宁夏部分地区牛病毒性腹泻的血清学检测

王晓亮，王玉梅，张玉玲，吴亚文，李知新，张 雯，胡永浩（.甘肃农业大学，甘肃兰州 70070；.宁夏动物疾病预防控制中心，宁夏银川 7500；.宁夏大学，宁夏银川 7500）



宁夏部分地区牛病毒性腹泻的血清学检测

王晓亮1，2，王玉梅2，张玉玲2，吴亚文2，李知新2，张 雯3，胡永浩1
（1.甘肃农业大学，甘肃兰州 730070；2.宁夏动物疾病预防控制中心，宁夏银川 750011；3.宁夏大学，宁夏银川 750021）

摘 要：［目的］掌握宁夏地区部分牛场犊牛病毒性腹泻病毒感染情况，为犊牛病毒性腹泻的净化和综合防治提供依据。［方法］从宁夏4个市9个县（区）的25个发病牛场（户）采集血清样品191份，采用ELISA方法，进行血清学调查。［结果］宁夏4个地级市犊牛病毒性腹泻的抗体阳性率高达64.92%，并有一定程度的抗原阳性，且主要发生在1月龄以内的犊牛。［结论］牛病毒性腹泻是具有重大经济意义的疾病，是今后宁夏养牛业应重点防范的疾病之一。

关键词：牛病毒性腹泻；血清学；调查；ELISA

牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV），属于黄病毒科、瘟病毒属。该病毒引起的疾病非常复杂，常呈多种临床表现，通常将引起临床急性症状的疾病称为牛病毒性腹泻（BVD），而引起慢性持续感染的疾病称为黏膜病（MD），因此该病也称为牛病毒性腹泻-黏膜病。BVDV可以感染牛、羊、猪和野生反刍动物，临床以肠炎、腹泻、呼吸综合征、先天性缺陷、免疫抑制、繁殖障碍、急性和慢性黏膜病以及母畜流产、产死胎和畸形胎等为特征［1］。Olafson 等［2］1946年在美国的奶牛场中首次发现并报道该病，随后该病在南北美洲、欧洲、亚洲、大洋洲和非洲等地区的许多国家流行。自李佑民等［3］在我国成功分离和鉴定出BVDV以来，该病在我国北方大部分省区均有较严重流行。高双娣等［4］从青海、宁夏、甘肃、陕西、四川等地的黄牛、牦牛中进行BVDV抗体检测，发现其血清阳性率分别为46.15%和30.08%。

BVD严重影响奶牛和黄牛的繁殖及生产性能，给养牛业造成严重的经济损失［5］。为摸清宁夏地区牛BVDV感染和流行情况，对25个牛场的191份血清样品进行了血清学调查，旨在为该病的综合防治提供依据。

1 材料与方法

1.1 样本采集

2015年6—8月以现场采集的方式，在宁夏4个市9个县（区）出现犊牛腹泻症状的25个养牛场（户），采集发病或同群犊牛血液样品191份。

1.2 检测用试剂

美国IDEXX公司生产的牛病毒性腹泻病毒抗原检测试剂盒、西班牙HIPRA公司生产的CIVTEST病毒性腹泻P80抗体阻断法试剂盒，均购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司。

1.3 器材

培养箱、96孔酶标仪（美国伯乐680）、洗板机、微量移液器等。

1.4 检测方法

1.4.1 血清的制备。按照常规方法从犊牛的颈静脉或尾静脉采血，每头牛3 mL左右，在室温倾斜静置半天或37℃培养2 h，待淡黄色血清析出后，3 000 r/min离心5 min，取上清于离心管中，置于4℃或-20℃保存备用。

1.4.2 ELISA检测。BVDV抗原检测按照美国IDEXX公司推荐的ELISA方法进行，当被检样品的S-N值等于或小于0.300时，判为BVDV抗原阴性；当被检样品的S-N值大于0.300时，判为BVDV抗原阳性。BVDV抗体检测按照西班牙HIPRA公司生产的CIVTEST病毒性腹泻P80抗体阻断法试剂盒使用说明书进行操作，将待检血清按1：10倍稀释，并根据说明书进行结果判定。

2 结果

2.1 总体检测结果

在25个养牛场（户）中，有5个场户经检测发现BVDV抗原阳性，场抗原阳性率为20%（5/25），样品来自于固原市和银川市；有15个场户经检测发现BVDV抗体阳性，场抗体阳性率为60% （15/25）。在191份牛血清中，有7份为BVDV抗原阳性，个体阳性率为3.66%（7/191）；有124份为BVDV抗体阳性，个体阳性率为64.92% （124/191）（表1）。

表1 宁夏4个市犊牛病毒性腹泻检测情况汇总表

2.2 宁夏固原市5个县（区）BVD检测结果

对宁夏固原市所属的5个县（区）进行了全覆盖采样，经检测发现C县与D县的BVDV抗体、抗原检测均为阴性，而A、B、E三县均呈现不同程度的BVDV抗体或抗原阳性（表2）。在地理分布中，C县与D县相邻，并且均位于A、B、E三县的南端，因此认为地理位置或地形特点对BVDV传播可能存在一定的影响。

2.3 犊牛病毒性腹泻与月龄的关系

随机对8个养牛场的108头犊牛进行了BVD抗体、抗原检测，将检测结果与月龄进行关联分析，结果发现犊牛病毒性腹泻、抗体检测阳性样品主要来源于1月龄以内的犊牛（表3）。

表2 宁夏固原市的5个县（区）犊牛病毒性腹泻检测情况汇总表

表3 宁夏3个市的牛规模养殖场犊牛病毒性腹泻与月龄关系

3 讨论

3.1 虽然仅通过血清学调查不能排除细菌性、寄生虫性或饲养管理等因素共同造成犊牛腹泻的可能，但是从血清学的调查数据可以确定BVDV在宁夏区域内广泛分布，尤其是养牛密集区，并且随着宁夏地区养牛业的迅猛发展和区内牛的频繁交易以及无序流动，该病会继续传播蔓延，是今后宁夏养牛业应重点防范的疾病。

3.2 BVDV的传染源主要是发病畜。病牛的分泌物、排泄物、血液和脾脏中都含有病毒，可以直接接触或间接接触的方式传播［6］。BVDV可以穿过胎盘感染胎儿，特别是在怀孕早期。母牛一旦被感染，病毒可通过胎盘感染胎儿，使胎儿产生免疫抑制，引起持续性病毒血症；如果小牛正常产出，病毒血症能持续到成年期，这种牛临床上看似健康，血清中又无保护性抗体，但体内始终带毒，是牛群中最危险的传染源［6］。

3.3 虽然犊牛腹泻是犊牛饲养管理中面临的主要健康问题之一，但通过良好的饲养管理措施可有效降低其发病率。要做好饲养管理必须从加强母牛和犊牛的饲养管理、营造良好的卫生环境、科学免疫接种等多方面进行综合管控。然而，宁夏地区牛养殖场户的饲养管理水平较之其它地区仍存在一定的差距，并将需要一定的时间进行转变与提升。为控制BVDV在宁夏的流行并加以消灭，就必须采取检疫、隔离、净化、预防、加强饲养管理等综合防控措施。我国已生产出一种弱毒冻干疫苗，可接种不同年龄和品种的牛，接种后表现安全，14 d后可产生抗体并保持22个月的免疫力［7］。此外，根据一些研究报道，中草药对治疗牛病毒性腹泻效果显著，疗效稳定，且无任何药物残留［8］。建议宁夏地区制定《宁夏牛病毒性腹泻病综合防治措施》，为控制并净化BVDV奠定基础。

参考文献：

［1］ 殷震，刘景华.动物病毒学［M］.2版.北京：科学出版社，1997.

［2］ Olafson P，Mac-callum A D，Fox F H.An Apparently new transmissible disease of cattle ［J］.Cornell Vet.1946，36：205-213.

［3］ 李佑民，刘振国，武银莲.关于牛病毒性腹泻-黏膜病病毒（长春184）的分离与鉴定［J］.中国人民解放军兽医大学学报，1993.3（2）：113-121.

［4］ 高双娣，邱昌庆，周继章，等.西北和西南五省（区）部分地区黄牛牦牛牛病毒性腹泻/黏膜病血清学监测［J］.中国兽医科技，1999，29（7）：17-18.

［5］ 王连江，齐长明.牛病毒性腹泻病的危害与防制［J］.中国奶牛，2007（9）：33-34.

［6］ 汤中和.牛病毒性腹泻病毒JN株的分离鉴定及E2基因的序列分析［J］.中国畜牧兽医，2013（5）：91-94.

［7］ 蒙旭辉.挤奶机引起奶牛乳房炎的原因及预防措施［J］.北京奶业，2013（2）：18-19.

［8］ 张春梅，刘丽娟.中草药治疗牛病毒性腹泻的疗效试验［J］.中国畜牧兽医文摘，2014，30（11）：142-143.

（责任编辑：朱迪国）

注：王晓亮、王玉梅对本文有相同贡献

Serological Investigation of Bovine Viral Diarrhea in Some Regions of Ningxia

Wang Xiaoliang1，2，Wang Yumei2，Zhang Yuling2，Wu Yawen2，Li Zhixin2，Zhang Wen3，Hu Yonghao1
（1.Gansu Agricultural University，Lanzhou，Gansu 730070；2.Ningxia Animal Disease Prevention and Control Center，Yinchuan，Ningxia 750011；3.Ningxia University，Yinchuan，Ningxia 750021）

Abstract：［Objective］The aim of the study was to understand the infection of bovine viral diarrhea virus（BVDV）on some cattle farms in some parts of Ningxia and to provide the basis for cleaning up and comprehensive prevention and control of bovine viral diarrhea.［Methods］ 191 bovine serum samples were collected from 25 cattle farms in 4 cities of Ningxia to detect the infection of BVDV by ELISA method.［Results］Results showed that BVDV antibody positive rate was as high as 64.92% in 4 cities of Ningxia，and antigen positive was detected in a certain degree.And most of BVD occurred in less than one month old calves.［Conclusion］Bovine viral diarrhea is one of the diseases with great economic signifi cance on cattle farms，and it was also the disease that should be prevented primarily for the cattle industry in Ningxia in the future.

Key words：bovine viral diarrhea；serology；investigation；ELISA

中图分类号：S851.3

文献标识码：B

文章编号：1005-944X（2016）02-0017-03

基金项目：宁夏农业科技支撑--关键技术攻关项目（2015）

通讯作者：胡永浩