西藏首例IVF-ET患者成功妊娠报道

孟祥黔，耿丽红#，李君，刘锋，何静，唐刚，全雄杰，罗萍，王斌*，钟影

(1. 四川省成都市锦江区妇幼保健院生殖医学中心，成都　610016；2. 西藏阜康妇产儿童医院生殖医学中心，拉萨　850000)



西藏首例IVF-ET患者成功妊娠报道

孟祥黔1，2，耿丽红1，2#，李君2，刘锋1，2，何静2，唐刚2，全雄杰2，罗萍2，王斌2*，钟影1*

(1. 四川省成都市锦江区妇幼保健院生殖医学中心，成都610016；2. 西藏阜康妇产儿童医院生殖医学中心，拉萨850000)

本文报道1例体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者在地处海拔3 650米的西藏阜康妇产儿童医院生殖医学中心成功妊娠的案例，探讨高海拔地区的生殖医学中心开展人类辅助生殖技术的可行性。

高海拔；西藏；首例；体外受精-胚胎移植

患者女，汉族，29岁，男方为藏族，33岁。2012年开始未避孕至今未孕，2013年在西藏阜康妇产儿童医院生殖医学中心行输卵管造影提示“双侧输卵管畅通”。于2015年行自然周期卵泡监测，卵泡生长慢，16 mm左右排卵。男方2015年8月精液检查未见异常，精液体积为4.8 ml，密度为61×106/ml，活率为79%，精子正常形态率为2%。2015年7～8月给予克罗米芬促排卵2个周期，均有优势卵泡和排卵，指导性同房未孕，9月在我院行宫腔内人工授精(IUI)1个周期未孕，10月在成都西囡妇科医院再次行IUI 1个周期未孕。2015年11月要求试管助孕治疗。患者基础FSH、LH、E2水平分别为8.36 U/L、9.81 U/L、183.5 pmol/L，超声检查显示子宫形态正常，双侧卵巢卵泡18～22个。临床诊断：不明原因不孕。

促排卵：患者使用常规长方案促排卵[1]：黄体中期给予促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a，达必佳，Ferring，瑞士)0.1 mg肌肉注射，14 d后予以重组卵泡刺激素(rFSH，果纳芬，Merck Serono，德国)150 U启动超促排卵，B超监测卵泡生长情况，6 d后卵泡生长较慢，增加促排卵药物剂量至175 U，继续促排4 d，Gn总剂量1 600 U。3个目标卵泡直径>18 mm后，给予重组人绒毛膜促性腺激素(rHCG，艾泽，Merck Serono，德国)250 mg肌肉注射，36 h后在B超引导下经阴道穿刺取卵。

胚胎实验室情况：2015年12月27日患者获卵11枚，短时受精4 h后脱颗粒细胞能观察到第二极体者8枚，第1天(D1)正常受精6枚，2枚未见原核(PN)；D2卵裂8枚，D3优质胚胎3枚，D3移植2枚优质胚胎(评分：830、840)，剩余胚胎进行囊胚培养；D5形成囊胚3枚(评分：4BC、4CC、4CC)均进行玻璃化冷冻，D6形成囊胚1枚(评分：4CC)也进行玻璃化冷冻。

胚胎培养及质量评估：卵母细胞体外授精4 h后进行脱颗粒细胞，随后转入序贯培养液(COOK)中培养。本实验室采用常规评分法对胚胎进行评分，D3胚胎采用WIH评分法[2]，囊胚采用Gardner评分法[3]。

胚胎移植与妊娠结果判断：D3选择优质胚胎2个在B超引导下进行胚胎移植，移植后4周超声检查显示子宫腔内单孕囊，可见胎心搏动，确定为临床妊娠，至本文撰写时妊娠进展顺利。

讨论高原地区胚胎实验室培养环境是高原地区行辅助生殖技术(ART)助孕患者成功的关键，截至目前尚未见海拔3 650米及以上地区关于人类胚胎培养的相关报道。随着科学技术的发展，研究者不断地完善胚胎体外培养环境，但仍未能完全模拟体内胚胎发育所需的环境。影响胚胎体外培养的主要因素有温度、培养液PH值、培养液渗透压等。培养液温度维持在37℃主要是为了不破坏胚胎内外的许多蛋白和酶的三维结构，温度的升高和降低都会影响胚胎的发育，因此，我们在高原地区进行胚胎培养时的温度也设定为37℃[4]。目前培养液大部分利用碳酸氢盐-二氧化碳缓冲体系来维持生理性PH值(正常PH值在7.2～7.4之间)，培养液的PH水平可以调节氧化代谢和糖酵解过程中酶通路和反应、细胞分裂和分化、细胞骨架运输等[5-7]。由于胚胎具有特殊的膜转运系统，因此胚胎可以适应一定范围内PH波动的培养液，恰好胚胎在发育过程中的不同阶段所需PH也不尽相同[8-10]。为了维持这个特定的PH水平，往往要求培养箱提供较稳定的CO2浓度[11-13]。商品化培养液因公司的不同，其产品使用时的PH要求也各不相同，比如COOK要求7.2～7.5、Quinn’s Advantage要求7.1～7.3、HTF要求7.3～7.5、Global要求7.25～7.30、Vitrolife要求7.2～7.4等。另外，各个培养液厂商也会对不同海拔高度要求不同CO2浓度，从而维持所需的培养液PH。由此可见，高原地区培养液PH值的摸索尤为重要。

综上所述，西藏地区开展ART时，胚胎实验室使用COOK培养液对CO2浓度要求与厂商提供的参考值有所出入，后续我们将进行更为深入的实验研究，进一步阐述高海拔地区胚胎培养环境的具体要求，旨在为今后高海拔地区开展人类ART提供参考，同时也填补了海拔3 600米以上地区开展人类ART相关数据的空白。

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[编辑：辛玲]

2016-03-31；

2016-04-13

四川省医学科研青年创新课题(Q15056)；四川省科技厅基础医学研究项目(2014JY0110)

孟祥黔，男，四川成都人，助理研究员，生理学专业.(#共同第一作者；*

，Email：yzhong08@126.com；xzfkyy2012@163.com)

DOI：10.3969/j.issn.1004-3845.2016.08.015