木丹颗粒对STZ诱导糖尿病大鼠背根神经节神经元细胞凋亡的影响*

李莹莹，于世家辽宁中医药大学附属医院，辽宁沈阳110032



木丹颗粒对STZ诱导糖尿病大鼠背根神经节神经元细胞凋亡的影响*

李莹莹，于世家
辽宁中医药大学附属医院，辽宁沈阳110032

目的：探究木丹颗粒对链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病大鼠背根神经节神经元细胞凋亡的影响。方法：将50只大鼠随机分为正常对照组（11只）、模型组（13只）、甲钴胺片组（13只）和木丹颗粒组（13只），采用STZ诱导复制糖尿病模型，正常对照组和模型组灌胃生理盐水，甲钴胺片组和木丹颗粒组分别灌胃甲钴胺片和木丹颗粒，观察各组大鼠血糖变化、背根神经节细胞凋亡阳性百分比、背根神经节形态。结果：血糖水平模型组给药后显著高于给药前（P＜0.05），甲钴胺片组和木丹颗粒组给药前后无明显变化（P＞0.05）；模型组、甲钴胺片组和木丹颗粒组大鼠给药后背根神经节凋亡细胞阳性率小于正常对照组（P＜0.05）；木丹颗粒组和甲钴胺片组大鼠给药后背根神经节凋亡细胞阳性率小于模型组（P＜0.05）；木丹颗粒组和甲钴胺片组大鼠背根神经节形态结构虽然出现了和模型组相似的损伤，但损伤程度小于模型组（P＜0.05）。结论：木丹颗粒对STZ诱导糖尿病大鼠背根神经节神经元细胞凋亡具有保护作用。

木丹颗粒；糖尿病；背根神经节；神经元细胞凋亡

近年来糖尿病的发病人数呈逐年增加的趋势，据统计我国近20年来糖尿病的发病率增加了3～6倍［1］。糖尿病患者可合并多种并发症，其中糖尿病周围神经病变是最为常见且危害最大的一种并发症。目前西医对糖尿病周围神经病变的治疗主要是通过抗氧化应激，常用的药物有α-硫辛酸、维生素类药物，这类药物在治疗糖尿病神经病变时疗效有限，不能完全满足临床需求［2-3］。目前中药或者中西药合用治疗糖尿周围病神经病变收到较为满意的治疗效果。木丹颗粒在临床上治疗糖尿病周围神经病变时收到了十分满意的治疗效果［4］。本研究以STZ诱导大鼠复制糖尿病模型，来研究木丹颗粒对糖尿病大鼠背根神经节的病理和神经节的影响，为木丹颗粒在临床上治疗糖尿病周围神经病变提供实验依据。现报道如下：

1　材料与方法

1.1实验动物选择50只健康Wistar大鼠，雄性，体质量200～250 g，均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号为SCXK（京）2007-0001。将所购大鼠适应性喂养1周。

1.2主要试剂及仪器STZ（Sigma公司提供）；TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒（南京凯基生物科技发展有限公司）；木丹颗粒（奥达制药有限公司）；甲咕胺片（日本卫材株式会社）；石蜡包埋机、石蜡切片机（德国徕卡公司提供）；数码显微镜、荧光显微镜、生物显微镜（日本OLYMPUS公司提供）。

1.3分组方法将11只正常的大鼠分入正常对照组，将造模成功的39只大鼠随机平均分入模型组、木丹颗粒组、甲钴胺片组，每组13只。正常对照组腹腔注射枸橼酸缓冲液；对模型组、木丹颗粒组和甲钴胺片组大鼠腹腔注射浓度为2%的链脲佐菌素枸橼酸缓冲溶液，剂量为57 mg/kg，腹腔注射链脲佐菌素72小时后检查血糖，血糖浓度＞16.7 mmol/L的判定为模型复制成功。

1.4给药方法正常对照组和模型组大鼠均灌胃生理盐水，木丹颗粒组大鼠灌胃木丹颗粒生理盐水溶液，每日剂量为2.3 g/kg；甲钴胺片组大鼠灌胃甲钴胺片生理盐水溶液，每日剂量为125 μg/kg。各组大鼠分别连续给药4周。

1.5指标观察

1.5.1给药前后血糖变化各组大鼠给药前、后抽取尾静脉血，用血糖仪检测各组大鼠尾静脉血中的血糖浓度。

1.5.2HE染色待各组中亚组大鼠连续灌胃4周后，腹腔注射水合氯醛麻醉，取背根神经节，4%多聚甲醛固定、石蜡包埋、切片、脱蜡至水、苏木素染色、封片。

1.5.3细胞凋亡TUNEL法检测按照TUNEL法检测试剂盒中的使用说明，FITC荧光染色观测雪旺细胞凋亡，荧光显微镜观察细胞凋亡的形态和凋亡细胞数。

1.6统计学方法所有数据均采用SPSS 19.0统计软件进行统计学处理，计量资料以（χ±s）表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2　结果

2.1血糖水平血糖水平模型组、甲钴胺片组和木丹颗粒组给药前、后均显著高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；模型组给药后高于给药前，差异有统计学意义（P＜0.05）；甲钴胺片组、木丹颗粒组给药后高于给药前，但差异无统计学意义（P＞0.05）；给药后甲钴胺片组、木丹颗粒组与模型组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1　各组大鼠血糖水平比较m m ol/L

2.2背根神经节细胞凋亡背根神经节凋亡细胞阳性百分率给药后模型组、甲钴胺片组和木丹颗粒组小于对照组（P＜0.05）；木丹颗粒组、甲钴胺片组小于模型组（P＜0.05）；木丹颗粒组与甲钴胺片组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2　各组大鼠背根神经节细胞凋亡比较

2.3各组大鼠背根神经节形态比较正常对照组大鼠的背根神经节髓神经纤维结构形态没有损伤，背根神经节细胞呈现为球形或者不规则的卵圆形，各神经元细胞间可以见到毛细血管网、雪旺细胞等；模型组大鼠背根神经节在造模成功后髓神经纤维结构出现损伤，并且随着STZ作用时间的增加损伤的程度逐渐加重，表现为部分细胞的胞浆出现褶皱收缩，少部分神经细胞出现凋亡坏死，有嗜神经节和卫星现象。木丹颗粒组和甲钴胺片组大鼠的背根神经节形态结构虽然出现了和模型组相似的损伤，但损伤程度小于模型组。见图1。

图1　大鼠背根神经节形态图

3　讨论

中医认为络病是由于肝肾阴虚、气阴两虚、痰阴痹阻这三大原因所致，且认为糖尿病发病初期患者多为阴津耗亏、热燥偏盛。《内经》中有云：“邪之所凑，其气必虚”［5］。所以认为糖尿病神经病变患者正气虚弱为其发病内因，肝肾虚亏首当其冲。于世家［6］教授通过长期对糖尿病周围神经病变的研究结果发现，糖尿病周围神经病变多见于糖尿病病程较长并且体阴虚、饮食不节、情志失控、劳累过度的糖尿病患者。同时于世家［7］教授研究认为，糖尿病周围神经病变患者的病机特点为阴虚为本、燥热为标、气阴两虚、阴阳俱虚。除此之外中医认为血瘀阻滞、脉络受阻、阴虚内热、痰瘀内滞等也是糖尿病周围神经病变的发病原因［8］。现代医学研究认为，中医中的“络脉”和神经组织在功能和形态上许多方面具有相似之处，故现代中医往往将神经组织归属中医“络脉”的范畴。又因为糖尿病周围神经病变与络病有相似的临床特点，故现代中医又将糖尿病周围神经病变归属“络病”的范畴，结合络病的发病原因，中医认为糖尿病周围神经病变的发病原因主要为气阴两虚、气虚血瘀、瘀血阻络。故中医对于糖尿病周围神经病变的治疗原则为益气补阴、活血化瘀、祛瘀生新［9］为主。

木丹颗粒由没药、延胡索（醋制）、三七、赤芍、丹参、川芎、红花、苏木、鸡血藤共9味中药组成，是于世家根据久病必虚、久病入络、祛瘀生新等理论，提出活血化瘀通络、祛瘀生新的糖尿病并发周围神经病变治疗原则而研制［10］。木丹颗粒中的延胡索具有辛温活血、理气止痛之功效；没药、苏木、丹参、红花、鸡血藤具有活血化瘀之功效；赤芍、三七具有活血止痛之功效；丹参具有活血养血、祛瘀生新之功效；川芎具有行气活血之功效［11］。诸药合用达到了活血通络、祛瘀生新之功效。临床上长期使用已经表明，木丹颗粒对糖尿病周围神经病变具有十分显著的治疗效果。本研究结果可以发现木丹颗粒对糖尿病的血糖水平没有影响，这表明木丹颗粒没有降血糖的作用；同时研究结果发现木丹颗粒可以显著的降低糖尿病大鼠背根神经节细胞凋亡、减缓或减轻糖尿病大鼠背根神经节病理损伤的程度，表明木丹颗粒对糖尿病大鼠的背根神经节具有十分显著的保护作用，这也可以推断木丹颗粒对糖尿病并发的周围神经病变具有保护作用。

［1］李菁，李峥.影响糖尿病患者自我管理的心理社会因素的研究进展［J］.中华护理杂志，2014，61（2）：207-211.

［2］吴敏，袁刚，管晓峰，等.α-硫辛酸治疗糖尿病周围神经病变的疗效观察［J］.中华全科医学，2011，9（4）：517-519.

［3］佘敦敏，朱妍，冯尚勇，等.血清25羟维生素D_3与2型糖尿病周围神经病变的相关性［J］.中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志，2014，7（3）：240-243.

［4］莫建勋，叶烨，蒙雯雯，等.木丹颗粒治疗糖尿病远端对称性多发性神经病变的临床研究［J］.中华中医药学刊，2013，32（11）：2561-2563.

［5］杨丽君，辛效毅.中医药治疗糖尿病现状［J］.河南中医，2013，38（5）：650-652.

［6］霍晶晶，于世家.于世家教授治疗糖尿病周围神经病变经验介绍［J］.新中医，2008，40（3）：12-14.

［7］张兰，于世家.从络病理论探讨糖尿病周围神经病变的发生机制［J］.中医药研究，2002，15（2）：2-3.

［8］王巍，谢映红，于世家.中医药防治糖尿病周围神经病变研究述评［J］.辽宁中医杂志，2006，49（7）：800-801.

［9］孙维俭.糖尿病周围神经病变中医药治疗进展［J］.辽宁中医药大学学报，2012，14（12）：201-204.

［10］赵步长，赵涛，赵明中.糖尿病周围神经病变的发病机制及中药木丹颗粒干预研究新进展［J］.中国医药导报，2013，34（12）：33-35.

［11］白鸿超.木丹颗粒治疗糖尿病周围神经病变的临床观察［J］.国外医药：抗生素分册，2013，34（3）：133-134.

The Effects of MuDan Granules on Neuron Apoptosis of Dorsal Root Ganglion of STZ-induced Diabetic Rats

LI Yingying，YU Shijia
The First Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，China

Objective：To explore the effects of MuDan granules on neuron apoptosis of dorsal root ganglion of STZ-induceddiabeticrats.Methods：Fiftyratswererandomizedintonormalcontrolgroup（n=11），themodelgroup（n=13），mecobalamin tablets group（n=13）and MuDan granules group（n=13），diabetic model was induced and replicated，normal control group and the model group accepted intragastric administration of physiological saline，mecobalamin tablets group and MuDan granules group received intragastric administration of mecobalamin tablets and MuDan granules respectively，the changes of blood glucose，cellular apoptosis positive percentage of dorsal root ganglion and the morphology of dorsal root ganglion were observed in the rats of different groups.Results：The level of blood glucose in the model group after medication was higher than that before medication obviously（P＜0.05），there was on obvious changes in the comparison between before and after medication in mecobalamin tablets group and MuDan granules group（P＞0.05）；the model group，mecobalamin tablets group and MuDan granules group were less than normal control group in cellular apoptosis positive percentage of dorsal root ganglion after medication（P＜0.05）；MuDan granules group and mecobalamin tablets group were less than the model group in cellular apoptosis positive percentage of dorsal root ganglion after medication（P＜0.05）；although morphological structure of dorsal root ganglion of the rats in Mu－Dan granules group and mecobalamin tablets group appeared the injury similar to that of the model group，the degrees of injury were less than these of the model group（P＜0.05）.Conclusion：MuDan granules could fight against neuron apoptosis of dorsal root ganglion of STZ-induced diabetic rats.

MuDan granules；diabetes mellitus；dorsal root ganglion；neuron apoptosis

R285.5

A

1004-6852（2016）06-0016-03

国家自然科学基金资助项目（编号：81072912）

李莹莹（1976—），女，副主任医师。研究方向：糖尿病慢性并发症的中西医结合治疗。