高效液相色谱法测定醒神通窍胶囊中远志的含量

何雪冰李作孝*熊 军张 昊杨思进（ 西南医科大学附属医院，四川 泸州 646000； 西南医科大学附属中医医院，四川 泸州 646000）

高效液相色谱法测定醒神通窍胶囊中远志的含量

何雪冰1李作孝1*熊 军1张 昊1杨思进2
（1 西南医科大学附属医院，四川 泸州 646000；2 西南医科大学附属中医医院，四川 泸州 646000）

目的 建立醒神通窍胶囊中远志的测定方法。方法 醒神通窍胶囊用70%乙醇作为溶剂超声提取，采用高效液相色谱法，色谱柱为phenomenex Proidigy柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇-0.4%磷酸（90∶10）流动相；检测波长为210 nm；柱温：30 ℃。结果 远志质量浓度在22～220 μg/mL范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系，线性回归方程Y=0.26940.2676，R2=0.9995（n=7），平均回收率为95.44%，RSD=1.18%。结论 该方法操作简便、准确度高、重复性好，能够对远志进行含量测定，为提高醒神通窍胶囊的质量控制标准提供了一个有效的方法。

高效液相色谱法；醒神通窍胶囊；远志；含量测定

［Key words］HPLC； Xingshen Tongqiao； Polygala tenuifolia willd； Content determination

醒神通窍胶囊是正在研究的一种新药，由川穹、女贞子、远志等组方，方中的远志为主要药物之一，研究表明远志提取物及远志中的主要化学成分皂苷类和糖酯类化合物均有抗痴呆和脑保护活性［1］，远志提取物有助于修复因脑内胆碱能系统功能障碍引起的记忆缺陷，其对短期记忆的改善有助于修复东莨菪碱诱导的记忆缺陷［2］。远志提取物BT-11不仅能够提高老年人的认知能力［3］，还能提高老年人的记忆力［4］，对于血管性痴呆极为有益［5-6］。临床上对血管性痴呆有良好的治疗效果，为控制醒神通窍胶囊的质量，参照远志含量测定的相关文献［7-9］，对醒神通窍胶囊中的远志进行了含量测定的研究，经过方法学的系统考察和3批样品含量的测定，建立了醒神通窍胶囊中测定远志含量的高效液相色谱法。报道如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（DIONEX U-3000型），甲醇（色谱纯，上海国药集团化学公司），其他所用试剂均为分析纯。醒神通窍胶囊（四川医科大学附属第一医院，批号为150828、150709、141203）远志对照品（中国药品生物制品检定所，批号为111572-200702，纯度为98.7%），供含量测定用。

2 方法与结果

2.1 色谱条件：色谱柱：phenomenex Proidigy，ODS3 100A（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相∶甲醇-0.4%磷酸（90∶10）；流速：1.0 mL/min；检测波长：210 nm；柱温：30 ℃，进样量：20 μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备：精密称取在干燥皿中干燥了24 h的远志皂苷元对照品4.46 mg，置于20 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即配成220.1010 μg/mL的标对照品贮备液。

2.2.2 供试品溶液的制备：取醒神通窍胶囊药粉2.3646 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇10 mL，超声提取30 min，取出，放冷，提取过滤液，精密移取2 mL滤液，于烧瓶中蒸干，蒸干后残渣加入10%盐酸溶液，沸水浴回流2 h，取出放冷、过滤，沉淀水洗至中性后用甲醇溶解，并转移至10 mL量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀及得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备：按处方比例取不含远志的其他药材，制成缺失远志的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。2.3 方法学考察

2.3.1 阴性干扰试验：取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照品溶液，按拟订的色谱条件测定。供试品溶液与对照品溶液色谱图中具有相同保留时间的色谱峰，而阴性无干扰，见图1。

A B C图1 高效液相色谱图A.对照品溶液；B.阴性对照品溶液；C.供试品溶液

2.3.2 线性关系考察：分别精密取对照贮备液适量，配制成2 2.0 1 0 1 μg/mL、44.0202 μg/mL、88.0404 μg/mL、110.0505 μg/mL、132.0606 μg/mL、176.0808 μg/mL、220.1010 μg/mL的系列质量浓度溶液，分别进样20 μL测定，按2.1项下色谱条件测定，记录色谱面积，以远志的质量浓度X为横坐标、峰面积积分值Y为纵坐标绘制标准曲线。得回归方程Y=0.26940.2676，R2=0.9995 （n=7）。结果表明，对照品质量浓度在22.0101～220.1010 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

2.3.4 精密度试验：取110.0505 μg/mL的对照品溶液20 μL，连续进样6次。测定远志峰面积，结果得RSD=1.115%，表明仪器的精密度良好。2.3.5 重复性试验：精密称取同一批样品（批号为150828）6份，按拟2.2.2方法平行制备成供试品溶液，分别进样20 μL，进行测定，按外标法以峰面积计算含量及RSD。结果分别为4.8862、4.8612、4.8891、4.8464、4.8959、4.8555 μg/mL，平均值为4.8724 μg/mL RSD=0.4215%，表明本方法重现性良好。

2.3.6 稳定性试验：精密吸取供试品溶液（检品号：150828）20 μL，分别于0、2、4、8、12、16、24 h进样，测定远志峰面积，结果测得供试品远志峰面积的RSD=0.2831%，表明供试品溶液中远志在24 h内较稳定。

2.3.7 加样回收试验：精密称取已知远志含量的样品9份（检品号：150828样品含量为1.0303 mg/g）适量，分别精密加入适量的对照品溶液（22.0101 μg/mL）50、100、150 μL，按供试品溶液制备方法处理，测定含量，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定：取3批样品，按2.2项下方法制备供试品溶液，取20 μL进样测定，每批测定3次计算含量，结果批号150828、150709、141203的样品中远志平均含量分别为1.0303、1.1524、1.1778 mg/g。

3 讨 论

3.1 紫外线波长的选择：取远志对照品适量，用流动相溶液溶解，本文通过考察在不同检测波长下（210、237、320 nm）所测成分紫外吸收，仅在210 nm处远志有最大吸收，且灵敏度高，干扰较小，故选210 nm作为检测波长。

表1 加样回收试验结果（n=9）

3.2 流动相的选择：参考相关文献［10-11］，在试验过程中，曾采用多种流动相进行试验，包括乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85），乙腈-水（15∶85）、甲醇-水等测试，结果色谱峰分离效果均不理想，未形成良好峰形的峰，而未被采用。文中所选用的流动相甲醇-0.4%磷酸（90∶10）分离，主峰与其他杂质分离度和峰形都理想效果较好，且保留时间较短。

3.3 供试品提取时间的选择：在试验过程中，分别考察不同柱温（10、25、35、40 ℃）对色谱分离效果的影响，结果各柱温对分离效果、保留时间的影响均有明显区别，柱温为30 ℃分离效果好，因此确定柱温为30 ℃。醒神通窍胶囊为复方制剂，远志的含量可作为该制剂的质量控制指标。综上所述，文中建立的高效液相色谱法方法具有有操作简便、结果可靠等特点，能够用于醒神通窍胶囊的质量评价与控制。

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Determination of Polygala Tenuifolia Willd in Xingshen Tongqiao Capsule by HPLC

HE Xue-bing1， LI Zuo-xiao1*， XIONG Jun1， ZHANG Hao1， YANG Si-jin2
（1 Affiliated Hospital of the Southwest Medical University， Luzhou 646000， China； 2 Affiliated Chinese Medicine Hospital of Southwest Medical University， Luzhou 646000， China）

Objective To establish the determination method of Polygala tenuifolia willd in Xingshen Tongqiao capsule. Method Ultrasonic extraction of Xingshen Tongqiao capsule with 70% methanol as solvent. The separation was performed on a phenomenex proidigy column（250 mm × 4.6 mm， 5 μm）， the mobile phase consisted of methanol-0.4%phosphoric acid（90∶10）. The detection wavelength was set at 210 nm， and the column temperature was 30 ℃. Result There was a good linearity between the peak areas and the quantity of Polygala tenuifolia willd within the range of 22～220 μg/mL， equation of linear regression Y=0.26940.2676， R2=0.9995（n=7）. The average recovery was 95.44%， RSD=1.18%. Conclusion The establish method is simple， accurate，reproducible， and can be applied to the quality control of Xingshen Tongqiao capsule， which supplies an effective method for advance the quality control of Xingshen Tongqiao Capsule.

R282.710.3

B

1671-8194（2016）18-0037-02

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