白掌的组织培养与快速繁殖研究

2016-08-04张晶晶贾爱平银川市农业技术推广服务中心宁夏银川750021

中国农业信息 2016年7期

王　颖，张晶晶，贾爱平，安　云（银川市农业技术推广服务中心，宁夏银川 750021）

白掌的组织培养与快速繁殖研究

王颖，张晶晶，贾爱平，安云
（银川市农业技术推广服务中心，宁夏银川 750021）

摘要：以白掌茎尖作为外植体，在不同激素配比下进行组织培养。结果表明：适宜诱导白掌茎尖产生愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA2.0 mg/L+ NAA0.2 mg/L；白掌不定芽增殖的最佳培养基为MS+6-BA2.0 mg/L+IBA1.0 mg/L+ KT1.0 mg/L；最好的芽分化数是第4代；最适宜生根培养基是1/2MS+NAA0.5 mg/ L+1.0 mg/L。

关键词：白掌茎尖培养基繁殖

白掌，属于天南星科，白鹤芋属，多年生草本，翠绿叶片，洁白佛焰苞，清新幽雅，是世界上重要的观花。它还是过滤室内废气的能手，对付氨气、丙酮、苯和甲醛都有一定功效［1］。20世纪初，开始应用于盆栽观赏，视白鹤芋为“清白之花”，具有纯洁平静、祥和安泰之意。

白鹤芋的繁殖方法主要是分株繁殖，但繁殖速度慢，且成活率低，不适应商品化规模生产的需要。利用组培的方法，即可在短时间内扩繁大量组培苗供生产应用［2-5］。

1　材料与方法

1.1试验材料

以生长健壮、无病虫害的盆栽白掌植株为实验材料，剪取其茎尖作为外植体。

1.2试验方法

1.2.1 组织培养条件

以MS为基本培养基，培养基均加入蔗糖30 g/L，进口琼脂9.0 g/L，pH值为5.5～6.0。培养温度（25±1）℃，光照12 h/d，光照强度1 500～2 000 lx。

1.2.2 外植体的处理

将选好的完整植株叶片和根系去掉，用自来水冲洗2～3 h后，切除暴露在外界的表层，经无菌水冲洗3次，然后用75%的酒精处理1 min，转入到0.1%的HgCl2溶液中消毒8 min，最后用无菌水冲洗5次。用解剖刀切取3～5 mm的茎尖，接种到诱导愈伤组织的培养基中。

1.2.3 不同激素配比对茎尖诱导愈伤组织的影响

试验以白掌的茎尖作为外植体，MS为基本培养基，激素为6-BA、NAA，两因素三水平正交试验（A1～A6，分别是A1：MS+6-BA1.0+ NAA0.1；A2：MS+6-BA1.0+ NAA0.2；A3：MS+6-BA2.0+NAA0.1；A4：MS+6-BA2.0+ NAA0.2；A5：MS+6-BA3.0+ NAA0.1；A6：MS+6-BA3.0+ NAA0.2），从中筛选出最优培养基。

统计出现愈伤组织的时间、出愈率和出芽率、观察愈伤组织及不定芽的生长情况。每个处理15瓶，每瓶接种3个，3次重复。

1.2.4 不同激素配比对不定芽增殖的影响

以MS为基本培养基，当茎尖培养诱导出的丛生芽长到0.5～0.8 cm时，将丛生芽连同愈伤组织分切成0.4～0.6 cm的小块，附加激素6-BA、IBA、KT3种激素接种到增殖培养基进行增殖培养（B1～B9，分别是B1：MS+6-BA1.0+ IBA0.5+KT0；B2：MS+6-BA1.0+ IBA1.0+KT0.5；B3：MS+6-BA1.0+IBA1.5+KT0.5；B4：MS+6-BA2.0+ IBA0.5+KT0；B5：MS+6-BA2.0+IBA1.0+KT1.0；B6：MS+6-BA2.0+ IBA1.5+KT1.0；B7：MS+6-BA3.0+ IBA0.5+KT0；B8：MS+6-BA3.0+ IBA1.0+KT1.5；B9：MS+6-BA3.0+ IBA1.5+KT1.5）共9种组合，从中筛选出最优培养基。

记录增殖的丛芽数，丛芽的生长情况。每个处理15瓶，每瓶接种3个，3次重复。

1.2.5 继代次数对白掌不定芽分化培养的影响

在培养基选出的最优培养基，对白掌进行多次继代培养。继代5次，记录每次愈伤组织诱导及芽分化的芽数。

1.2.6 不同激素配比对丛生芽生根培养的影响

I/2MS为基本培养基，分别添加激素NAA、活性炭共6种组合。待分化的不定芽长至3～4 cm左右时，接种至生根培养基中，25 d后统计生根数和生根率，平均根长，筛选出最佳生根培养基。每个处理15瓶，每瓶接种3株，3次重复。

1.3项目测定

污染率（%）=污染的外植体数/接种的外植体数×100%；死亡率（%）=褐化死亡数/外植体接种的总数×100%；出愈率（%）=产生愈伤组织的外植体数数/接种的外植体总数×100%；出芽率（%）=愈伤组织的出芽数/出愈数×100%；增殖系数=增殖丛芽数/接种外植体数；平均根长=生根总长/分化出的总根数。

1.4数据分析

试验数据采用Excel和SPASS软件进行分析。

2　结果与分析

2.1不同激素配比对茎尖诱导愈伤组织的影响

由表1可见，将灭菌后的带腋芽茎段接入到不定芽诱导培养基中，不同激素配比的出愈率、出芽率差异显著。在A1～A6中，出愈率、出芽率随着6-BA浓度的升高，先升高后降低，随着NAA的浓度升高而升高。当6-BA浓度为1.0 mg/L、2.0 mg/L、3.0 mg/L 时，最大出愈率分别为53.33%、93.33%和64.44%。A4处理的愈伤组织紧密，黄绿，丛芽生长健壮、叶展开，生长情况良好，表明A4两种激素的配比达到较好的效果。白掌最佳的茎尖诱导不定芽的培养基为MS+6-BA2.0 mg/L+ NAA0.2 mg/L。

2.2不同激素配比对不定芽增殖的影响

由表2可见，在B1～B9中，出芽数和增殖系数随着6-BA浓度的升高，先升高后降低，6-BA浓度为2.0 mg/ L时，出芽数和增殖系数为最多；当NAA的浓度为1.0 mg/ L升时，表现出最多；当KT的浓度为0时，出芽数和增殖系数表现出最低。可见，KT在激素浓度配比中，起了至关重要的作用。由此得出，白掌不定芽增殖的最佳培养基为MS+6-BA2.0 mg/L+IBA1.0 mg/L+ KT1.0 mg/L。

2.3继代次数对白掌不定芽分化培养的影响

结果（表3）表明，第1代、第2代、第4代分别与其余4代之间存在显著差异；第3代和第5代之间没有差异。但是，这两代与其余三代之间差异显著。随着继代次数的增加，从第3代开始芽分化数明显增加，从第5代增殖系数开始降低。可见多代培养能提高白掌的芽分化数，而达到最好的分化数是第4代。

表1　不同激素配比对茎尖诱导愈伤组织的影响

表2　不同激素配比对不定芽增殖的影响

表3　不同继代次数的芽分化数及多重比较

表4　NAA和活性炭对瓶苗生根的影响

2.4不同激素配比对丛生芽生根培养的影响

接种10 d后，各个瓶苗陆续有根产生，呈现白里透绿的颜色，18 d后逐渐呈现黄褐色，25 d后对生根的瓶苗进行统计。由表4可见，当NAA的浓度为0.5 mg/L时，活性炭浓度为1.0 mg/L时，C2的生根数最多，生根数和平均根数显著高于C1和C3。当NAA的浓度为1.0 mg/L时，活性炭浓度为1.0 mg/L时，C5的生根数最多，生根数和平均根数显著高于C4和C6。而C2的生根数和平均根长显著高于C5，所以，最适宜生根培养基是1/2MS+NAA0.5 mg/L+1.0 mg/L。