饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼生长性能、体组成、

王菲++李向飞++李鹏飞

摘要：研究了团头鲂幼鱼饲料中维生素B2的最适需求量及维生素B2水平对团头鲂幼鱼生长性能、体组成、抗氧化功能和肠道消化酶活性的影响。试验采用单因子浓度梯度法，将鱼随机分为6组，投喂不同水平的维生素B2，分别为166、2.83、4.29、6.15、8.37、11.28 mg/kg的半纯合饲料，每日3次，饱食投喂12周。结果表明，饲料中维生素B2水平对团头鲂幼鱼饵料系数、存活率和形体指标均无显著影响。当饲料中维生素B2水平从1.66 mg/kg升至 6.15 mg/kg 时，团头鲂幼鱼的增质量率和特定生长率均显著增加；当维生素水平进一步升高时，则显著下降。饲料中维生素B2水平对团头鲂幼鱼全鱼的水分、粗蛋白和粗灰分水平均无显著影响。团头鲂幼鱼全鱼粗脂肪水平在饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至6.15 mg/kg时则显著升高；当维生素B2水平进一步升高时，则显著下降。当饲料中维生素B2水平从1.66 mg/kg升至4.29 mg/kg时，团头鲂幼鱼肝脏中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性和还原型谷胱甘肽的含量，以及肠道淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性均显著升高，当维生素B2水平进一步升高时，则显著下降；丙二醛含量变化趋势则与之相反。根据团头鲂幼鱼增质量率、肝脏维生素B2沉积量和肝脏D-AAO活性进行回归分析结果，团头鲂幼鱼饲料中维生素B2最适添加量分别为5.21、4.65、6.02 mg/kg。

关键词：团头鲂；维生素B2；生长性能；体组成；抗氧化；肠道酶活性

中图分类号： S963.73+1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）05-0319-05

维生素B2，又称核黄素，是动物必需的水溶性维生素之一，参与机体内氧化还原反应、细胞代谢和呼吸链反应[1]。研究表明，鱼类缺乏维生素B2一般会呈现食欲减退和生长缓慢的症状[2]。鲑属鱼类缺乏维生素B2时，除了生长缓慢，眼睛还会出现畏光、白内障、出血及角膜新生血管等症状[3-5]，大鳞大麻哈鱼（Oncorhynchus tshawytscha）、虹鳟（Salmo gairdneri）还会出现体色变深和身体平衡失调等情况[4，6]；然而，Woodward在虹鳟幼鱼缺乏维生素B2试验中并未发现以上症状，但缺乏维生素B2的幼鱼却表现出严重的鳍部侵蚀、体色变浅和高死亡率的情况[7]。此外，同种鱼类维生素B2的缺乏亦有不同表症。例如，斑点叉尾（Ietalurus punetaus） 缺乏维生素B2时会出现单侧或2侧的白内障[8]，Murai等发现维生素B2的缺乏仅会导致斑点叉尾生长迟缓和体长变短[9]。研究表明，维生素B2缺乏症具有明显的特异性，且与鱼类的种类、生长阶段、环境、食性等有着密切的联系。鱼类饲料原料中的维生素B2水平并不能满足鱼类生长的需要，必须额外添加一定量的维生素B2进行补充[1-2]，充分说明维生素B2对鱼类生长的必要性。

Chen等发现，缺乏维生素B2会削弱草鱼（Ctenopharyngodon idella）幼鱼鳃部的抗氧化能力[10]；Yates等研究表明，维生素B2可提高大鼠（Rattus norvegicus）的胃肠道功能[11]；Li等也在对建鲤（Cyprinus carpio var. Jian）的研究中得出，饲料中添加维生素B2会促进其幼鱼消化能力的增强[12]。前人研究指出，鱼类的生长和其抗氧化功能及肠道酶活性密切相关[10，13]，目前，尚未有文献直接指明饲料维生素B2水平与团头鲂（Megalobrama amblycephala）幼鱼抗氧化功能和肠道酶活性的关系，因此本试验开展团头鲂幼鱼营养需求相关方面的研究。

团头鲂是中国重要的草食性淡水经济鱼类[14]。近年来，团头鲂的养殖量迅速增长[15]，但针对团头鲂营养需求的研究还很有限。目前，团头鲂的营养需求研究主要集中在三大营养物质、氨基酸和脂溶性维生素等方面[16-20]，而水溶性维生素的研究尚较缺乏。本试验着重探讨了团头鲂幼鱼的适宜维生素B2需求量及其对鱼体抗氧化功能和肠道酶活性的影响，以期为团头鲂维生素营养需求资料的完善提供理论基础，并为营养饲料配方提供科学依据。

1材料与方法

1.1试验饲料

本试验采用单因子设计，配制6组半纯合饲料，分别添加维生素B2水平为0、2、4、6、8、10 mg/kg[12]（饲料中维生素B2实际水平为1.66、2.83、4.29、6.15、8.37、11.28 mg/kg）。试验饲料以进口的秘鲁鱼粉、酪蛋白和明胶为蛋白源，以豆油和鱼油为脂肪源（按照1 ∶1的比例添加），以玉米淀粉为糖源，以微晶纤维素作为填充物，以羧甲基纤维素钠为黏结剂[14]。饲料原料先粉碎，按照配方称重后将各原料逐级均匀混合，充分混合后加入一定量的水再混合，然后用小型制粒机加工成粒径为2 mm左右的颗粒饲料，常温风干后置于4 ℃冰箱保存备用[14，16，18]。饲料组成及营养成分见表1。

1.2试验团头鲂及养殖管理

试验鱼养殖于南京农业大学浦口试验基地室内流水系统中，驯化14 d，其间投喂不含维生素B2的基础饲料，驯化后挑选体格健壮、规格整齐、体质量为（41.52±0.15）g的幼鱼288尾，随机分成6组，每组4个重复，每个重复12尾。每日饱食投喂3次（时间分别在07：30、11：30、16：30），养殖期为12周。试验期间，全程微流水循环（1.5 L/min），水温控制在 25～30 ℃，pH值为7.0～7.5，全天24 h充氧。

1.3指标测定方法

1.3.1生产性能统计和样本采集养殖结束后，将鱼饥饿24 h采样。统计每缸的尾数并称总质量，从中随机取出6尾鱼逐尾称质量和测量体长，其中2尾鱼冰冻保存用以测定全鱼体组成，另外4尾鱼置于冰盘上解剖，取出内脏团称质量。然后，分离出肝脏，用预冷的0.85%生理盐水清洗，用滤纸吸干并称质量，将其置于-70 ℃冷冻保存，用于抗氧化功能的测定；取肠道中段，并用生理盐水冲洗肠道内部清除内容物，将其置于-70 ℃冷冻保存，用于肠道酶活性的测定。

生产性能的计算公式如下：

增质量率（WGR）=（mt-m0）/m0×100%；

特定生长率（%/d）=[ln（mt）-ln（m0）]/t×100%；

饵料系数（FCR）=F/（mt-m0）；

肥满度（CF）=mt（g）/体长3（cm3）×100%；

肝体比（HSI）=肝脏质量（g）/全鱼质量（g）×100%；

脏体比（VSI）=内脏质量（g）/全鱼质量（g）×100%；

成活率（SR）=试验结束时总尾数/试验开始时总尾数×100%。

式中：m0为鱼体初质量，g；mt为鱼体末质量，g；F为摄食量，g；t为饲养天数，d。

1.3.2样品测定饲料原料和团头鲂幼鱼全鱼概略养分测定参考AOAC的方法[21]。将饲料和全鱼称质量后置于培养皿中，在（105±2） ℃的烘箱中烘至恒质量测定水分水平。粗蛋白（N×6.25）水平采用全自动凯氏定氮仪（FOSS KT260，瑞士）测定；粗脂肪水平采用索氏抽提法测定（2050；FOSS Tector）；将样品置于电炉上炭化后，在马福炉中于（550±20） ℃ 下灼烧5 h后测得饲料和全鱼中粗灰分水平；饲料总能采用氧弹测热仪（Parr 1281，美国）测定。

饲料及团头鲂幼鱼肝脏中维生素B2水平参考Callmer等的方法[22]测定。肝脏组织匀浆液的制备及酶活性的测定：将肝脏准确称质量，以1 ∶4（组织 ∶生理盐水）的比例加入预冷的生理盐水后冰浴匀浆，然后于3 000 r/min离心10 min，收集上清液并存放于4 ℃冰箱。待测肝脏D-氨基酸氧化酶（D-amino acid oxidation，D-AAO）活性参考Woodward的方法[23]进行测定。肝脏超氧化物歧化酶（SOD）活性按照Jin等描述的方法[24]测定；还原型谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）水平参照Zhang等的方法测定[25]；过氧化氢酶（CAT）活性测定参考Jiang等的方法测定[26]。

肠道组织匀浆液的制备及酶活性的测定：将肠道准确称质量，按1 ∶9（组织 ∶生理盐水）加入预冷生理盐水后冰浴匀浆，制成20%组织匀浆，然后于3 000 r/min离心10 min，收集上清液并存放于4 ℃冰箱。肠道蛋白酶采用福林-酚法[27]测定；淀粉酶和脂肪酶活性参考Furné等的方法[28]测定。

1.4数据统计与分析

试验数据采用SPSS 19.0软件分析，结果以“平均值±标准误”表示。先进行单因素方差分析，采用Tukey氏法做多重比较分析组间差异显著程度，显著水平设定为P<0.05。

2结果与分析

2.1饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼生长性能和形体指标的影响

饲料中维生素B2水平量对团头鲂幼鱼饵料系数、存活率和形体指标均无显著影响（表2）。当饲料中维生素B2水平从1.66 mg/kg升至6.15 mg/kg时，团头鲂幼鱼的增质量率和特定生长率均显著增加；而当维生素水平进一步升高时，又显著下降。以饲料中维生素B2水平为横坐标，团头鲂幼鱼增质量率为纵坐标进行双折线回归分析，得出y=4.032 7x+64.532（r=0.978 0）和y=-0.643 2x+88.905（r=0.943 2） 2个方程式。对其求解，得出当饲料中维生素B2水平为 5.21 mg/kg 时，团头鲂幼鱼有最大增质量率（图1）。

2.2饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼肝脏维生素B2沉积量和D-氨基酸氧化酶活性的影响当饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至8.37 mg/kg时，团头鲂幼鱼肝脏中维生素B2沉积量显著增加；当维生素B2水平进一步升高时，则无显著差异。饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至6.15 mg/kg时，团头鲂幼鱼肝脏D-AAO 活性显著增加；当维生素B2水平进一步升高时，则显著下降（表3）。

2.3饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼全鱼体组成的影响

饲料中维生素B2水平对团头鲂幼鱼全鱼的水分、粗蛋白和粗灰分均无显著影响（表4）。当饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至6.15 mg/kg时，团头鲂幼鱼全鱼粗脂肪含量显著增加；当维生素B2水平进一步增加时，则显著下降。

2.4饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼肝脏抗氧化功能的影响

当饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至4.29 mg/kg时，团头鲂幼鱼肝脏中超氧化物歧化酶、还原型谷胱甘肽和过表4不同维生素B2水平对团头鲂幼鱼全鱼组成的影响

维生素B2水平氧化氢酶都显著升高；当维生素B2水平进一步升高时，则显著下降。饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至 2.83 mg/kg 时，团头鲂幼鱼肝脏丙二醛含量显著降低；当维生素B2水平进一步升高时，则差异不显著（表5）。

2.5饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼肠道消化酶活性的影响

饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至4.29 mg/kg时，团头鲂幼鱼肠道蛋白酶活性显著升高，当维生素B2水平进一步升高时，则差异不显著；饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg 升至6.15 mg/kg时，团头鲂幼鱼肠道淀粉酶和脂肪酶活性显著升高，当维生素B2水平进一步升高时，淀粉酶活性则差异不显著，而脂肪酶活性显著下降（表6）。

3讨论与结论

3.1饲料维生素B2最适需求量

根据前人研究，有些鱼类缺乏维生素B2会出现眼球出血、畏光等情况[3-5]。Deng等饲喂肉食性鱼类杂交鲈（Morone chrysops ♀ × Morone saxatilis ♂） 8周试验中，出现上述缺乏症[1]。而本试验中，团头鲂幼鱼却并未出现此种症状。这可能是由于养殖试验环境、周期、鱼的种类和食性不同所致[1，12]。鱼类缺乏维生素B2最为普遍的症状便是生长减缓[3-6]，与本试验结果一致。当饲料中维生素B2水平是1.66 mg/kg 时，团头鲂幼鱼末质量、增质量率和特定生长率均最小，与维生素B2水平较多的处理组相比有显著差异；当维生素B2水平达到6.15 mg/kg时，末质量、增质量率和特定生长率达到最大值，这可能是由于在此条件下，团头鲂幼鱼有较高肠道消化酶活性，从而提高其对饲料的利用率[29]。根据团头鲂幼鱼增质量率和饲料中维生素B2水平进行回归分析，得出团头鲂幼鱼维生素B2最适需求量为5.21 mg/kg，比建鲤维生素B2最适需求量4.22 mg/kg[12]偏大，这可能是因为其试验采用的建鲤幼鱼初质量在23.39 g左右，比本试验所用的团头鲂幼鱼小，而小鱼对于维生素B2的缺乏较为敏感[1]。

肝脏维生素B2的沉积量也是衡量鱼类维生素B2需求量的一个重要指标[30]。通过对团头鲂幼鱼肝脏维生素B2沉积量进行回归分析，饲料中维生素B2最适添加量为 4.65 mg/kg，与Halver在鲑鱼6～8 mg/kg[30]和Amezaga在虹鳟4.4～11.4 mg/kg[31]中所得的结果有所差别，这可能是由于鱼的种类不同导致肝脏维生素B2沉积量的差异，同时也证明了维生素B2并不会在肝脏中累积。除此之外，Woodward在针对虹鳟的试验中表明，D-AAO活性是衡量其维生素B2需求量一个更为敏感稳定的指标[32]，该论断也在本试验中得到验证。以肝脏D-AAO活性为考量进行回归分析，得出团头鲂幼鱼饲料中维生素B2最适添加量为6.02 mg/kg，与 Serrini 在斑点叉尾研究中所得最适需求量为6 mg/kg结果[33]基本一致，表明团头鲂幼鱼维持生理需求的维生素B2水平高于正常生长需要水平。

生产实践中一般推荐以增质量率为指标，回归分析所得最适需求量作为考量，但鉴于鱼类对维生素B2的需求量与很多环境因素相关[1，14]，且日粮中合理的原料配比可以降低其对维生素B2的需求量[32]，所以试验所得数据若要应用于生产，应仔细考虑生产实践与试验条件的差异，并进行合理调整。

3.2饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼全鱼体组成的影响

本试验结果表明，饲料中维生素添加量对团头鲂幼鱼全鱼水分、蛋白质和灰分均无显著影响。根据以往的研究可知该结果是合理的，鱼类全鱼体组成中，粗蛋白和粗灰分水平与日粮组成并无直接联系，而与其年龄与规格有关[34-35]。当饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至6.15 mg/kg时，团头鲂幼鱼全鱼粗脂肪水平显著增加，当维生素B2水平进一步增加时，则又呈显著下降趋势，这也与Li等在草鱼中所得结果[12]一致。由前人研究可知，维生素B2确实与机体脂肪代谢相关[2]，但其粗脂肪水平的变化是否因为维生素B2水平变化而直接引起的还有待进一步研究。

3.3饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼肝脏抗氧化功能的影响

机体在呼吸和细胞代谢过程中会产生氧自由基，当氧自由基及代谢过程副产物过量时，机体会出现不同程度的氧化损伤[14，36]，及时清除过量的自由基可以降低机体氧化损伤的程度。本试验中当维生素B2水平由1.66 mg/kg升至4.29 mg/kg 时，肝脏MDA含量显著下降，当维生素B2水平进一步上升时，则差异不显著。表明维生素B2水平的升高可以在一定范围内减弱鱼体遭受自由基攻击的程度，减轻鱼体的氧化应激损伤[36-38]。当维生素B2水平由1.66 mg/kg升至4.29 mg/kg时，肝脏SOD、CAT活性和GSH含量均呈上升趋势，并与对照组差异显著；而当维生素B2水平进一步升高时，则差异不显著。表明维生素B2水平的升高可以促使CAT活性提高，使之能更好地消除体内过多的过氧化氢，避免多余自由基的产生，从而使细胞免受过氧化损伤；促使SOD和GSH清除自由基的能力增强，减弱自由基对鱼体的胁迫程度[36-38]。因此，在饲料中适当升高维生素B2水平可以降低MDA含量，提高SOD、CAT活性，增加GSH含量，进而提高团头鲂幼鱼的抗氧化功能。

3.4饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼肠道消化功能的影响

肠道是鱼类进行消化吸收的主要场所，尤其对无胃鱼类来说[12，38]，肠道消化酶参与细胞腔消化，可在一定程度上反映鱼类的消化能力，对鱼类生长起着重要作用[12，29]。本试验中随着维生素B2水平的升高，团头鲂幼鱼肠道淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性也显著增加，但当维生素B2水平进一步升高时，淀粉酶和蛋白酶活性无显著差异，表明维生素B2可以在一定范围内提高团头鲂肠道消化酶的活性，从而增强其对营养物质的消化，增加其消化功能，这与Li等对建鲤的研究结果[12]一致。本试验中肠道酶活性较高的组也有较好的增质量率，进一步证明肠道酶活性对鱼类生长起重要作用[29]。

综上所述，分别根据团头鲂幼鱼增质量率、肝脏维生素B2沉积量和肝脏D-AAO活性进行回归分析，饲料中维生素B2最适添加水平分别为5.21、4.65、6.02 mg/kg，并且在一定范围内添加饲料中维生素B2水平可以显著提高团头鲂幼鱼的抗氧化能力，增强肠道消化功能。

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