CNTN-1表达在肝癌术后早期复发中的预测价值

李光耀，荚卫东，程 亚，盛须仁

CNTN-1表达在肝癌术后早期复发中的预测价值

李光耀，荚卫东，程 亚，盛须仁

目的 探讨神经黏附分子接触蛋白-1（CNTN-1）在原发性肝细胞性肝癌（肝癌）根治术后早期复发中的预测价值。方法 应用免疫组化法研究90例肝癌组织和癌旁组组中CNTN-1的表达。分析CNTN-1与肝癌临床病理特征及术后早期复发的关系。结果 CNTN-1在肝癌组织中表达明显高于癌旁组织（P＜0.01）。CNTN-1表达与肿瘤直径、有无完整包膜和TNM分期相关（P＜0.05）。单因素Logistic回归分析表明CNTN-1、肿瘤大小、有无完整包膜、微血管侵犯、甲胎蛋白（AFP）、Edmondson分级和TNM分期与肝癌根治术后早期复发密切相关；多因素Logistic回归分析表明CNTN-1高表达是肝癌根治术后早期复发的独立危险因素。结论 CNTN-1的高表达是肝癌根治术后早期复发的潜在预测因子。

肝癌；CNTN-1；早期复发

网络出版时间：2016-3-8 8：29：02 网络出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160308.0829.060.htm l

原发性肝细胞性肝癌（简称肝癌）是世界范围内第五大常见恶性肿瘤，其死亡率在癌症相关死因中位列第三，5年生存率仅为10%［1-2］。虽然肝切除是目前治疗早中期肝癌最有效的手段，但术后约50%的患者2年内出现复发，导致患者长期生存率较低［3］。因此寻找特异性肿瘤标志物对预测肝癌术后早期复发和改善患者预后具有重要价值。神经黏附分子接触蛋白-1（contactin 1，CNTN-1）是免疫球蛋白超家族成员之一，在调节神经轴突生长、突触形成等方面发挥重要作用［4-5］。但CNTN-1在肝癌组织中的表达情况及其与临床意义尚不清楚。该研究采用免疫组化法检测CNTN-1在肝癌组织和癌旁组织中的表达，分析CNTN-1与肝癌临床病理特征、术后早期复发的关系。为肝癌术后早期复发高危患者的鉴别提供依据。

1 材料和方法

1.1 病理标本 肝癌标本均取自2006年1月～2010年12月安徽医科大学附属省立医院肝脏外科收治经术后病理证实为肝癌组织及相应的癌旁组织（距离癌组织＞2cm的肝脏组织）的石蜡标本90例，随访截止至2013年12月，所有患者术前术后未行放疗、化疗、介入等抗癌治疗。肝癌根治术后2年内复发的为早期复发，2年以上未复发为非早期复发［6］。其中男83例，女17例；年龄19～74（54.30 ±10.90）岁，＜60岁56例，≥60岁34例；肿瘤Ø＜5 cm 28例，≥5 cm 62例；病理学组织学分型：高分化44例，中低分化46例。肿瘤分期参照美国癌症联合委员会（AJCC）TNM分期手册第七版［7］。

1.2 主要试剂 鼠抗人CNTN-1单克隆抗体购自英国Abcam公司；相应二抗购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 实验方法 采用免疫组化法检测CNTN-1蛋白的表达。连续组织切片（4μm）经二甲苯脱蜡、枸橼酸盐（pH 6.0）微波抗原修复后3%去离子过氧化氢溶液封闭内源性过氧化物酶活性，滴加一抗CNTN-1（浓度1∶500），4℃过夜。复温后滴加二抗，DAB显色。最后苏木精复染、脱水、透明、封片。由两位未参与实验、经验丰富的病理科医师对切片进行半定量评分，评分标准：每张切片在400倍显微镜下随机选取5个视野，每个视野记数200个细胞，根据染色细胞所占百分率评分：无明显细胞着色为0分；1%～10%细胞着色为1分；10%～30%细胞着色为2分；＞30%细胞着色为3分。再根据染色强度评分：未显色或显色不清为0分；浅黄色为l分；棕黄色为2分；深褐色为3分。每张切片最终得分为染色百分率和染色强度平均分数的乘积，得分≥3分者即定为高表达，得分＜3分者即定为低表达。

1.4 统计学处理 应用SPSS 17.0软件进行分析，连续资料以±s表示。分类变量采用χ2检验或Fisher确切概率法。单因素和多因素的Logistic回归分析用于寻找影响肝癌术后早期复发的因素。将单因素分析中有统计学意义的变量纳入到多因素分析。在Logistic回归基础上使用受试者工作特征曲线（ROC）分析判断各种危险因子预测肝癌术后早期复发的可靠性。

2 结果

2.1 肝癌组织及癌旁组织中CNTN-1的表达 免疫组化结果显示CNTN-1主要定位于细胞质，见图1。CNTN-1在90例肝癌和癌旁组织中的高表达率分别为54.4%（49/90）和12.2% （11/90），两者差异有统计学意义（χ2=6.718，P=0.01）。

图1 CNTN-1在肝癌和癌旁组织中的表达 DAB染色A：CNTN-1在肝癌组织中的阳性表达；B：CNTN-1在癌旁组织中的阴性表达；1：×100；2：×400

2.2 CNTN-1的表达与肝癌临床病理参数及早期复发的关系 CNTN-1在肝癌组织中的高表达与更大的肿瘤直径（P=0.004）、无完整包膜（P＜0.001）、更晚的TNM分期（P＜0.001）和术后早期复发（P＜0.000）显著相关。而CNTN-1的表达与年龄、性别、肿瘤分化程度、微血管侵犯、甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）、乙肝表面抗原、肝硬化及Child分级均无关。见表1。

2.3 早期复发相关因素的logistic回归分析 为了寻找肝癌术后早期复发的影响因素，本研究对相关因素进行了Logistic回归分析。在单因素分析中，较大的肿瘤直径、无完整包膜、微血管侵犯、更高的AFP水平、更高的Edmondson分级、更晚的TNM分期、CNTN-1的高表达是肝癌术后早期复发的危险因子。见表2。在多因素分析中，微血管侵犯、更晚的TNM分期及CNTN-1的高表达是肝癌术后早期复发的独立危险因子。见表3。

2.4 早期复发相关因素的ROC曲线分析 分别对肝癌患者各个临床病例特征和CNTN-1表达做ROC曲线分析，结果表明肿瘤大小、有无完整包膜、微血管侵犯、AFP、Edmondson分级、TNM分期、CNTN-1表达的曲线下面积（area under curve，AUC）分别为0.637、0.721、0.645、0.622、0.616、0.749、0.715。接着将各个临床病理特征联合做ROC曲线分析，AUC为0.849。最后将所有临床病理特征与CNTN-1表达联合做ROC曲线分析，AUC为0.870。见表4、图2。

表1 CNTN-1表达与肝癌临床病理特征及术后早期复发的相关性（n）

3 讨论

本研究通过免疫组化法检测了CNTN-1蛋白在90例原发性肝癌患者癌组织及相应癌旁组织中的表达情况，结果表明CNTN-1在肝癌组织中呈高表达，并且在肝癌组织中的表达与肿瘤直径、有无完整包膜和TNM分期显著相关，而与年龄、性别、肿瘤分化程度、微血管侵犯、AFP、乙肝表面抗原、肝硬化及Child分级均无关。重要的是 CNTN-1的高表达与肝癌患者术后早期复发密切相关，并且是肝癌术后早期复发的独立危险因子。该研究结果提示CNTN-1与肝癌的侵袭能力及术后早期复发存在一定的相关性，可能成为预测肝癌患者术后早期复发和评估预后的有效指标。

研究［8］显示CNTN-1在胃癌中的mRNA和蛋白水平均明显增高，其高表达与TNM分期、淋巴结转移及淋巴管侵犯密切相关。与胃癌中研究结果一致，Liu etal［9］发现CNTN-1在食管癌组织中mRNA和蛋白表达水平均明显高于癌旁组织。并且，CNTN-1的高表达与肿瘤分期、淋巴结转移及淋巴管侵犯密切相关。研究［10-11］显示CNTN-1在肺癌组织中呈高表达状态，并且与肿瘤分期及淋巴结转移相关。本研究也显示CNTN-1蛋白在肝癌组织中呈高表达状态，并且与肿瘤的侵袭性临床病理特征如无完整包膜、更大的肿块直径、更晚的TNM分期显著相关，表明其在肝癌的侵袭和转移中扮演着重要的角色。

表2 肝癌术后早期复发相关因子的单因素Logistic回归分析

表3 肝癌术后早期复发相关因子的多因素Logistic回归分析

表4 肝癌术后早期复发相关因子的　ROC曲线分析

图2 Logistic回归分析基础上使用　ROC曲线比较CNTN-1与临床病理危险因素预测肝癌术后早期复发的准确性

研究［12］表明，CNTN-1在口腔鳞癌的表达与患者术后复发相关。然而CNTN-1的表达与肝癌复发的关系国内外尚未见报道，因此，本研究采用了Logistic回归分析来判断CNTN-1表达与肝癌患者术后早期复发的关系。单因素分析表明更大的肿瘤直径、无完整包膜、微血管侵犯、更高的AFP水平、更高的Edmondson分级、更晚的TNM分期、高表达的CNTN-1是肝癌术后早期复发的危险因子。多因素分析进一步表明微血管侵犯、更晚的TNM分期及CNTN-1的高表达是肝癌术后早期复发的独立危险因子。为进一步证实CNTN-1预测肝癌术后早期复发的可靠性，在Logistic回归基础上使用ROC曲线构建了包括CNTN-1表达、单个临床病理特征、各临床病理特征联合及临床病理特征联合CNTN-1表达在内的9个模型。结果显示CNTN-1表达联合所有临床病理特征有更大的AUC，表明此模型在预测肝癌术后早期复发中可靠性更强。CNTN-1与肝癌术后早期复发密切相关，进一步揭示了CNTN-1基因在肿瘤发生和发展中起着至关重要的作用。本研究为肝癌术后早期复发的预测及早期干预治疗提供了新的思路。然而，CNTN-1促进肝癌术后早期复发的具体机制尚不清楚，需要进一步深入研究。

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stage.Multivariate analysis identified CNTN-1 was an independent risk factor for early recurrence of HCC after hepatectomy.Conclusion High expression of CNTN-1 is a potentialpredictive factor for early recurrence of HCC after hepatectomy.
Key wordshepatocellular carcinoma；CNTN-1；early recurrence

Predictive value of CNTN-1 expression in early recurrence of hepatocellular carcinoma after hepatectom y

LiGuangyao，JiaWeidong，Cheng Ya，et al
（Dept of General Surgery，The Affiliated Provincial Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230001）

Objective To investigate the predictive value of CNTN-1 expression in early recurrence of hepatocellular carcinoma（HCC）after hepatectomy.Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of CNTN-1 in tumor tissues and adjacent non-tumor tissues from 90 HCC patients.The relationships of CNTN-1 expression with clinicopathological parameters and early postoperative recurrence were evaluated.Resu lts CNTN-1 expression was significantly higher in tumor tissues than that in adjacentnon-tumor tissues（P＜0.01）.Besides，CNTN-1 expression was significantly associated with tumor size，tumor capsula，and tumor-node-metastasis（TNM）stage.Univariate logistic regression analysis indicated that early postoperative recurrence of HCC was significantly correlated with CNTN-1，tumor size，tumor capsula，vascular invasion，serum AFP，Edmondson grade，and TNM

R 735.7

A

1000-1492（2016）04-0587-05

2016-01-08接收

国家自然科学基金（编号：81172364）；安徽省科技攻关项目（编号：1301042199）

安徽医科大学附属省立医院普外科，合肥 230001

李光耀，男，硕士研究生；
荚卫东，男，教授，主任医师，博士生导师，责任作者，E-mail：jwd2013@126.com