0.59，0.84，and 1.04，respectively.Intravenoous pathogenicity index（IVPI）in 6-week-old ducks of all the three NDV strains was 0.The duck embryo'EID50 infected by NDV from chicken，duck and goose were10-5.31/0.1 mL，10-6.5/0.1 mL，and 10-7.79/0.1 mL，respectively.chick NDV was moderate to weak strain，but duck and goose NDV were moderate strains.

NDV；biological characteristics；Virulent measure

S852.65+9.5

A

0529-6005（2016）07-0006-02

2015-03-06

国家自然科学基金（30671556）；安徽科技学院重点学科建设基金（YZD2004-12）；安徽科技学院校级重点学科建设项目（AKZDXK205A04）

路振香（1964-），女，副教授，硕士，主要从事动物微生物学的教学与科研工作，E-mail：luzhenxiang2002@126.com