正交试验优化氯霉素包合工艺的实验研究

钟　贞　李　颖

1.丽珠集团丽珠制药厂，广东　珠海　519020；2.珠海天鸿润生物工程有限公司，广东　珠海　519020



正交试验优化氯霉素包合工艺的实验研究

钟贞1李颖2*

1.丽珠集团丽珠制药厂，广东珠海519020；2.珠海天鸿润生物工程有限公司，广东珠海519020

【摘要】目的：研究复方炉甘石氯霉素包合的制备工艺，以提高氯霉素洗剂的稳定性。方法：采用饱和水溶液法制备氯霉素包合物，通过正交试验，以包封率为考察指标，筛选最佳工艺条件。结果：氯霉素-γ-环糊精包合物的最佳制备工艺条件为：氯霉素与γ-CD的质量比为1∶2，包合温度为40℃，包合时间为2h，γ-CD与水的用量比例为1∶30(g/ml)。用该工艺获得的氯霉素包合物进行制备复方炉甘石氯霉素洗剂，在6个月后检测结果与生产时进行对比，氯霉素含量较为稳定。结论：γ-环糊精包合氯霉素制备的复方炉甘石氯霉素洗剂工艺稳定，重现性良好，为工业化生产复方炉甘石氯霉素洗剂提供实验依据。

【关键词】复方炉甘石氯霉素；工艺改进；正交实验

复方炉甘石氯霉素洗剂是皮肤科常用药物，具有收敛、止痒、杀菌、消炎的功效，临床对渗出性皮炎、感染性湿疹、脓疱疮及痱子等有较好疗效[1-2]。复方炉甘石氯霉素洗剂包括炉甘石、氯霉素、氧化锌、薄荷等主要成分，但氯霉素在水溶液中稳定性差，容易降解，其发生水解的同时，也易发生氧化还原反应，降解产物主要有二氯乙酸、1-(4-硝基苯)- 2-二羟基乙酰胺基-1,3-丙二醇、1-(4-硝基苯)- 2-氨基-1,3-丙二醇、对硝基苯甲醛、4,4′氮杂苯甲酸等多种过敏原[3-4]，该类物质是引起过敏反应的主要原因。为降低复方炉甘石氯霉素洗剂中过敏物质的生成，提高复方制剂的稳定性和质量，本文将对该制剂工艺进行改进研究。

1仪器与材料

1.1仪器1260型液相色谱仪(日本岛津)；DZKW-4电热恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司)；SHZ-D循环水式真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；6020AB真空干燥箱(北京中兴伟业仪器有限公司)；BS110S电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)；XTZ-05T体视显微镜(上海光学仪器六厂)。

1.2材料氯霉素对照品(批号：130303-200614)、氯霉素二醇物对照品(批号：100712-201303)、对硝基苯甲醛对照品(批号：130562-200501)均由中国药品生物制品检定所提供；γ-环糊精(γ-CD，批号：20150607，西安天正药用辅料有限公司)；无水乙醇(批号：20150806，成都市科龙化工试剂厂)；聚维酮-PVP(批号：20150607，西安天正药用辅料有限公司)；正己烷(批号：20141201，成都市科龙化工试剂厂)；盐酸(批号：20141125，成都市科龙化工试剂厂)。

2方法与结果

2.1氯霉素含量测定

2.1.1色谱条件色谱柱：C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液(55∶45)；进样量：20μl；检测波长：272nm；流速：1.0ml/min。

2.1.2标准曲线的绘制精密称取对照品0.02g，置100ml容量瓶中，用甲醇溶解并用30%甲醇稀释至刻度，精密吸取对照品溶液1、2、4、6ml及对照贮备液10ml于10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，照标准方法进样，以对照品浓度为横坐标(C)，峰面积为纵坐标(A)进行线性回归，回归方程为A=9.127×103C+0.0987(R2=0.9998)，表明氯霉素浓度在15～28μg范围内线性关系良好。

2.1.3包合物中氯霉素含量测定精密称定20mg氯霉素包合物，置于50ml干燥的容量瓶中，用30%甲醇溶解并稀释至50ml，摇匀，60℃水浴5min，过滤，取续滤液5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；根据所做标准曲线，按外标法以峰面积计算氯霉素含量。按下式进行计算氯霉素包封率：氯霉素包封率(%)=包合物中氯霉素含量/氯霉素投药量×100%。

2.2氯霉素环糊精包合工艺优选

2.2.1包合物制备采用饱和水溶液法制备氯霉素-γ-环糊精包合物。精密称取0.3g氯霉素干燥粉末，加30ml甲醇使其完全溶解，备用。按不同投药比例精密称取γ-环糊精干燥粉末，根据辅料与水的比例用60℃的温水使γ-环糊精完全溶解，冷却待用。将氯霉素溶液缓缓加入到γ-环糊精的水溶液中，使用磁力搅拌器制备包合物。完全包合后在4℃的环境中放置48h，洗涤抽滤，60℃干燥4h，得黄色疏松包合物，分别测定氯霉素-γ-环糊精包合物的得率。

2.2.2正交实验根据前期预实验和相关文献研究[5]，制备工艺主要影响因素有：氯霉素与γ-CD的质量比例(A)、包合温度(B)、包合时间(C)、γ-CD 与用水量的质量比(D)进行L9(34)正交实验，各因素水平见表1。正交实验结果采用公式药物包封率，结果见表2和表3。

表1　氯霉素包合物制备工艺正交实验因素和水平

表2　正交试验药物包封率

表3　氯霉素包合物制备工艺优化方差分析

注:F0. 05(2, 2)=19.00，F0.01(2,2)=99.00。

通过综合分析评比结果表明，影响氯霉素药物包封率的因素依次为A>C>D>B，主要影响因素为氯霉素与γ-CD的用量比例(A)、包合时间(C)。综合分析得率的首要影响因素以及包封率的首要影响因素，得到最佳工艺条件为A1B2C2D2，即氯霉素与γ-CD的质量比为1∶2，包合温度为40℃，包合时间为2h，γ-CD与水的用量比例为1∶30(g/ml)。

2.3最优条件的验证以最佳制备工艺制备6份氯霉素包合物，按最佳包合工艺为A1B2C2D2，进行验证性试验，包封率如表4所示。此时包封率为78.30%，RSD为1.20%。表明该制备工艺稳定可靠，重现性良好。

表4　验证性试验

2.4复方炉甘石氯霉素的制备取甘油加水适量，加入炉甘石、氧化锌细粉，边加边搅拌成糊状，备用，取氯霉素包合物，加水溶解(原氯霉素用吐温-80及适量乙醇溶解)，薄荷脑用乙醇溶解，分别缓缓加入到备用液中，然后搅拌加水使成1000ml。按上述设计，配制氯霉素包合后的氯霉素炉甘石洗剂，取三批试制品，在温度(40±2)℃，相对湿度75%±5%的条件下保存。在6个月内，每隔1个月取样一次，按稳定性重点考察项目检测并进行氯霉素含量测定，检测结果与生产时进行对比，结果表明复方炉甘石氯霉素在加速试验条件下密封保存各项指标变化不明显。

3讨论

复方炉甘石氯霉素属于混悬剂类型，容易沉淀分层，且氯霉素对光、pH值及热敏感的增强均会引起其分解反应[6]。在炎热的夏季特别不利于运输和保存，局部温度或短时间强烈光照均导致氯霉素含量的降低、增加过敏原，导致临床应用中产生不良反应，影响药物治疗效果。γ-环糊精具有比β-环糊精更大内容体积，可包裹更多的药物分子，应用范围广，尤其适用于大分子类抗生素药物。此外，γ-环糊精具有极强水溶性，常温下γ-环糊精溶解度为25.6g/100ml，而β-环糊精溶解度为1.88g/100ml[7]。随着γ-环糊精应用范围的扩大、生产成本的降低，市场价格也在下降，更多的药物将应用γ-环糊精进行包合[8]。氯霉素与γ-环糊精包合后，对其包合物进行全波长扫描发现其最大吸收未变，仍在277nm附近，包合并未出现性质的改变，然而其溶解性增强，与炉甘石混悬沉淀时间变长。采用包合后的氯霉素制备复方炉甘石氯霉素洗剂，由于氯霉素包合在疏水γ-环糊精空腔内，化学性质稳定，对光、温度及pH值的变化敏感性降低，其分解速度降低，在试用中不良反应减少，扩大了药物的适用范围。对于化学性质不稳定溶解性差的制剂，可以在上述工艺制备的包合物基础上，再进一步制备成具有良好溶解特性的制剂，为临床用药中达到更好的疗效提供了实验依据。

参考文献

[1]杨慧,邵阳,陈昌云.复方炉甘石洗剂中氧化锌含量测定方法探索[J].南京晓庄学院学报,2012,5(3):59-62.[2]聂秀霞,曾文雪,莫国栋,等.紫外-可见分光光度法测定氯霉素炉甘石洗剂中氧化锌的含量[J].江西中医药大学学报,2015,26(31):70-72.

[3]李云霞,戴卫红,王文习.氯霉素滴耳液的稳定性考察[J].解放军药学学报,2011,27(5):468-470.

[4]谢芳,哈益明,王锋,等.γ射线辐照水溶液中氯霉素的降解研究[J].辐射研究与辐射工艺学报,2008,26(3):151-155.

[5]马素英,张疆莉,尚校军,等.小檗碱β-环糊精包合物研究[J].中国新药与临床杂志,2010,29(10):754-758．

[6]倪晓霞,王庆芬,刘晓玲.复方氯霉素醇溶液中两组分含量测定及有关物质检查[J].中国药师,2014,17(11):1879-1881．

[7]张扬,周裔彬,曹胜男,等.β-和γ-环糊精与丁酸乙酯包合物的制备及结构表征[J].食品与发酵工业,2014,40(9):34-38.

[8]陈迪钊,朱士龙,李勇,等.青藤碱-γ-环糊精包合物的性质及谱学分析[J].食品科学,2013,34(3):115-118.

作者简介：钟贞，硕士，主管药师，主要从事药物制剂的研究。

通信作者：李颖，工程师，主要从事药物制剂的研究。

【中图分类号】R283.6

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)12-0022-02

(收稿日期：2016.04.14)

Study on Improvement of the Lotion of Compound of calamine and chloramphenicol

ZHONG Zhen1LI Ying2*

1. Livzon(Group) PharmaceuticalFactory,Zhuhai 519020，China；2.Zhuhai Tian Hong run Biological Engineering Co.Ltd.,Zhuhai 519020，China

Abstract:Objective To study the Improvement process of the lotion of compound of calamine chloramphenicol. Methods Using a saturated aqueous solution inclusion complex of chloramphenicol prepared by orthogonal experiment to evaluate the preparation of entrapment was screened optimum conditions. Results Chloramphenicol was preferably after γ-cyclodextrin optimum preparation conditions cyclodextrin inclusion complexes as follows: the mass ratio of chloramphenicol and γ-CD was 1∶2, the inclusion temperature was 40℃, inclusion time was 2h , γ-CD and the ratio of the amount of water is 1∶30(g/ml). During the six-month test, the test results were compared with October, Compound calamine chloramphenicol under accelerated test conditions sealed the indicators did not change significantly.Conclusion Compound calamine lotion chloramphenicol process γ-cyclodextrin inclusion chloramphenicol prepared stable, reproducibility, and provide a theoretical basis for the industrial production of compound chloramphenicol calamine lotion.

Key words:Compound calamine chloramphenicol; Improvement process; Orthogonal experiment