EB病毒对系统性红斑狼疮患者临床表现及Th1/Th2平衡的影响

2016-08-18涂建欣朱小春莉温州医科大学附属第一医院风湿免疫科浙江温州325000

中国现代医生 2016年15期

涂建欣　朱小春　孙　莉温州医科大学附属第一医院风湿免疫科，浙江温州　325000

涂建欣朱小春孙莉
温州医科大学附属第一医院风湿免疫科，浙江温州325000

目的探讨EBV对SLE患者临床表现及Th1/Th2平衡的影响。方法选择2013年1月～2015年12月在我院治疗的系统性红斑狼疮患者171例为研究组，另选择在我院进行健康体检者60例为对照组。SLE患者根据EBV-DNA结果分为EBV阳性亚组和EBV阴性亚组。分析EBV感染对患者临床表现的影响及对Th1/Th2平衡的影响。结果SLE患者EBV-DNA阳性率显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。EBV阳性亚组SLE患者皮疹、关节炎、血液系统受累发生率、抗Rib-P抗体、抗Smith抗体阳性率及高免疫球蛋白血症发生率显著高于EBV阴性亚组，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。SLE患者EBV阳性亚组与阴性亚组及对照组Th2水平及Th1/ Th2水平，IL-4水平比较，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。结论EBV感染可能通过影响Th1/Th2平衡参与SLE发生发展，并与SLE患者皮疹、关节炎和血液系统损害有关。

EB病毒；系统性红斑狼疮；Th1；Th2

［Abstract］Objective To explore the effects of EBV on clinicalmanifestation of patients with systemic lupus erythematosus（SLE）and Th1/Th2 balance.M ethods 171 patients with SLE who were treated in our hospital from January 2013 to December 2015 were selected as research group，and another 60 healthy subjects who were given physical examination in our hospital were selected as control group.The patients with SLE were divided into EBV positive subgroup and EBV negative sub-group according to the results of EBV-DNA.The effect of EBV infection on clinicalmanifestation in patients and its effect on Th1/Th2 balance were analyzed.Results Positive rate of EBV-DNA in SLE patients were significantly higher than that in the control group，and the difference was statistically significant（P＜0.05）. Incidence rate of skin rash，arthritis，and involvementof hematological system，positive rate of anti-Rib-P antibody and anti-Smith antibody and incidence rate of hyperimmunoglobulinemia in EBV positive sub-group of SLE patients were significantly higher than those in EBV negative sub-group，and the differences were statistically significant（P＜0.01）. Th2 level，Th1/Th2 level and IL-4 level were compared between EBV positive sub-group，negative sub-group of SLE patients and control group，and the differences were statistically significant（P＜0.01）.Conclusion EBV infection may participate in the occurrence and development of SLE via its effect on Th1/Th2 balance，and is associated with skin rash，arthritis and hematological system impairment in SLE patients.

［Key words］EB virus；Systemic lupus erythematosus（SLE）；Th1；Th2

系统性红斑狼疮是风湿免疫科的常见病、多发病，目前其发病机制还不十分明确，是一种自身免疫性疾病，病情迁延，表现复杂，目前认为其与感染、激素、遗传等因素有关［1，2］。其中EB病毒（epstein-barr viruses，EBV）感染与系统性红斑狼疮的关系备受关注，但具体机制还不明确［3］。研究显示系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）患者存在Th1/Th2失衡，Th1/Th2失衡是其发病机制之一［4］。本研究主要探讨EB感染是否对系统性红斑狼疮的Th1/Th2平衡及临床表现产生影响，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

选取2013年1月～2015年12月在我院治疗的系统性红斑狼疮患者171例为研究组。所有患者均诊断明确，符合诊断标准。另选择在我院进行健康体检者60例为对照组。研究组男24例，女147例，年龄18～47岁，平均（34.9±12.1）岁。对照组男13例，女47例，年龄18～50岁，平均（35.3±13.6）岁。两组均无肝炎、HIV、结核、梅毒等情况。两组性别比、平均年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究通过医院医学伦理会同意。

1.2方法

1.2.1SLE患者常规实验室检查包括血常规、血沉反应、肝功能、肾功能、24 h尿蛋白、ds-DNA抗体、抗核抗体、抗Smith抗体、抗Rib-P抗体、抗U1RNP抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体、抗组蛋白抗体、补体C3、补体C4、IgA、IgM、IgG。血常规采用全自动血细胞分析仪进行分析。肝功能、肾功能、24 h尿蛋白采用全自动血生化分析仪检测。血沉采用自然沉降法检测。ds-DNA抗体、抗核抗体、抗Smith抗体、抗Rib-P抗体、抗U1RNP抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体、抗组蛋白抗体、补体C3、补体C4、IgA、IgM、IgG采用ELISA技术检查，试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供，所有操作严格按照说明书进行。

1.2.2EBV-DNA片段检测采用实时荧光定量PCR方法检测。采集肘静脉血2mL。EDTA抗凝处理，4℃，1500转/min离心，10min。取血细胞悬液，加红细胞裂解液，吹打，混匀，裂解20min，4℃下，3000转/min离心20 min，弃去上清。PBS液重悬，沉淀白细胞，4℃吸3000转/min离心10min，彻底清除红细胞，重复操作2次。DNA提取盒提取白细胞DNA，琼脂凝胶电泳鉴定DNA纯度。引物由上海生物工程有限公司提供。1.2.3 INF-γ及IL-4水平检测采集肘静脉血1mL，活化细胞，加入蛋白质转运抑制剂，37℃，5%CO2培养箱培养6 h，收集细胞，加入鼠抗人CD3抗体，鼠抗人CD4抗体，使细胞表面染色。洗涤后弃上清。破膜，加鼠抗人IL-4抗体，鼠抗人INF-γ看题。设IgG1对照，孵育，洗涤，PBS液固定，重悬，采用流式细胞仪进行分析。

1.3患者疾病活动度评价［5］

采用SLE疾病活动指数对患者的疾病互动度进行评价。总结患者的临床症状及体征。

1.4统计学方法

采用SPSS13.0统计学软件对数据进行分析，计数资料采用χ2检验，计量资料采用（±s）表示，采用t检验与方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1SLE患者与对照组EBV-DNA检测结果比较

SLE患者61例EBV-DNA阳性，阳性率36.3%；对照组7例阳性，阳性率11.7%。SLE患者EBV-DNA阳性率显著高于对照组，差异有高度统计学意义（χ2=11.194，P＜0.01）。将SLE患者根据EBV-DNA结果分为EBV阳性亚组和EBV阴性亚组。EBV阳性亚组男9例，女52例，平均（35.3±11.8）岁；EBV阴性亚组110例，男15例，女95例，平均（34.1±10.9）岁。两个亚组一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2SLE患者EBV阳性亚组与阴性亚组临床表现比较

EBV阳性亚组SLE患者皮疹、关节炎、血液系统发生率显著高于EBV阴性亚组，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。见表1。

表1　SLE患者EB阳性亚组与阴性亚组临床表现比较［n（%）］

表2　SLE患者EB阳性亚组与阴性亚组免疫指标分析［n（%）］

表3　SLE患者EBV阳性亚组与阴性亚组临床表现及疾病活动度比较

2.3SLE患者EBV阳性亚组与阴性亚组免疫指标分析

SLE患者EBV阳性亚组抗Rib-P抗体、抗Smith抗体阳性率及高免疫球蛋白血症发生率显著高于EBV阴性亚组，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。见表2。

2.4SLE患者EBV阳性亚组与阴性亚组疾病活动度情况比较

SLE患者EBV阳性亚组与阴性亚组平均年龄、女性比例、初发比例、血沉、C反应蛋白水平以及疾病活动度评分比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

2.4SLE患者EBV阳性亚组与阴性亚组及对照组Th1、Th2及Th1/Th2水平比较

SLE患者EBV阳性亚组与阴性亚组及对照组Th1水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）；三组Th2水平及Th1/Th2水平比较，差异有统计学意义（P＜0.01）；EBV阳性亚组Th2水平显著高于对照组及EBV阴性亚组，Th1/Th2水平均显著低于对照组及EBV阴性亚组，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。见表4。

表4　SLE患者EB阳性亚组与阴性亚组及对照组Th1、Th2及Th1/ Th2水平比较（±s）

注：与对照组比较，t=15.721，18.295，△P＜0.01；与EBV阴性亚组比较，t=9.653，10.029，#P＜0.01；Th1细胞为CD3+CD4+INF-γ+IL-4-表型细胞；Th2细胞为CD3+CD4+IL-4+INF-γ-表型细胞

组别n Th1 Th2 Th1/Th2对照组EBV阳性亚组EBV阴性亚组F值P 60 61 110 14.9±4.2 16.8±5.1 16.5±4.9 2.274 ＞0.05 2.61±0.71 5.52±1.10△#2.69±0.78 141.030 ＜0.01 7.01±0.72 3.22±1.35△#7.26±1.41 168.490 ＜0.01

2.5SLE患者EBV阳性亚组与阴性亚组及对照组INF-γ与IL-4水平

SLE患者EBV阳性亚组与阴性亚组及对照组INF-γ水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）；三组IL-4水平比较，差异有高度统计学意义（P＜0.01）；EBV阳性亚组及EBV阴性亚组IL-4水平均显著高于对照组，而EBV阳性亚组又显著高于EBV阴性亚组，差异均有高度统计学意义（P＜0.01）。见表5。

表5　SLE患者EBV阳性亚组与阴性亚组及对照组INF-γ与IL-4水平（±s）

注：与对照组比较，t=23.446，7.226，△P＜0.01；与EBV阳性亚组比较，t=10.087，#P＜0.01

组别n INF-γIL-4对照组EBV阳性亚组EBV阴性亚组F值P 60 61 110 1.99±0.50 2.09±0.53 2.01±0.51 0.476 ＞0.05 2.82±0.61 12.21±3.02△4.35±1.14△#311.40 ＜0.01

3　讨论

系统性红斑狼疮（SLE）是一种多发于青年女性的累及多脏器的自身免疫性炎症性结缔组织病。在遗传因素、环境因素、雌激素水平等各种因素相互作用下，导致T淋巴细胞减少、T抑制细胞功能降低、B细胞过度增生，产生大量的自身抗体，并与体内相应的自身抗原结合形成相应的免疫复合物，沉积在皮肤、关节、小血管、肾小球等部位［6-9］。在补体的参与下，引起急慢性炎症及组织坏死（如狼疮肾炎），或抗体直接与组织细胞抗原作用，引起细胞破坏（如红细胞、淋巴细胞及血小板壁的特异性抗原与相应的自身抗体结合，分别引起溶血性贫血、淋巴细胞减少症和血小板减少症），从而导致机体的多系统损害。以前临床开展的SLE相关自身抗体常规检测项目主要有抗核抗体（ANA）、抗双链脱氧核糖核酸（抗dsDNA抗体）抗体、抗可溶性抗原抗体（抗ENA抗体）（包括抗Sm、抗U1RNP、抗SSA/Ro、抗SSB/La、抗rRNP、抗Scl-70和抗Jo-1等）、抗核小体抗体和抗磷脂抗体等［10-12］。对于临床疑诊SLE的患者应行免疫学自身抗体检测。ACR修订的SLE分类标准中，免疫学异常和自身抗体阳性包括：抗Sm抗体、抗dsDNA抗体、抗磷脂抗体和ANA阳性［13，14］。

Epstein-Barr病毒（EBV）为疱疹病毒科嗜淋巴细胞病毒属的成员，为95%以上的成人所携带。EBV是一种DNA病毒，呈球形，直径为180～200 nm，在B淋巴细胞中复制。人是EBV感染的宿主，病毒主要通过唾液传播［15，16］。无症状感染多发生在幼儿，90%以上的3～5岁幼儿曾感染EBV。细胞免疫在EBV感染中起着关键性作用，该功能下降将导致EBV的活化。EBV感染具有普遍性，能够直接活化多克隆B淋巴细胞，因此将其作为潜在的SLE发病的因子之一。有学者研究显示SLE患者EBV-VCA IgG等抗体水平显著高于非SLE的健康对照组［17，18］。

在本次研究中，SLE患者的EBV感染率显著高于对照组，也提示EBV感染与SLE的发病有一定的关系。我们进一步将SLE患者根据EBV感染检查结果分为EBV阳性亚组与EBV阴性亚组，进一步分析显示，EBV阳性亚组的患者在皮疹、关节炎以及血液系统损伤方面的发生率显著高于EBV阴性亚组，而在肾脏损伤、浆膜炎方面没有显著差异，考虑EBV感染与SLE患者皮疹、关节炎及血液系统损伤方面具有一定的关系［19，20］。EBV感染会导致机体产生EBNA特异抗体，SLE患者特异性的抗原Smith及Ro有较差反应。在本次研究中EBV感染的SLE患者抗Smith抗体及抗Rib-P抗体水平率以及高免疫球蛋白血症发生率较无EBV感染的患者要高。SLE患者血清IFN-γ水平与对照组无显著差异，而IL-4水平则显著升高，说明SLE患者与对照组比较，本身处于Th2免疫反应优势状态，进一步分析，SLE患者EBV感染阳性的患者IL-4水平显著高于EBV感染阴性的患者。说明EBV感染的患者于Th2免疫反应的优势更明显。欧诺个流式细胞术检测外周血Th1及Th2细胞水平，检测结果显示，SLE患者Th2细胞水平显著高于对照组，而Th1细胞水平无显著差异，进一步分析，EBV感染阳性的SLE患者Th2细胞水平显著升高，而Th1/Th2水平显著下降，也进一步证明EBV感染阳性的患者Th2免疫反应为优势。EBV感染后终生潜伏，在一定的条件下进行复制，导致B淋巴细胞分化、增殖、记忆，产生抗体，而Th细胞参与了这个过程，并且发挥重要的作用。我们的结果提示SLE患者EBV感染的发生机率更高，并且与患者皮疹、关节炎及血液系统损害有关，EBV感染可能通过影响Th2细胞水平进而影响Th1/Th2平衡，参与SLE的发生及发展过程。

综上所述，EBV感染可能通过影响Th1/Th2平衡参与SLE发生发展，并与SLE患者皮疹、关节炎和血液系统损害有关。

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