填精补脑方对老年痴呆大鼠行为学及海马胆碱能神经递质的影响*

王爱梅



填精补脑方对老年痴呆大鼠行为学及海马胆碱能神经递质的影响*

王爱梅

目的观察填精补脑方对老年痴呆大鼠行为学及海马胆碱能神经递质的影响。方法健康成年SD大鼠随机分为对照组、模型组、脑复康组、填精补脑方组，每组10只。双侧海马注射Aβ25-35构建老年痴呆大鼠模型，各组给予相应药物灌胃治疗20 d。用药结束后，测定大鼠的学习记忆能力及海马ChAT、AChE的酶学活性。结果与模型组相比，用药组达标所需训练次数、错误反应次数明显减少(P<0.01)；ChAT活性升高，AChE活性降低(P<0.01)。结论填精补脑方可以改善老年痴呆模型大鼠学习记忆功能，其机制可能与改善海马中胆碱能神经递质的代谢有关。

填精补脑方；老年痴呆；学习记忆；ChAT；AChE

老年性痴呆又称阿尔茨海默病 (Alzheimer，s disease, AD)，是一种以记忆力减退、认知功能障碍为主要特征的中枢神经系统变性疾病。随着老龄化社会步伐的加快，探索AD的发病机制，寻找新的治疗药物已成为广大科研和临床工作者的关注重点，中医药在老年痴呆病的预防、治疗、保健康复等方面有显著的优势。胆碱能神经递质是脑内的重要神经递质，主要参与运动、情感和认知等众多生理过程，与大脑的学习记忆能力和认知能力之间有密切关系[1,2]。本实验以双侧海马注射Aβ25-35方法构建老年痴呆大鼠模型，通过观察填精补脑方对模型大鼠学习记忆能力及海马中胆碱能神经递质含量的影响，进而探讨其作用机制，为临床治疗老年痴呆提供一定的理论依据。

1　材料与方法

1.1实验动物健康成年SD大鼠40只，SPF级，体质量(220±20)g，雌雄各半，由河南省实验动物中心提供 (许可证号：SCXK(豫)2010-0002)。

1.2主要仪器与试剂脑立体定位仪，成都仪器厂；MG-3Y迷宫刺激器，成都泰盟科技有限公司产品；V-1200型可见分光光度计，上海棱谱仪器仪表有限公司；FSH-Ⅱ型高速电动匀浆机，江苏金运市环宇科学仪器厂；Aβ25-35，美国Sigma试剂公司，批号A4559；填精补脑方药物，河南省南阳市医药公司；脑复康(吡拉西坦片)，湖北华中药业有限公司，批号20130922；胆碱乙酰转移酶试剂盒和乙酰胆碱酯酶试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号分别为20130920，20130911。

1.3填精补脑方的制备取熟地黄20 g，黄精20 g，三七参10 g，川芎15 g，鹿茸10 g，山萸肉20 g，灵芝15 g，天麻15 g，制何首乌15 g，加入6倍量水煎煮2次，合并水煎液，配制成2 g/ml的药液，高压灭菌，4 ℃冰箱保存备用。

1.4模型制备及给药实验动物在标准环境适应性饲养1周后，随机分为对照组、模型组、脑复康组、填精补脑方组，每组10只。各组大鼠经腹腔注射10% 水合氯醛 (0.3 ml/100 g) 麻醉后，固定于脑立体定位仪上，参照Paxinos大鼠脑立体定位图谱[3]，由Bergam点向后3.2 mm，中线旁2.2 mm，用骨钻钻透双侧颅骨，在脑立体定位仪引导下，微量注射器垂直进针4 mm，模型组及给药组缓慢注入双侧海马组织内4 μl的Aβ25-35溶液缓慢(每侧2 μl)，对照组注入等体积无菌生理盐水。术后次日脑复康组、填精补脑方组分别给予脑复康(40 mg/ml)及填精补脑方(2 g/ml)灌胃，各组动物按1 ml/100 g给药，对照组和模型组每天给予1 ml/100 g的生理盐水灌胃，1次/d，连续20 d。各组动物每周记录一次体质量，调整注射剂量。

1.5大鼠学习记忆能力测定(Y 迷宫法)参照杨伟文章[4]记录大鼠达标所需的训练次数，作为大鼠学习能力的观测指标。学习能力测试24 h后，观察大鼠在 30 次测试反应中的错误次数，将其作为记忆能力检测的指标。

1.6海马ChAT、AChE的检测最后一次Y 迷宫实验结束之后，断头处死大鼠，取大鼠海马组织，按照试剂盒要求进行ChAT、AChE的检测。

2　结果

2.1各组大鼠学习记忆能力的比较与对照组比较，模型组达标所需训练次数、错误反应次数明显增多(P<0.01)；与模型组比较，脑复康组、填精补脑方组达标所需训练次数、错误反应次数明显减少(P<0.01)，两组之间差异不明显(P>0.05，表1)。表明填精补脑方可以改善老年痴呆大鼠的学习记忆能力。

2.2填精补脑方对老年痴呆大鼠海马ChAT、AChE活性的影响与对照组相比，模型组大鼠海马中ChAT活性明显下降，AChE活性明显增加(P<0.01)。与模型组相比，用药物组大鼠海马中ChAT活性明显升高，AChE活性明显降低(P<0.01)。脑复康组、填精补脑方组之间上述指标没有明显改变(P>0.05)，见表1。

表1　各组大鼠Y迷宫及海马ChAT、AChE活性检测结果

注：与对照组比较1)P<0.01；与模型组比较2)P<0.01

3　讨论

中医理论认为，AD的发病机制是由于肾精亏损，脑髓失养、瘀血阻络所致。填精补脑方药物以补血滋阴，益精填髓，健脾益肾，活血祛瘀为主，符合AD的治疗理论。AD因脑萎缩导致认知功能下降、记忆力严重减退，智力下降、注意力无法集中等临床表现，因此在AD的诊断和治疗评价中，学习记忆水平是最重要的指标[5]。本实验Y迷宫实验结果发现，模型组达标所需训练次数、错误反应次数明显增多；脑复康组、填精补脑方组达标所需训练次数、错误反应次数明显减少，表明填精补脑方可以改善老年痴呆大鼠的学习记忆能力。

胆碱功能低下假说认为[6,7]：中枢胆碱能神经系统与学习记忆之间有重要联系，胆碱能神经元缺失导致脑内与学习记忆密切相关的神经递质ACh的减少，是AD学习记忆障碍的重要机制。AD患者中枢神经系统中胆碱能神经功能明显下降，且下降程度和AD的临床症状严重程度密切相关。ChAT是合成ACh的关键酶，AChE是降解ACh的关键酶。ChAT和AChE的活性与脑内ACh的含量密切相关，两者共同维持了ACh含量的动态平衡。本实验结果发现：与对照组相比，模型组大鼠海马中ChAT活性明显下降，AChE活性明显增加。与模型组相比，用药物组大鼠海马中ChAT活性明显升高，AChE活性明显降低。这表明填精补脑方可以提高老年痴呆模型大鼠海马中ChAT活性，抑制AChE活性，从而增加海马中ACh的含量，在改善学习记忆功能方面发挥一定的作用。

综上所述，填精补脑方对老年痴呆模型大鼠学习记忆功能具有改善作用，其机制可能与改善海马中胆碱能神经递质的代谢有关。

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[5]陈地灵，张鹏，林励，等. 巴戟天低聚糖对Aβ_(25-35)致拟痴呆模型大鼠学习记忆障碍的影响[J]. 中国药理学通报,2013，29(2):271-76.

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[7]杨昆，谢淑玲，张秀，等. 益智安神液对记忆获得性障碍小鼠学习记忆能力和脑内胆碱能系统的影响[J]. 中药药理与临床,2015，31(1):207-210.

河南省重点科技攻关项目(132102310263)

河南南阳医学高等专科学校(南阳 473061)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.13.021

1003-8914(2016)-13-1882-02

(本文校对：李弋2015-12-02)