肺动脉高压药物Selexipag含量及有关物的测定

马慧丽

石药集团中诺药业（石家庄）有限公司

肺动脉高压药物Selexipag含量及有关物的测定

马慧丽

石药集团中诺药业（石家庄）有限公司

采用HPLC法测定Selexipag含量和有关物质。色谱条件如下：色谱柱：Welchrom-C18色谱柱，检测波长为251nm。结果表明：Selexipag在5～150.0 μg/mL浓度范围内，线性关系良好，平均加样回收率为100.2%，RSD为0.61%。该法简便、精密、专属、灵敏，可用于测定Selexipag原料药含量和有关物。

HPLC；Selexipag；有关物；含量

肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension，PAH）是一种罕见的慢性进行性肺部疾病，预后不佳，患者通常身体衰弱，其后果是需进行肺移植或者导致死亡［1］。2015年12月21日，Actelion公司的Selexipag（Uptravi）片剂获美国FDA批准上市，适用于肺动脉高压的治疗，并授予孤儿药地位。Selexipag最初是由日本新药株式会社发现并合成，Selexipag被羧酸酯酶1水解产生其活性代谢物，其活性强度约为selexipag的37倍［2，3］。本文作者采用高效液相色谱法（HPLC）测定Selexipag的含量及其有关物含量。

1　实验

1.1试剂与仪器

Selexipag标准品，进口；Selexipag样品，自制；乙腈，色谱纯；水为自制纯净水；其它试剂均为分析纯。

Agilent 1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司）。

1.2方法

1.2.1色谱条件

色谱柱：Welchrom-C18色谱柱（4.6mm×200mm，5μm）；流动相：0.1mol/L磷酸氢二钠溶液（磷酸调节pH至7.2）一乙腈（75：25）；流速为1.0mL/min；检测波长为251nm；柱温为30℃；进样量为10μL。

1.2.2对照品溶液的配制

取Selexipag对照品约15mg，精密称定，置50mL量瓶中，稀释摇匀，作为对照品溶液。

1.2.3供试品溶液的配制

取Selexipag样品约15mg，精密称定，置50mL量瓶中，稀释摇匀，作为含量测定用供试品溶液；取Selexipag样品约25mg，精密称定，同法配制，作为有关物质检查用供试品溶液。

1.2.4对照溶液的配制

精密量取0.5mL“1.2.3”项下有关物质检查用供试品溶液，置l00mL量瓶中，稀释摇匀，作为有关物质检查对照溶液。

2　结果与讨论

2.1系统适应性

分别量取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液，按“1.2.1”项下色谱条件进样测定。结果表明，主峰保留时间6.3min，拖尾因子为1.02，与相邻杂质峰的分离度均大于2.0，理论塔板数按Selexipag峰计算不低于3000。

2.2专属性考察

取10 mL“1.2.2”项下Selexipag对照品溶液分别加入1 mol/L氢氧化钠溶液、1 mol/L盐酸溶液、30%过氧化氢溶液各2 mL和100℃水浴加热1 h。中和后加流动相至20 mL，分别进样10 μL，考察降解物的分离性能。经酸、碱、高温、氧化破坏后的降解物与主峰Selexipag均得到基线分离，表明方法的专属性好。

2.3标准曲线

精密量取“1.2.2”项下Selexipag对照品溶液适量，加流动相稀释制成浓度（μg/mL）分别为150.0、100.0、50.0、25.0、10.0、5.0系列溶液。按“1.2.1”项下色谱条件，各取10 μL进样测定，以峰面积（y）为纵坐标、进样浓度（x）为横坐标，绘制标准曲线，拟合得回归方程y= 2596.6x+0.4212，R=1.0000（n=6）。结果表明：Selexipag在5～150.0 μg/mL浓度范围内，线性关系良好，满足含量测定及有关物质检查的线性要求。

2.4定量限与检测限

按“1.2.1”项下色谱条件，配制Selexipag低浓度对照品溶液，逐步稀释后，取10 μL注入高效液相色谱仪，按照信噪比10：1测得其定量限为0.080μg/mL，按照信噪比3：1测得其检测限为0.030μg/mL。

2.5精密度

精密量取供试品溶液加流动相稀释制成浓度为1.0 μg/mL的溶液。按“1.2.1”项下色谱条件，连续进样6次，测定峰面积，主成分峰面积的RSD为0.083%，相关物质峰面积的RSD为1.6%。表明进样精密度良好。

2.6加样回收率

量取“1.2.3”项下含量测定用供试品溶液9份，每份10 mL，按其浓度的80%、100%、120%分别加入Selexipag对照品各3份，按“1.2.1”项下色谱条件进样，测得平均加样回收率为100.2%，RSD为0.61%。

2.7含量测定

量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪测定；另取对照品溶液，同法测定。按外标法计算供试品中Selexipag的含量。按“1.2.1”项下色谱条件对3批次供试品进行含量测定，测定结果分别为99.49%，99.67%和99.56%。

2.8有关物质的测定

调节仪器灵敏度，分别量取有关物质检查用供试品溶液及对照溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分Selexipag峰保留时间的3倍。按“1.2.1”项下色谱条件对3批次供试品进行有关物质检查，结果分别为0.12%，0.09%和0.11%。

3　结论

建立测定Selexipag含量和有关物质的HPLC法。色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱（4.6mm×200mm，5μm）；流动相：0.1mol/L磷酸氢二钠溶液（磷酸调节pH至7.2）一乙腈（75：25）；流速为1.0mL/min；检测波长为251nm；柱温为30℃；进样量为10μL。此法用于检测Selexipag含量及有关物操作灵敏、快速、简便、准确。

［1］夏训明.美国FDA批准Uptravi（selexipag）片剂治疗肺动脉高压，广东药学院学报，2016年01期，35页

［2］美国FDA批准治疗肺动脉高压药物Selexipag上市，中国执业药师，2016年03期，54页

［3］刘永贵，赵丽嘉，肖桂芝等.Selexipag，现代药物与临床，2010年06期，469-471页

马慧丽（1981-），女，河北省石家庄市人，工程师，主要从事医药研发、知识产权方面工作。