金银花提取物对大肠杆菌体外抑菌试验

胡立磊，郭永刚，樊克锋

（1河南医学高等专科学校，河南郑州451191；2河南牧业经济学院,河南郑州450011）

金银花提取物对大肠杆菌体外抑菌试验

胡立磊1，郭永刚2，樊克锋2

（1河南医学高等专科学校，河南郑州451191；2河南牧业经济学院,河南郑州450011）

根据传统中医理论，选用金银花提取物为试验对象，利用试管二倍稀释法测定其对标准株和临床分离株大肠杆菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果显示，金银花提取物对标准株和2株临床分离株大肠杆菌的MIC值分别为15.7mg/mL、62.5mg/mL和31.3mg/mL，MBC值分别为31.3mg/mL、62.5mg/mL和62.5mg/mL。说明本试验所制金银花提取物对大肠杆菌有较好的抗菌作用。

金银花提取物；MIC；MBC

金银花是中医常用的具有代表性的清热解毒中药，具有抗菌、消炎、解热、免疫调节等多方面的药理学作用。大肠杆菌病是临床常见病，多表现为急性腹泻、肠道外感染等，目前对该病的防治还主要使用抗生素以及化学合成抗菌药物，随着目前这些药物耐药性问题的突显，研究应用中药治疗大肠杆菌病有重要的现实意义[1-3]。本研究根据传统中医理论，进行金银花提取物对大肠杆菌的体外抑菌试验，旨在为临床合理使用中药防治大肠杆菌病提供参考。

1 材料与方法

1.1 菌种 大肠杆菌标准菌株ATCC25922，临床分离株大肠杆菌2株，由新乡医学院微生物实验室分离鉴定保存。

1.2 药物 金银花（购自安徽亳州中药材市场）。

1.3 培养基 营养肉汤培养基 （加入微量酚红）、普通琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基。

1.4 金银花提取物的制备 取金银花至于恒温干燥箱50℃干燥24h，取干燥后金银花粉碎后过60目标准筛，准确称量粉碎后金银花20g，加入70%乙醇 50mL，60℃水浴 4h；600W超声提取 10min，加入200mL沸腾的蒸馏水，搅拌提取10min后过滤，收集滤液，重复过滤一次，合并滤液；60℃水浴、索氏回流提取器回流提取2h，60℃水浴真空旋转蒸发至20mL，所得提取物1mL相当于1g生药。115℃、15min高压灭菌，4℃冰箱保存备用。

1.5 菌液制备 将分离保存的大肠杆菌接种于伊红美兰琼脂培养基，37℃培养20h，选择典型菌落接种于营养肉汤培养基中，37℃培养24h后，采用平板计数法进行菌落计数，将菌液稀释至浊度为1x108cfu/mL备用。

1.6 MIC、MBC测定 采用试管二倍稀释法，向灭菌试管中加入营养肉汤培养基1mL，依次编号，在第1管中加入药液1mL，混匀后吸取1mL至第2管，依次类推至第9管，弃去最后吸取的1mL，然后于每管中加入0.1mL浓度稀释至1x106cfu/mL菌液，第10管加入菌液不含药液作为阳性对照，第11管只加营养肉汤作为阴性对照，标准菌株和临床分离株依次分别测定最小抑菌浓度。第1至9管药物浓度分别为500、250、125、62.5、31.3、15.7、7.8、3.9、1.5mg/mL，37℃培 养24h，观察结果。以培养物透明，不显红色的药物浓度为本药物的MIC。从该试管中取培养物0.01mL接种到普通琼脂培养基上，37℃培养24h，以菌落数少于5个视为无细菌生长，以无细菌生长的药物最低浓度作为本药物的MBC。为减少误差，本试验重复3次，取2次结果相近的值作为最终值。

2 结果

金银花提取物对标准菌株和临床分离株大肠杆菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别见表1和表2。

表1 受试药物对大肠杆菌的MIC

表2 受试药物对大肠杆菌的MBC

注：“+”表示有菌生长；“-”表示无菌生长

由表1可知，本试验所用金银花提取物对标准株和2株临床分离株大肠杆菌的MIC值分别为 15.7mg/mL、62.5mg/mL和 31.3mg/mL；由表 2可知，金银花提取物对标准株和2株临床分离株大肠杆菌的MBC值分别为31.3mg/mL、62.5mg/mL和 62.5mg/mL。

3 讨论

现代中医学研究表明金银花中多种药用成分均有抗菌作用，如黄酮类物质和绿原酸等。本试验结果也证实所制金银花提取物对大肠杆菌有明显的抗菌作用，这与其他学者的报道基本一致[4-6]。试验中药物对临床分离株的MIC和MBC均大于标准菌株，这可能与临床分离株对抗菌药物已产生一定耐受作用有关。综上所述，本研究可为临床使用中药治疗大肠杆菌病提供参考。

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[3]陈明光，刘倩.中药金银花的药用成分和药理作用[J]．北方医学，2013，15（10）：219-220．

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S853.74

B

1003-8655（2016）05-0022-02

2014年河南省医学教育教学改革与研究项目（WJLX2014041）