白金定痫片抗癫痫及神经保护的实验研究

2016-08-04朱颖文缪晓路卢慧清伍小玲

中西医结合心脑血管病杂志 2016年12期

关键词：癫痫

朱颖文，缪晓路，卢慧清，伍小玲

白金定痫片抗癫痫及神经保护的实验研究

朱颖文，缪晓路，卢慧清，伍小玲

广州中医药大学附属东莞市中医院(广东东莞 523000)，E-mail： zzzhongyi@yeah.net

摘要：目的观察白金定痫片对致痫大鼠抗癫痫及神经保护的作用。方法将47只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、对照组、实验组。对照组、模型组予生理盐水，对照组予丙戊酸钠片，实验组予白金定痫片。每日1 次灌胃给药，连续3 d。于第3天灌胃给药后1 h，正常组予腹腔注射生理盐水，其余组腹腔注射1%戊四唑60 mg/kg，造癫痫模型。观察各组大鼠痫样发作行为，并测定大鼠海马部位的神经元特异性烯醇酶(NSE)的水平。结果与模型组比较，实验组大鼠完全停止发作时间缩短，重度发作发生率和死亡率都有所下降；其中完全停止发作时间上比较差异有统计学意义(P<0.01)；实验组NSE水平与模型组比较有差异有统计学意义(P<0.01)。结论白金定痫片有一定的抗癫痫作用，对大鼠的海马部位神经元具有保护作用。

关键词：癫痫；白金定痫片；行为学；神经元特异性烯醇酶

癫痫一种反复发作的神经系统疾病。无论临床或亚临床的痫样放电，特别是癫痫持续状态，均有实验或临床证据表明可以引起大脑神经元损伤，进而导致记忆、语言、定向等认知功能损害。神经元特异性烯醇酶(neuron-specific enolase，NSE)是神经元损伤的敏感性标志物，具有较高的特异性，且在神经系统疾病中显著增高[1]。白金定痫片是我院用于治疗癫痫的院内制剂。本实验观察白金定痫片对致痫动物行为学以及海马部位神经元特异性烯醇酶的影响，以期从动物实验中论证白金定痫片具有抗癫痫及神经保护的双重作用。

1材料与方法

1.1实验动物SD雄性大鼠，SPF级，体重220 g±260 g，由广东药学院动物实验中心提供，饲养3 d适应环境后再进行正式实验。

1.2实验药品白金定痫片(粤药制字Z20070474)，由东莞市中医院制剂室提供，批号：20130801；丙戊酸钠片，湖南省湘中制药有限公司，每片0.2 g；批号：140424。

1.3实验试剂及仪器戊四唑，Alfa Aesar公司，批号： 10169798；神经元特异性烯醇酶(NSE)试剂盒，天津安诺瑞康生物技术有限公司，批号： 2015010701；磷酸盐缓冲溶液(PBS)，赛默飞世尔生物化学制品有限公司。酶标仪(Thermo)、CO2细胞培养箱(Thermo)。

1.4药物的配制白金定痫片(大鼠的等效剂量5.664 g/kg)：取12片白金定痫片，研磨成粉，再用0.5%羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na)配至100 mL，放置冰箱备用。丙戊酸钠片(大鼠等效剂量180 mg/kg)：取9片丙戊酸钠片，研磨成粉，再用0.5%羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na)配至100 mL，放置冰箱备用。

1.5动物分组与给药SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组(10只)、模型组(14只)、对照组(11只)、实验组(12只)。对照组、模型组予生理盐水，对照组予丙戊酸钠片，实验组予白金定痫片。按10 mL/kg体重灌胃给药，每日1 次灌胃给药，连续3 d。各组动物于第3天灌胃给药后1 h，正常组腹腔注射相应体积的生理盐水，其余各组腹腔注射1%戊四唑注射液60 mg/kg，造癫痫模型。

1.6大鼠致痫行为学观察根据Racine分级法标准，观察各组大鼠痫样发作行为，0级：无惊厥；Ⅰ级：湿狗样颤动，面肌抽动、咀嚼；Ⅱ级：面部阵挛伴节律性点头；Ⅲ级：面部阵挛、节律性点头、前肢阵挛；Ⅳ级：前肢阵挛、后肢站立；Ⅴ级：失平衡、跌倒、四肢抽动、全身阵挛。Ⅰ级～Ⅲ级为轻度发作；Ⅳ级以上为重度发作。连续观察60 min，并记录大鼠癫痫完全停止发作时间(包括Ⅰ级～Ⅴ级)、重度发作(相当于Ⅳ级～Ⅴ级)发生率和死亡率。

1.7大鼠海马部位NSE测定实验痫样发作1 h后，脱臼处死大鼠，取脑，分离海马部位，称取重量。按1∶9(海马体重/生理盐水体积)的体积比加入PBS(pH 7.4)，用玻璃匀浆器将标本匀浆充分(保持在冰水环境下匀浆)。低温离心10 min(3 000 r/min)。仔细收集上清液。分装两份，取一份待检测NSE水平(采用酶联免疫吸附法测定)，另一份冷冻备用。

2结果

2.1白金定痫片对戊四唑诱导大鼠痫样发作行为的影响(见表1)

表1　白金定痫片对戊四唑诱导大鼠

2.2白金定痫片对大鼠海马部位NSE的影响(见表2)

表2　白金定痫片对癫痫大鼠

3讨论

癫痫，俗称“羊癫风” 或“羊角风”，属于祖国医学“痫证”的范畴，是一组由不同病因所引起，脑部神经元高度同步化，由自限性的异常放电所导致。中枢性神经系统失常为特征的综合征。国内流行病学调查显示患病率为0.5%，全国有600万～700万病人[2]。研究认为癫痫所致脑损伤可为短暂可逆性的影像学异常，也可形成脑结构改变，如海马硬化、皮质萎缩等，并进一步导致难治性癫痫；同时亚临床痫样放电病人出现的认知缺损证实了痫样放电对脑组织的损害。抗癫痫药物(anti-epileptic drugs，AEDs)在降低脑细胞易激惹性的同时，也降低了兴奋性，且影响认知功能，所以选择性应用脑保护剂是有益的[3]。因此，目前研究方向要求新型抗癫痫药物在控制癫痫发作的同时能具有良好的脑保护，即神经保护作用，以达到一举两得的效果。

NSE主要存在于大脑神经元和神经内分泌细胞内，并参与糖酵解的特异性酶。神经元损伤或坏死后，NSE从细胞内溢入脑脊液和血液。因此，NSE是检测脑内神经元损伤或坏死的客观指标[4]。有研究报道戊四氮点燃癫痫发作过程中海马各区的NSE 表达增加，明显高于对照组，随着点燃的进行、发作级别的增高，NSE表达明显增加[5]，而且认为临床NSE与痫性发作频率、持续时间有关，频繁或持续发作将导致更严重的神经元损伤。通过对血清NSE检测，可早期发现癫痫发作是否引起脑损伤及机体是否启动神经保护，为临床诊断、评价严重程度、预测预后提供一项敏感的生化指标[6]。

本实验以戊四唑注射液腹腔给药方式建立致痫动物模型，以预处理给药方法观察实验动物致痫后行为学改变，以及对致痫后海马部位NSE的影响。本实验结果表明：与模型组比较，实验组和对照组对大鼠完全停止发作时间缩短，重度发作发生率和死亡率都有所下降；其中完全停止发作时间上比较差异有统计学意义(P<0.01)；实验组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。说明白金定痫片有抗痫样作用，但与丙戊酸纳片比较无优势。与正常组比较，模型组大鼠的海马部位NSE水平显著升高，差异有统计学意义(P<0.01)，说明大鼠癫痫发作后其海马部位神经受损伤，造模成功。与模型组及对照组比较，实验组NSE水平显著下降，差异有统计学意义(P<0.01)，说明白金定痫片对海马神经元有保护作用，可以阻断大鼠痫样发作导致的海马神经元损伤。

白金定痫片是根据我院老中医经验方制定的中成药物，由苦参、郁金、石菖蒲、远志、珍珠层粉等中药组成，具有定惊、安神、宁心作用。实验结果认为白金定痫片有一定的抗癫痫作用，同时具有神经保护的双重作用。

参考文献：

[1]陈琅，季晓林.脑啡肽、神经肽Y、神经元特异性烯醇酶与癫痫[J].国外医学情报，2004，25(1)：7-11.

[2]吴江，贾建平，崔丽英.神经病学[M].北京：人民卫生出版社，2006：264.

[3]刘忠霖，王丽敏．癫痫性脑病[M].北京：人民卫生出版社，2012：431-471.

[4]De Giorgio CM，Correale JD，Gott PS，et al.Serum neuron specificenolase in human status cepilepticus[J].Neurology，1995，45： 1134-1137.

[5]马玉新，阴金波，陈焕然，等.PTZ点燃癫痫大鼠海马NSE和BMP4的表达[J].第三军医大学学报，2007，29(12)：1183-1186.

[6]高艳波，张晖.神经元特异性烯醇化酶和胰岛素样生长因子-1在癫痫中的研究进展[J].国际神经病学神经外科学杂志，2010，37(4)：332-336.

(本文编辑薛妮)

基金项目：广东省中医药管理局科研项目(No.20131074)

中图分类号：R742.1R255

文献标识码：A