蒙古族生物样本库的标准化建立及质量鉴定

房 君，斯琴，沙日耐，白萨日娜，纳贡毕力格



·转化医学·

蒙古族生物样本库的标准化建立及质量鉴定

房 君，斯琴，沙日耐，白萨日娜，纳贡毕力格

目的 建立规范的蒙古族生物样本库，收集高质量的样本用于牛皮癣、高血压、失眠、抑郁及肿瘤心身疾病的机制研究。方法 筹备建立样本库所需资金并通过伦理委员会审查，建立样本收集、储存的标准操作流程；收集相应临床患者信息及符合实验要求的血液样本并进行低温储存；对生物样本进行严格的质量控制。结果 建立了标准的血液库操作流程，2015年1月开始建库。建库6个月共收集患者血液样本562例。随机抽取样本质量控制良好。结论 血液样本质量可靠并附有完整的临床资料，可以充分满足科学研究的需要。

心身疾病；生物样本库；标准化；质量鉴定

［Abstract］Objective The estab1ishment of standardized Mongo1ia peop1e's biobank，the co11ection of high qua1ity specimens used in psoriasis，hypertension，insomnia，depression and cancer，and other psychosomatic diseases.Methods Biobank funds needed for the estab1ishment of the preparatory and got the ethics committee a11owed.To estab1ish the standard operation procedure of samp1e co11ection and so on and to co11ect the information of the corresponding c1inica1 patients and the b1ood samp1es for fina11y frozen storage are needed strict1y qua1ity contro1 on bio1ogica1 samp1es. Results This study estab1ished a standard b1ood biobank operation process，construction began in January 2015.We have co11ected the b1ood samp1es of a tota1 of 562 patients for more than 6 months. Conclusion Random1y se1ected samp1e to undergo a qua1ity contro1 test.The resu1t showed that the co11ected b1ood samp1es with re1iab1e qua1ity and comp1ete c1inica1 data.It can fu11y meet the needs of scientific research.

［Key words］Psychosomatic diseases；Biobank；Standardization；Qua1ity identification

生物样本库又称生物银行，主要是指收集和保存用于各种研究而非用于器官移植的人类各种生物样本，包括组织、全血、血浆、血清、DNA、RNA、生物体液，或经初步处理过的生物样本，以及与这些生物样本相关的各种临床资料、病理、治疗与随访等信息数据，是按严格的技术标准专业化收集、运输、存储、管理和使用的资源库［1-2］。自20世纪80年代以来，生物样本库在全球范围内得到了空前发展，广泛用于临床与基础研究、相关药物靶点与个体化治疗方面［3-4］。目前，许多研究是以规范化诊治的多中心临床队列建立为基础，以获得高质量样本和系统临床随访资料为核心。而转化医学已成为基础研究与临床实践两者之间的纽带，以临床需求为指引，通过研究探讨发病机制和疾病相关基因，进一步筛选诊断和治疗靶点从而应用于临床［5］。内蒙古国际蒙医医院的蒙古族生物样本库的建立，更是为发展具有我国自主知识产权的综合性转化医学研究提供资源。作者介绍该生物样本库在建立过程中所积累的经验与不足。

1　资料与方法

1.1资金、设备与人员培训 通过文献查阅以及赴上海市参加生物样本库研讨会议后，建立生物样本库流程，购买样本处理设备及液氮罐和-80℃冰箱；聘用生物学专业人员，经技术培训，专职负责样本库的运转和维护。生物样本库初步建立后，由内蒙古国际蒙医医院心身医学科提供日常运行资金和管理负责日常工作。

1.2政策与患者知情同意 建立生物样本库及知情同意书需通过内蒙古国际蒙医医院临床机构伦理委员会审查，严格按照赫尔辛基宣言保护患者利益及隐私。本生物样本库建立的原则是非盈利性的，样本及临床资料信息以医学研究为目的，使用样本过程中要求研究者保证合法和合理。患者知情同意书主要是征求患者同意采取血液样本及相关临床信息。

1.3临床信息收集 收集对象为内蒙古国际蒙医医院心身医学科就诊的心身疾病患者，收集患者临床信息包括年龄、性别、民族、住址、联系方式、家族史、心身互动治疗前的治疗情况、心身互动治疗开始及截止日期、治疗反应、转归及近期检查结果和后期的随访报告。

1.4血液样本标准化操作流程 在接受蒙医心身互动治疗前、后分别收集患者血液。采集患者早晨空腹血液，每个患者根据病种采集含抗凝剂1～2管和不含抗凝剂1～2管，每管3～4 mL经2 100 r/min离心15 min后分装血浆和血清，并通过细胞裂解液提取白细胞后分别装入冻存管并保存在-80℃冰箱，整个过程要求在2 h内完成。

1.5质量控制 生物样本库的质量保证体现在样本采集、处理的每一步骤中，如果能够严格按照标准操作流程操作，则能够保证样本质量。生物样本质量控制主要包括：①取样—分装—存储标准化流程的控制；②存储温度24 h动态监测及记录；③存储样本定期抽检。对在库的样本质量控制鉴定采用随机抽样方式，并分别进行临床资料复查和样本的DNA、RNA质量检测。使用血液DNA提取试剂盒［天根生化科技（北京）有限公司］按照说明书提取DNA，在1%琼脂凝胶上进行电泳检测其完整性；使用生物基因通用RNA提取分离试剂盒提取RNA并检测完整性。

1.6样本资源的使用 申请使用者在申请时需填写申请书，要求申请样本的研究者必须有一定的资质，有能力妥善使用样本，减少不必要的浪费。样本库的资源属于重要的临床和基础研究资源，主要提供给内蒙古国际蒙医医院心身医学科科研组及其他一些研究机构。

2　结果

2.1通过知情同意书并建立标准操作流程 本研究的建库申请及知情同意书通过了内蒙古国际蒙医医院临床机构伦理委员会审查；根据国内外血液库经验，并结合本院实际情况，建立了标准的收集工作流程（图1），2015年1月开始建库。

图1　生物样本库工作流程

2.2收集心身疾病血液样本 生物样本库建库6个月共收集562例的血液样本，其中牛皮癣295例（52.5%）、高血压35例（6.2%）、食管癌82例（14.6%）、胃癌52例（9.3%）、失眠32例（5.7%）和抑郁66例（11.7%）。根据各个病种科研目的不同，又将血液样本分类收集，其中全血562份、血清428份、血浆295份、白细胞562份，血浆倒去后剩余血细胞159份。所有样本收集前患者均签署了知情同意书。

2.3样本质量检测 收集6个月后对样本进行质量检测，随机选取20例入库样本病例，对病例中的临床资料进行复查（表1），病例资料中均含有所查的重要临床资料。生物质量检测中随机选取6例全血及白细胞样本，选择入库储存6个月、5个月、4个月、3个月、2个月和1个月的全血和白细胞分别提取DNA 和RNA。DNA电泳图显示无明显拖尾现象（图2），RNA电泳图显示28 s、18 s条带清晰可见（图3）。

表1　20例生物样本库临床信息复查

图2　DNA电泳图

图3　RNA电泳图

3　讨论

冰岛健康数据库是全球建设最早的生物样本库，始于1996年，拥有一半以上成年人口的基因型和医疗数据，目的在于鉴别常见病的遗传成分；英国生物样本库则正式启动于2005年，主要收集普通人群样本用于研究“遗传和复杂环境下的患病危险”［6］；人类癌症生物样本库由美国国立癌症研究所资助，专供研究使用的高质量生物样本［7］。目前我国的生物样本库建设工作也开展得如火如荼：由深圳华大基因研究院运营的国家基因库，从事收集和保存高质量、可溯源的生物资源样本［8］；泰州人群队列样本库已经搜集15万人的健康数据库，并开展了相关分子流行病学调查，特别关注中国人群易患的重大慢性疾病［9］。随着社会发展，生物样本库在现代生物科技领域中已经占据了非常重要的地位。

近年来，蒙医心身互动疗法在治疗各种疑难杂症方面有非常好的疗效，它以蒙医理论为指导，以国学传统文化为背景，按照东方人的文化特点和思维模式制订本土化心理治疗技术，结合现代医学、心理学知识的同时运用现代光电声像技术手段，在潜移默化中对患者群体进行催眠、暗示、分析、认知、行为、音乐、疏导的“多维立体”“综合调理”。治疗方法独特，作为廉价而本土化绿色治疗方法，深受患者的认可［10］，但其作用的科学机制仍不清楚。因此，建立以心身疾病为主的样本库可最大限度地保护利用接受该疗法的心身疾病患者的血液样本，从而对促进蒙医心身互动疗法的研究具有重要意义。高质量、标准化收集样本是生物样本库的核心［11-12］。要保证高质量就要建立严格标准的收集过程和标准化的质量检测。样本库自建库以来一直秉承这一原则，并于建库6个月后随机选取了6例全血及白细胞进行检测，提取的DNA电泳图完整清晰无明显拖尾现象，说明保存完好，无降解；RNA条带清晰可见，说明完整性好，无明显降解，可满足大部分实验要求。对20例入库病例资料复查结果显示，一些重要的临床信息记录完整。样本库质量检测结果显示，蒙古族生物样本库储存的血液样本是高质量的，而且附有完整的临床资料可充分满足科研需求，具有丰富临床信息的样本有利于分子信息与临床意义之间的研究。但是，根据肿瘤生物样本收集的标准和要求［13-14］，结合现在科室建设的特殊性和局限性导致组织样本很难收集；而且样本库软件系统没有和医院信息系统对接，因此资料查询比较困难。作为一个以少数民族为特色的生物样本库，也采取一些特殊措施，将临床信息采集表以及相关的心理专业测试题目翻译为蒙古文以便患者阅读和配合。心身疾病的患者容易激动或者产生抵触心理，所以要求接诊的医生应具备一定的心理咨询能力。为了防止患者治疗后的脱落情况，科室推行一系列方便患者就诊的策略。目前，蒙古族生物样本库的建设处于起步阶段，还有许多需要完善和改进的地方，继续努力使之成为全国乃至全球认可的高质量和标准化的生物样本库。

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Standardization establishment and quality identification of the biobank of Mongolia PeoPle

FANG Jun1，Siqin2，Sharinai1，BAI Sarina1，Nagongbilige1
（1.Department of Psychosomatic Medicine，Inner Mongo1ia Internationa1 Mongo1ian Hospita1，Huhot Inner Mongo1ia 010065，China；2.Department of Research，Inner Mongo1ia Internationa1 Mongo1ian Hospita1，Huhot Inner Mongo1ia 010065，China）

R-05

B

2095-3097（2016）03-0134-04

10.3969/j.issn.2095-3097.2016.03.002

国家民族医药重点专科建设项目（ZP0503MZ022）；内蒙古国际蒙医医院院内项目（GJMY-201512）

010065内蒙古呼和浩特，内蒙古国际蒙医医院心身医学科（房 君，沙日耐，白萨日娜，纳贡毕力格），科研部（斯琴）

纳贡毕力格，E-mai1：781871909@qq.com

（2016-03-19 本文编辑：张在文）