总丹参酮中丹参酮ⅡA的提取分离

周少丽（陕西能源职业技术学院化学工程系，陕西咸阳712000）



总丹参酮中丹参酮ⅡA的提取分离

周少丽
（陕西能源职业技术学院化学工程系，陕西咸阳712000）

摘要：目的：以丹参酮ⅡA含量为跟踪指标，建立一个适合工厂化生产的丹参酮ⅡA分离纯化工艺。方法：先对提取溶剂、提取方法、提取溶剂用量和提取时间进行比较筛选，再利用硅胶柱层析进行分离纯化。结果：先用60倍的甲醇超声提取2.5h，再进过硅胶柱层析，以氯仿：石油醚（4∶1）为洗脱剂的提取纯化方法为最佳的工厂化生产工艺。结论：该工艺不仅提取率高，收率较高、成本低、合理，而且简便、实用。

关键词：丹参酮ⅡA；提取；柱层析

唇形科植物丹参［1］Salvia miltior- rhiza Bge为多年草本植物。可改善心脏功能、调节组织的修复与再生、用于治疗丹参治疗冠心病心绞痛、心肌梗塞、减轻慢性肝炎和早期肝硬化症状、治疗由于心血不足所致的心悸、失眠等［2-4］。

丹参中含有两大类物质：脂溶性物质、水溶性物质，脂溶性物质为其主要成份［5］，它主要包含以下4个单体：丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB、隐丹参酮。丹参酮ⅡA（TanshinoneⅡA）：异名丹参醌ⅡA，C19H18O3，M=294.33，樱红色针状结晶（甲醇），熔点209～210℃。

丹参的主要药理成分是丹参酮ⅡA，但以前主要注重丹参中化学成分和其药理作用的研究，对工艺流程的研究较少，鉴于丹参酮ⅡA的良好的药理作用，对其进行大规模的工业生产已经成为一种必然的要求。由于丹参酮ⅡA遇光、热等易变质的特性［6］，要对其进行大量而又稳定的工业生产较为困难，本实验就是针对这一状况进行的，通过实验可以生产出纯品丹参酮ⅡA，为丹参制剂的生产打下基础。

1　实验部分

1.1原料、试剂与仪器

丹参酮粗粉（含丹参酮ⅡA27%西安鸿生生物技术有限公司）；

丹参酮ⅡA标样（含量为95%中国药品生物制品检定所）；

甲醇、乙酸乙酯等试剂（AR）；薄层层析硅胶GF254；柱层析硅胶（青岛裕民源硅胶试剂厂）；薄层板自制（0.5%CMC铺板）；滤纸（杭州新华滤纸厂）。

高效液相色谱仪（美国Spectra physics公司）；高效液相色谱仪；色谱泵SP1000，色谱柱（ODS，5μm，4.6mm×220mm），积分仪SP4290，紫外检测器SP100。

1.2色谱条件

色谱柱：C18ODS（4.6mm×220mm，5μm）；流动相为：甲醇∶水（85∶15）；柱温：30℃；检测波长：270nm；流速：0.8mL·min-1。

1.3公式计算

HPLC检测丹参酮ⅡA含量并计算溶出率。

式中溶出率（%）：溶出的丹参酮ⅡA占原来总丹参酮中丹参酮ⅡA的比例；Sn/So（%）：所测物的峰面积跟标样的峰面积的比值。

2　各因素对丹参酮ⅡA含量的影响

2.1标样制取

准确称取标样0.0035g，先稀释2倍，再取1mL放入10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至10mL，其浓度为0.175mg·mL-1。将其放入冰箱中，以后每次都以此标样为标准。

2.2溶剂的选择

分别向5个三角瓶中称取5.0g丹参酮粗粉，向每个三角瓶中分别加入100mL氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，超声提取1h，静置；取其上清液1mL，再用相应溶剂稀释30倍，过滤；取上清液测其中丹参酮ⅡA的含量，确定最佳溶剂。

表1　不同溶剂的检测结果Tab.1 Test results of different solvent

由表1可以看出，甲醇是比较合适的溶剂。氯仿提取的溶出率虽较高，但是提取物中丹参酮ⅡA含量增加太少，氯仿没有选择性的将所有物质都提取了出来，故不适合；而乙醇提取物中丹参酮ⅡA的含量虽较高，但溶出率太低，也不适合；其余二者对丹参酮ⅡA提取的相对含量和溶出率均不如甲醇好，故甲醇是较为理想的提取溶剂。

2.3提取方法的选择

分别向2个三角瓶中加入2.5g丹参酮粗粉和100mL溶剂甲醇，各自采用超声常温提取1h和常温搅拌提取1h，后静置；取其清液用甲醇稀释30倍，过滤，取上清液测其中丹参酮ⅡA的含量，确定最佳提取方法。

表2　不同提取方法的检测结果Tab.2 Test results of different extraction method

由表2可以看出，超声提取的甲醇溶出物中丹参酮ⅡA的含量和溶出率均高于搅拌提取，故超声常温提取是比较合适的。

2.4溶剂用量的选择

向八个三角瓶中分别加入2.5g丹参酮粗粉，后依次加入25、50、75、100、125、150、175、200mL甲醇，利用超声提取1h，静置；取其清液用甲醇稀释20倍，过滤，取上清液测其中丹参酮ⅡA的含量，确定最佳溶剂用量。

图1　溶剂用量对丹参酮ⅡA含量的影响Fig.1 Influence of solvent dosage on tanshinoneⅡA content

因为当溶剂用量继续增多时，提取物的含量和溶出率和60倍量是相差不大；故用60倍量的溶剂提取是最为合适的。

2.4提取时间的选择

向8个三角瓶中分别加入2.5g丹参酮粗粉，后分别加入150mL甲醇，采用超声常温提取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0h，静置；取其清液用甲醇稀释20倍，过滤，取上清液测其中丹参酮ⅡA的含量，确定最佳提取时间。

图2　提取时间的对丹参酮ⅡA含量的影响Fig.2 Influence of extraction time on tanshinoneⅡA content

因为当时间继续增加时，提取物的溶出率和2.5h时相差不大；但含量相对减少，故时间不合适，提取时间为2.5h时，故提取2.5h是较为合适的。

3　上柱分离纯化工艺的确定

（1）取2.5g丹参酮粗粉用60倍量的甲醇超声提取2.5h，提取液浓缩，拌样上硅胶柱，洗脱剂为氯仿-石油醚（4∶1），用每50mL收集，浓缩点板，展开剂为环己烷-乙酸乙酯（4∶1）根据点板合并洗脱液得a1、a2、a33个馏份，浓缩，称重，测定丹参酮ⅡA含量，并计算收率。

表3　一次柱分离检测结果Tab.3 Test results of once column separation

（2）将含量高的流份a2用氯仿溶解后继续上柱，洗脱液为氯仿-石油醚（4∶1），收集洗脱液，展开剂为环己烷-乙酸乙酯（3∶1），进行TLC，根据点板合并洗脱液，收集流份b1、流份b2、流份b3，称重，测含量，计算收率。

表4　二次柱分离检测结果Tab.4 Test results of twice column separation

由表4得出，流份b2的含量最高，且收集量也大，溶出率也较高，故选流份b2进行下一步的重结晶。

（3）将含量高的流份b2用适量的甲醇热溶解，重结晶，称重，测含量，计算收率。

表5　重结晶结果Tab.5 Recrystallization results

由表5可见：经重结晶后，得到了含量为94.0765%的丹参酮ⅡA。

图3　重结晶产物高效液相图谱Fig.3 The HPLC atlas of Recrystallization product

4　结论

（1）以甲醇为提取剂，溶剂/溶质为60，超声常温2.5h，为丹参酮ⅡA的最佳提取工艺；

（2）根据工艺分析结果确定丹参酮ⅡA的较优工艺生产路线为60倍量甲醇常温超声提取2.5h，后以氯仿-石油醚（4∶1）为洗脱液进行柱色谱分离，收集中间流份，并继续以氯仿-石油醚（4∶1）为洗脱液进行柱色谱分离，收集中间流分，后经甲醇热解，重结晶，得到含量为94.0765%的丹参酮ⅡA。

参考文献

［1］云南省植物研究所，南京药学院.中国植物志［M］.科学出版社，2004.66：145- 146.

［2］李欣梅，刘玉莹.浅谈丹参的药理及临床应用［J］.黑龙江医药. 2004，17（5）：379- 382.

［3］冯俊，陈华文.参酮ⅡA通过调节miR- 133水平对慢性心力衰竭心肌重构的影响［J］.现代中西医结合杂志，2016，25（8）：803- 806.

［4］冯俊，陈华文，李树生.参酮ⅡA对慢性心力衰竭心肌重构的影响及其机制研究［J］.中国中医急症，2015，24（12）：2069- 2071.

［5］李倩，刘伟，罗祖良，等.一测多评法测定丹参中丹参酮Ⅱ_A、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、二氢丹参酮Ⅰ的含量［J］.中国中药杂志，2012，37（6）：824- 827.

［6］刘梅，夏鑫华.丹参酮ⅡA的化学稳定性研究［J］.中药材，2010，33（4）：606- 609.

化工设备

Extraction and purification of tashinon from salvia miltiorrhiza Bge

ZHOU Shao-li
（Dept. of Chemical engineering，Shaanxi Energy Institute，Xianyang 712000，China）

Abstract：Take the salvia miltiorrhiza alkone II A content as the track target，a separation purification craft which is suitable to the factorization production of the TanshinoneⅡA was established. The withdraws solvent，method，solvent amount and time was compared and selected，then using the silicagel column chromatographic analysis to carry on the separation purification. 60 times methyl alcohol supersonic extracted 2.5h first，then entered the silicagel column chromatographic analysis，by chloroform-Benzine（3∶1）for elutes the medicinal preparation to withdraw the purification method for the best factorization production craft. This craft has high extraction rate，and high yield，low cost，Moreover simple and practical

Key words：tanshinoneⅡA；withdraws；column chromatographic analysis

中图分类号：TQ461

文献标识码：A

DOI：10.16247/j.cnki.23-1171/tq. 20160676

收稿日期：2016- 03- 31

作者简介：周少丽（1983-），女，硕士，讲师，2008年硕士毕业于沈阳理工大学应用化学专业，现主要有机化学研究及教学工作。