中草药对刺激隐核虫幼虫的杀灭效果

樊海平，林　煜，钟全福，郑　磊，秦志清

(福建省淡水水产研究所　350002)



中草药对刺激隐核虫幼虫的杀灭效果

樊海平，林煜，钟全福，郑磊，秦志清

(福建省淡水水产研究所350002)

选择几种具有杀虫功效的中草药或中草药提取物开展对刺激隐核虫幼虫的防治效果试验，结果表明：苦参、鹤芽草、鸦胆子、荜澄茄、使君子、苦楝皮浓度25～800 mg/L作用4 h内均无杀虫效果。双氢青蒿素浓度200 mg/L、400 mg/L和800 mg/L 3个处理的杀虫效果相当，作用 3 h内无杀虫效果，作用 3 h以上死亡率超过50%。苦皮藤素浓度200 mg/L和400 mg/L 2个处理效果相当，作用10 min开始出现部分幼虫死亡，作用4 h的死亡率为100%； 浓度800 mg/L作用10 min开始出现部分幼虫死亡，作用 2 h死亡率100%。贯众浓度40 mg/L以上的各处理均表现出一定的杀虫效果，作用10 min死亡率大于50%，作用2 h各处理死亡率均为100%，其中浓度200 mg/L作用1 h的死亡率达100%，浓度400 mg/L和800 mg/L 2个处理作用 10 min 的死亡率达100%。说明：贯众杀虫效果最佳，其次为苦皮藤素，贯众和苦皮藤素具有针对性药用开发价值。

中草药；刺激隐核虫；幼虫；杀虫效果

刺激隐核虫是对海水养殖鱼类危害最大的寄生虫之一，对宿主的种类和年龄没有严格的选择性，感染石斑鱼、大黄鱼和卵形鲳鲹后造成的死亡率分别可达50%、75%和100%[1-2]。刺激隐核虫寄生在鱼类的体表和鳃丝，生活史一般要经历滋养体、胞囊前体、胞囊和幼体4个时期，无中间宿主[3]。幼虫遇到合适的宿主后营寄生生活，发育成滋养体。用化学药物如硫酸铜、乙酸、硫酸亚铁、盐酸奎宁、苯扎氯铵、苯氧乙醇、三氯异氰尿酸、甲醛、吖啶黄等浸浴病鱼有一定的治疗效果[4-9]，但所带来的环境污染和水产品质量安全等问题不容忽视。因此，寻找安全有效、环境友好、易于获得的杀虫药物对防控刺激隐核虫病具有重要的实践意义。

本研究选择几种具有杀虫功效的中草药或中草药提取物开展对刺激隐核虫幼虫的防治效果试验，并进一步对幼虫杀灭效果良好的贯众进行临床滋养体杀灭治疗试验。现将试验结果报道如下，以期为刺激隐核虫的防治和药物选择提供参考。

1　材料与方法

1.1供试材料

1.1.1药物中草药贯众、苦参、鹤草芽、鸦胆子、荜澄茄、使君子和苦楝皮购自市场中草药店，粉碎至100目左右细度；苦皮藤素(纯度6%)购自陕西天之润生物科技有限公司；双氢青蒿素(纯度98%)购自西安昊轩生物科技有限公司。

1.1.2刺激隐核虫幼虫收集从大黄鱼体表和鳃脱落于玻璃钢桶底的刺激隐核虫包囊，放入装有海水的玻璃烧杯内，水浴锅25～27℃、充气孵化40 h，观察到幼虫孵出时换入新鲜海水再孵化2 h，倒出含幼虫海水计数后调整密度。

1.2试验方法

1.2.1试验药物制备贯众、苦参、鹤草芽、鸦胆子、荜澄茄、使君子和苦楝皮原料经粉碎后分别与蒸馏水在烧杯中按1∶10比例混合，浸泡20 min后，煮开30 min，80目筛绢过滤取汁，再用蒸馏水调整容积至原体积即为母液(药物浓度为10%)，冰箱冷藏5 d内使用；苦皮藤素与二甲基亚砜按1∶6溶解制成母液；双氢青蒿素与无水乙醇按1∶20溶解制成母液。

1.2.2刺激隐核虫幼虫密度计算及调整取100 μL混匀的含幼虫海水，用等量10%福尔马林溶液固定，摇匀后取10μL于显微镜下计数，重复5次，平均值即为刺激隐核虫幼虫密度。用清洁海水将幼虫密度调整至400个/mL左右用于试验。

1.2.3试验设计将1.2.1制备的试验药物分别用海水稀释成浓度分别为50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L、800 mg/L和1600 mg/L的工作药液，各取50 μL工作药液加至96孔细胞板内，加入调整密度后(400个/mL左右)的含幼虫海水50 μL，试验载药终浓度分别为25 mg/L、50 mg/L 100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L和800 mg/L；对照组用50 μL无药物海水加等量幼虫海水。将96孔板放入25℃培养箱内，分别在10 min、30 min、1 h、2 h、3 h、4 h时，将培养板于倒置显微镜下观察刺激隐核虫幼虫的死亡情况。以幼虫沉底、纤毛不摆动作为死亡的判断标准，记录：100%死亡(+++)、大于50%死亡(++)、小于50%死亡(+)、无死亡(-)的各类虫数。贯众最低浓度组出现幼虫死亡后，补充载药终浓度分别为5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L和40 mg/L进行进一步试验。

2　结果与分析

2.1苦参、鹤草芽、鸦胆子、荜澄茄、使君子、苦楝皮的防效

苦参、鹤芽草、鸦胆子、荜澄茄、使君子、苦楝皮6种中草药，在试验设计的6种浓度(25～800 mg/L)条件下作用4 h之内对刺激隐核虫幼虫均无杀灭效果。

2.2贯众的防效

由表1看出，贯众浓度10 mg/L作用4 h时出现少量幼虫死亡；浓度20 mg/L和25 mg/L作用30 min开始出现少量幼虫死亡；浓度40 mg/L作用10 min开始出现大量幼虫死亡，2 h死亡率达100%；浓度200 mg/L作用1 h的死亡率100%；浓度400 mg/L和800 mg/L作用 10 min的死亡率达100%。

表1　贯众对刺激隐核虫幼虫灭杀效果

注：①浓度组数字标注“*”为二次补充实验数据；②幼虫死亡情况根据其死亡率分为4类 ，死亡率100%(+++)、死亡率大于50%(++)、死亡率小于50%(+)、无死亡(-)，下表同。

2.3苦皮藤素的防效

由表2 看出，苦皮藤素浓度25 mg/L作用4 h内无死亡； 浓度50 mg/L作用2 h，开始出现部分幼虫死亡；浓度100 mg/L作用30 min，开始出现部分幼虫死亡；浓度200 mg/L和400 mg/L两处理作用10 min时开始出现部分幼虫死亡，4 h的死亡率100%；浓度800 mg/L作用2 h死亡率100%。

表2　苦皮藤素对刺激隐核虫幼虫灭杀效果

2.4双氢青蒿素的防效

由表3看出，双氢青蒿素浓度低于100 mg/L的处理，观察期间4 h内无死亡；浓度200 mg/L、400 mg/L和800 mg/L 3个处理均在作用3 h以上出现幼虫死亡，死亡率大于50%。各处理不同观测时间均未出现死亡率达到100%的情况。

表3　双氢青蒿素对刺激隐核虫幼虫灭杀效果

3　讨论

王忠华等[4]报道，口服复方中草药HD-2(主要由槟榔、川楝子、绵马贯众、大青叶、穿心莲等草药混合而成)能使部分病鱼恢复摄食，刺激隐核虫病情得到缓解，平均死亡量减少15%～30%不等，镜检虫体活力降低，部分解体死亡。刘金海等[10]报道，浓度 50 mg/L的中草药HD-2对刺激隐核虫有良好的灭杀效果，口服 HD-2对大黄鱼刺激隐核虫病均显示出良好的预防和治疗效果。邹峰等[11]研究发现，五倍子、大黄、苦楝、槟榔、虎杖、贯众等6 种中草药对刺激隐核虫幼虫有一定的驱虫效果。陈章群等[12]报道，用槟榔、苦参、苦楝3种中草药熬成药汤泼洒全池(每667 m2150 g)，治疗刺激隐核虫病，治愈率达90%。Kawano等[13]使用植物提取物治疗刺激隐核虫病，也取得了良好的效果。

中草药属天然产物，在产品质量安全及环境保护方面有优势，具有良好的开发应用前景。本试验结果显示，中草药提取物苦皮藤素、双氢青蒿素，以及贯众水提物对刺激隐核虫幼虫具有一定的杀灭作用，尤其是贯众水提物对幼虫的杀灭效果最好，苦皮藤素次之。今后，针对供试中草药的有效剂量、防治效果及对鱼体的毒性等方面还需进一步深入研究。

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[13]KAWANO F，HIRAZAWA N.Antiparasitic effect of in-feed inhibitors of folic acid synthesis and dihydrofolate reductase against ciliate Cryptocaryon irritans infection in the red sea bream Pagrus major and against ciliate Ichthyophthirius multifiliis infection in black pop-eyed goldfish Carassius auratus[J].Aquaculture，2012,330-333(5):1-7.

(责任编辑：杨小萍)

Insecticidal efficacy of Chinese herbal medicine onCryptocryonirritans

FAN Hai-ping, LIN Yu, ZHONG Quan-fu, ZHENG Lei, QIN Zhi-qing

(FujianFreshwaterFisheriesResearchInstitute,FujianProvince350002)

In this paper, control efficacy of some types of Chinese herbal medicines or extracts from Chinese herbal medicine to controlCryptocryonirritanswere studied. The results showed that there was no insecticidal efficacy when 25-800 mg/LSophoraflavescens,Agrimoniapilosa,Bruceajavanica,Pipercubeba,QuisqualisindicaandMeliaazedarachwere used for 4h. When 200 mg/L, 400 mg/L and 800 mg/L dihydroartemisinin were used for 3h, there was no insecticidal efficacy while used for over 3h, mortality exceeded 50%. When 200 mg/L and 400 mg/LCelastrusangulatuswere used for 10min, some larva died while they were used for 4h, mortality reached 100%. When 800 mg/LCelastrusangulatuswas used for 10min, some larva died while they were used for 2h, death rate reached 100%. There was insecticidal efficacy when over 40 mg/LCyrtomiumfortuneiwas used. When 40 mg/LCyrtomiumfortuneiwas used for 10min, mortality exceeded 50% while death rate reached 100% when 40 mg/LCyrtomiumfortuneifor 2h, 200 mg/LCyrtomiumfortuneifor 1h, 400 mg/L and 800 mg/LCyrtomiumfortuneifor 10min were used. The above results indicated that there was best insecticidal efficacy whenCyrtomiumfortuneiwas used,Celastrusangulatusranked the second best insecticidal efficacy. So,Cyrtomiumfortuneiand Celastrus angulatus had medicinal development value targeted toCryptocryonirritans.

Chinese herbal medicine;Cryptocryonirritans; larva; insecticidal effect

2016-02-02

樊海平，男，1967 年生，研究员。

福建省科技重大专项(2013NZ0002-5)；国家水生

10.13651/j.cnki.fjnykj.2016.03.005

动物疫病监测计划(农渔发[2015]8号)。