泉州市洛江区规模化猪场伪狂犬野毒感染情况调查

庄培德

(泉州市洛江区河市畜牧兽医站，福建 泉州 362011)

泉州市洛江区规模化猪场伪狂犬野毒感染情况调查

庄培德

(泉州市洛江区河市畜牧兽医站，福建 泉州 362011)

摘要：为掌握泉州市洛江区规模化猪场伪狂犬野毒感染情况，采集15个规模化猪场745份血清样品，运用ELISA方法检测伪狂犬野毒感染抗体(gE抗体)。结果显示，洛江区规模化猪场伪狂犬野毒感染gE抗体阳性率为17.32%、场阳性率为80%，经产母猪、后备母猪、哺乳仔猪、保育仔猪和育肥猪gE抗体阳性率在6.67%～20.6%，各乡镇规模化猪场gE抗体阳性率在5%～22.29%，表明洛江区规模化猪场不同程度存在伪狂犬野毒感染，伪狂犬病防控和净化形势仍然严峻。

关键词：伪狂犬病毒；gE抗体 ；ELISA

猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的高度接触性、急性传染病。PRV对不同年龄的猪危害不同，仔猪主要表现神经症状，感染率和发病率可达100%，种猪感染主要表现为繁殖障碍；成年猪呈隐性感染，但可长期带毒、排毒，成为猪群中最危险的传染源。我国自1947年首次报道该病以来，许多生猪生产大省如广西等均有发现本病的流行,福建部分地市、县(市、区)猪场猪群也不同程度发生伪狂犬野毒感染，给养猪业造成极大威胁。为掌握泉州市洛江区部分养殖密集区域的规模化猪场伪狂犬野毒感染情况，以便制定有效防控措施，选取15个规模化猪场采集血清样品，开展猪伪狂犬病的血清学调查，现将结果报告如下：

1材料与方法

1.1血清来源

采集泉州市洛江区15个规模化猪场猪血样共745份，按常规方法分离血清，置-20℃冰箱保存备用。

1.2试剂与仪器

HerdChek PRV gE-ELISA抗体检测试剂盒，购于北京爱德士元亨生物科技有限公司，芬兰雷勃Finnpipette移液枪及Wellwsah-4MK2洗板机、北京普朗有限公司DNM-9602酶标仪，恒温水浴锅，离心机。

1.3操作方法

将待检血清和HerdChek PRV gE-ELISA抗体检测试剂盒恢复至室温，用样品稀释液将待检血清稀释2倍(如：100 μL待检血清加到100μL样品稀释液)，取100μL加到ELISA板孔内，按照试剂盒使用说明书操作，设阴性对照和阳性对照。

1.4结果判定

阴性对照平均OD650值减去阳性对照平均OD650值大于或等于0.3，检测结果判定有效。通过计算每个样品的S/N值(待检样品OD650值/阳性对照平均OD650值)判定PRV gE抗体的有无，若S/N值≤0.6，待检样品判定为PRV gE抗体阳性；若0.60.7，待检样品判定为PRV gE抗体阴性。若有1个猪场血清样品检测判定为PRV gE抗体阳性，则该猪场判定为猪伪狂犬野毒感染阳性场。

2试验结果

2.1洛江区规模化猪场伪狂犬野毒抗体检测结果

运用HerdChek PRV gE-ELISA抗体检测试剂盒检测洛江区15个规模化猪场745份血清样品，其中，gE抗体阳性血清129份，阳性率17.32%。gE抗体阳性猪场12个，阳性率为80%(表1)。结果表明，洛江区规模化猪场猪群感染伪狂犬野毒情况较为普遍。

2.2洛江区规模猪场伪狂犬病流行区域分布

根据HerdChek PRV gE-ELISA抗体检测结果，对全区(洛江区辖2街道3镇1乡，其中2个街道全境为畜禽禁止养殖区)规模化猪场PRV野毒感染情况进行分析，结果显示，全区4个乡镇规模化猪场均检出gE抗体，PRV野毒感染率在5%～22.29%，其中，马甲镇规模化猪场PRV野毒感染率最高，达到22.29%(表2)。结果表明，洛江区各乡镇规模化猪场均不同程度感染PRV野毒。

表1　洛江区规模化猪场伪狂犬野毒抗体检测结果

表2　洛江区规模猪场伪狂犬野毒感染区域分布

2.3 洛江区规模化场猪群伪狂犬野毒抗体检测结果

根据HerdChek PRV gE-ELISA抗体检测结果，对全区规模化猪场不同阶段猪群PRV野毒感染情况进行分析，结果表明，经产母猪、后备母猪、哺乳仔猪、保育仔猪和育肥猪均不同程度感染伪狂犬野毒，感染率在6.67%～20.6%。

表3洛江区规模化猪场不同猪群伪狂犬

野毒抗体检测结果

猪群样品总数/份阳性样品数/份样品阳性率%经产母猪3988220.6后备母猪1262217.46哺乳仔猪1031514.56保育仔猪6046.67育肥猪58610.34合计745129-

3讨论

3.1试验方法选择

近年来，福建省部分地区规模化猪场均存在伪狂犬野毒感染，伪狂犬病的控制和净化仍然面临严峻形势，要想逐步控制和消灭该病，在使用弱毒疫苗免疫的同时，还要逐步排查与及时淘汰野毒感染猪，以实现净化伪狂犬病目标。本次调查采集血清样品的规模化猪场均注射伪狂犬病毒gE基因缺失苗，经该疫苗免疫的猪群将产生缺少gE基因编码的糖蛋白抗体，一旦猪群感染伪狂犬野毒，猪体则会产生针对PRV编码所有蛋白的抗体(含gE基因编码的糖蛋白抗体)，因此，基因缺失苗所产生的抗体就可与野毒抗体相区别。本次调查使用的HerdChek PRV gE-ELISA抗体检测试剂盒，酶标抗体是针对gE基因编码糖蛋白的单克隆抗体，与PRV野毒抗体结合具有灵敏度高、特异性强的特点，可准确鉴别出野毒抗体，操作方法易学易懂，适合基层畜牧兽医部门临床样品PRV野毒感染的大批量检测。虽然目前也有顾阳和吕素芳等报道建立了PRV野毒的PCR检测方法，但该方法适用于需要的检测材料是分离出的病毒或者临床剖检病料，比较适合临床病例的鉴别诊断，且PCR检测方法要求工作人员具备较高的实验室操作业务技能和完善的检测设施，基层畜牧兽医部门人员独立开展这项工作较为困难。因此，本试验采用阻断ELISA检测猪血清的gE抗体，以评估泉州市洛江区规模化猪场伪狂犬野毒感染情况，为控制和净化该病提供科学依据。

3.2各乡镇伪狂犬野毒感染情况分析

从洛江区各乡镇规模化猪场gE抗体阳性率的调查情况来看，各乡镇规模化猪场gE抗体阳性率显示接种疫苗虽然可使伪狂犬病的发生率和猪只死亡率大大降低，但不能完全阻止猪只感染和排毒，结果表明，洛江区大部分规模化猪场并没有彻底根除此病，部分免疫猪只仍然存在排毒现象，严重影响猪群的生长和繁殖性能，分析其原因可能是：河市镇、马甲镇、罗溪镇和虹山乡生猪存栏量分别占全区的30.5%、49.9%、12.2%和7.4%，4个乡镇母猪存栏量在50～1 000头之间，各规模场的生猪饲养设施设备、伪狂犬病的防控意识、措施和水平差异较大，比如，①部分规模化猪场实施的疫苗免疫程序不合理，猪群PRV抗体水平参差不齐，抗体水平低的猪只难以抵抗野毒感染；②部分规模化程度小的猪场，没有条件培育后备种猪，在外引种更新种猪未实施严格的检疫、隔离措施，就与本场猪群混养，存在隐性带毒猪群，在应激条件下持续向外排毒；③个别乡镇如马甲镇生猪养殖密度明显高于其它乡镇，生猪养殖过程中引种、产品流通频繁，使伪狂犬病的防控更加困难；等等，这些因素都与各乡镇感染伪狂犬野毒且感染率存在差异密切相关。

3.3不同阶段猪群感染伪狂犬野毒情况分析

从不同阶段猪群gE抗体阳性率分布情况来看，经产母猪、后备母猪、哺乳仔猪、保育仔猪和育肥猪血清中均检出gE抗体，说明不同年龄阶段猪群对伪狂犬野毒均易感。在猪场中伪狂犬病毒主要通过已感染猪排毒传染给健康猪，妊娠母猪感染病毒可通过胎盘感染胎儿，一旦潜伏或隐性感染后备母猪筛选进入生产环节，便成为伪狂犬病毒的终生宿主，在外界应激或免疫抑制性因素(蓝耳病病毒、圆环病毒等)的诱发下可持续性排毒，在猪场中形成循环感染，这些因素都可能是哺乳、保育仔猪和育肥猪感染野毒的原因。另外，据孙泉云报道，生产母猪传递给仔猪的PR母源抗体至5-6周龄降至临界线左右，仔猪(特别是哺乳仔猪) gE抗体阳性可能是母源抗体所致，不一定是感染野毒株而产生。

4结论

本次调查表明，洛江区规模化猪场不同程度存在伪狂犬野毒感染，该病的防控和净化仍任重而道远。因此，引进野毒阴性的后备母猪，定期开展猪群特别是经产母猪和后备母猪伪狂犬野毒抗体检测，针对检测结果选择质量好的伪狂犬病毒基因缺失苗并实施合理的免疫接种方案，以及淘汰带毒猪只，是推进伪狂犬病控制和净化的关键措施之一。但面对当前复杂的疾病形势，仍需落实综合防控措施，如规范引种程序、引进的种猪要及时隔离和开展血清学检测，定期灭鼠，定期对猪体、猪舍、用具、周围环境进行消毒，做好常规疾病的免疫预防，等等，从而为猪场净化伪狂犬病创造条件，保障猪群健康。

参考文献:

[1]蔡宝祥.家畜传染病学[M].北京:中国农业出版社,2006:207-209.

[2]殷震,刘景华.动物病毒学[M].北京:科学出版社,1997:44-45

[3]胡杰,磨龙春,黄夏,等.猪伪狂犬病gpI抗体鉴别ELISA方法在猪伪狂犬病控制与净化中的效果分析[J].广西农业科学,2008,39(5):678-680．

[4]何奇松,胡巧云,冯淑萍,等.广西部分规模种猪场猪伪狂犬病病毒gE抗体调查[J].广西畜牧兽医,2014.30,(4):193-195.

[5]陈如敬,王隆柏,魏宏,等.福建省部分地区规模化猪场伪狂犬病感染情况调查[J].养猪,2010(1):38-40.

[6]杨小燕,戴爱玲,李晓华.闽西地区猪伪狂犬野毒株感染的血清学调查[J].安徽农业大学学报,2008,35(4):540-543.

[7]顾阳,高晓云,程琨,等.鉴别猪伪狂犬病病毒强毒与疫苗毒双重PCR检测方法的建立[J].华北农学报,2014,29(2):94-97.

[8]吕素芳,郭广君,李峰,等.SYBR Green I荧光定量PCR检测猪伪狂犬病毒gE基因缺失病毒株方法的建立[J].中国预防兽医学报,2014,36(2):116-120.

[9]孙泉云,夏炉明,卢军.上海地区规模猪场伪狂犬病感染状况的调查[J].畜禽业,2014(5):64-65.

Investigation on Scale Swine Farmers Pseudorabies Virus Infection of Luojiang District in Quanzhou City

ZHUANG Pei-de

(HeshiAnimalHusbandryandVeterinaryStationofLuojiangDistrict,QuanzhouFujian362011)

Abstract:To investigate scale swine farmers pseudorabies virus infection of Luojiang district in Quanzhou city, 745 serum samples from 15 scale swine farmers immunized with gene deleted pseudorabies vaccine were analyzed for pseudorabies virus antibody (gE-antibody) by ELISA. The results showed that the positive rate of gE-antibody was 17.32% and the positive rate of scale swine farmers was 80%. The positive rate of gE-antibody for sow, backup sow, suckling piglet, nurse pig and fattening pig ranged from 6.67%～20.6%. The positive rate of gE-antibody for scale swine farmers in each township ranged from 5%～22.29%. The results suggested that scale swine farmers partly infected pseudorabies virus in Luojiang district, and the controlling and eradicating pseudorabies virus was facing severe situation.

Key words:pseudorabies virus;gE-antibody; ELISA

[收稿日期]2015-10-18

[作者简介]庄培德 (1981-)，男，福建泉州人，硕士，兽医师，主要从事动物疾病预防控制工作。

[中图分类号]S 852.651

[文献标识码]A

[文章编号]1004-6704(2016)02-0088-03