芪桂益脉灵对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠模型环氧化酶-2的影响

徐京育，赵　龙，张超越

芪桂益脉灵对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠模型环氧化酶-2的影响

徐京育1，赵龙2，张超越2

1.黑龙江中医药大学( 哈尔滨 150040)；2.黑龙江中医药大学研究生

摘要：目的探讨芪桂益脉灵(QGYML)对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织环氧化酶-2(COX-2)的影响。方法取SD大鼠50只，随机分为5组，空白组(10只)灌服生理盐水后不做任何处理，假手术组(10只)灌服生理盐水后，开胸暴露左冠状动脉，穿线但不作结扎，其余30只大鼠分别分成单纯缺血再灌注组、芪桂益脉灵低剂量组和芪桂益脉灵高剂量组。并且结扎冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死(AMI)模型，造模成功后，分别给生理盐水、QGYML大小剂量(即1.2 g/kg和0.6 g/kg)，每日清晨空腹灌胃给药一次，连续灌服7 d。腹主动脉采血5 mL，离心后取上层血清，采用双抗体夹心法酶联免疫测定COX-2的表达。结果单纯缺血再灌注组COX-2水平明显高于空白组和假手术组(P<0.05)，芪桂益脉灵组与单纯缺血再灌注组相比，大鼠血清中COX-2表达减少，其中高剂量组的效果更加显著。 结论COX-2 在心肌急性缺血再灌注中均有高水平表达，提示炎症参与了急性心肌缺血再灌注，芪桂益脉灵可降低 COX-2 的蛋白表达水平，减轻缺血再灌注心肌炎症反应，对心肌起保护作用。

关键词：心肌缺血再灌注；芪桂益脉灵；环氧合酶-2；心肌炎症；大鼠

近年来有研究表明，急性心肌梗死时通过抑制环氧化酶-2(COX-2)，可以抑制炎症反应，保护心肌，改善心功能；环氧化酶-2是花生四烯酸代谢的最主要限速酶，又被成为炎症诱导酶[1]。COX-2抑制剂能够增加冠脉血流量，改善心肌供血，预防心肌细胞凋亡，减缓心室重构等，具有保护心肌作用[2-3]。本实验探讨急性心肌缺血再灌注大鼠模型血清中COX-2含量的变化，探讨芪桂益脉灵对心肌缺血再灌注损伤心肌的保护作用和作用机制。

1材料与方法

1.1动物与分组健康雄性SD大鼠50只，体重200 g～250 g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。随机分为5组，每组10只，最终每组入组8只。空白组(每天清晨空腹灌服生理盐水2 mL)、假手术组(每天清晨空腹灌服生理盐水2 mL)、单纯缺血再灌注(IR)组(每天清晨空腹灌服生理盐水2 mL)、芪桂益脉灵低剂量组(每天清晨空腹灌服芪桂益脉灵0.6 g/kg 2 mL)、芪桂益脉灵高剂量组(每天清晨空腹灌服芪桂益脉灵1.2 g/kg 2 mL)。

1.2主要试剂大鼠环氧化酶-2酶联免疫分析试剂盒，北京诚林生物科技有限公司。

1.3主要设备及仪器心电机(ECG-1150型，上海光电医用电子仪器有限公司)；小动物呼吸机(DH-150浙江大学医学仪器厂生产)；电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；洗板机(318型，上海三科仪器有限公司)；电热恒温水槽(DK-8B型)上海精宏实验设备有限公司；全自动酶标仪(ELX808，美国蒙特州威诺斯基市高地园区Tigan街100号)；低温冰箱(日本三洋公司)；低温离心机(日本三洋公司)。

1.4模型制备大鼠用20%乌拉坦(1 g/kg)腹腔麻醉。麻醉后心电监测，气管切开，行人工呼吸。暴露左颈总动脉，插动脉套管以检测血压。于胸骨左缘3、4肋间打开胸腔及心包膜，暴露心脏；在肺动脉圆锥与左心耳下缘之间，经左冠状动脉下浅层心肌穿一丝线，线的两端穿进一条直径2 cm的聚乙烯塑料管，其末端用一小动脉夹固定。通过打开和夹紧动脉夹造成冠状动脉的阻断与再通。连续记录冠状动脉结扎前后及再通后Ⅱ导心电图。观察室速(VT)、室颤(VF)的起始时间和持续时间。空白组(开胸，不穿线，不结扎)；假手术组(开胸、只穿线但不结扎)；单纯缺血再灌注组末次灌药后1 h行左主冠状动脉结扎60 min，再灌注180 min；芪桂益脉灵高、低剂量组同单纯缺血再灌注组。模型成功标准：心电示S-T段呈近似单线曲线拱背向上抬高； 并见反复灌注后出现心律失常。

1.5COX-2的检测 实验结束后，腹主动脉采血5 mL，离心后取上层血清按照试剂盒说明测定指标。

2结果

假手术组与空白组相比，大鼠血清COX-2含量有轻度增加 (P<0.05)，开胸穿线会造成血清中COX-2的轻度升高；冠脉结扎组与空白组对比，大鼠血清中的COX-2显著升高(P<0.05)，心肌缺血再灌注损伤可使COX-2表达增加，也表明建模成功。冠脉结扎组与假手术组相比，血清中COX-2含量增加(P<0.05)，冠脉结扎能够引起心肌组织中炎症因子的释放。灌药组与单纯缺血再灌注组相比，血清中COX-2的含量明显降低(P<0.05 )，表明芪桂益脉灵能够降低损伤心肌COX-2含量，对损伤心肌有保护作用。芪桂益脉灵高剂量组与低剂量组比较，血清中COX-2含量明显下降(P<0.05)，高剂量组更能降低受损心肌COX-2的表达，对其保护作用更佳。详见表1。

表1　芪桂益脉灵对急性心肌缺血再灌注

3讨论

正常情况下，环氧化酶-2在大多数组织并不表达，主要在缺氧、NO、TNF、内毒素等诱导下表达活跃[4-6]。有报道指出，COX-2参与了动脉粥样硬化病变的炎症过程。释放的细胞因子可以诱导COX-2，导致炎症反应的增强[7]。心肌缺血再灌注损伤可导致心肌细胞的坏死、心肌的炎症以及心功能下降等病理改变，在缺血再灌注损伤时环氧化酶-2表达增加[8]。

本实验结果显示，假手术组COX-2与空白组有轻度升高，说明开胸穿线会造成血清中COX-2的轻度升高，但不结扎不能引起COX-2的明显改变；冠脉结扎组能明显引起血清COX-2的升高，造成心肌中炎症因子的释放，说明造模成功；芪桂益脉灵组COX-2的表达明显降低，且高剂量组比低剂量组效果更加显著。由此表明，芪桂益脉灵具有抑制急性心肌缺血再灌注损伤的作用，有效降低大鼠心肌细胞中炎症因子COX-2的含量，保护损伤心肌，减轻炎症反应，这对于临床上急性心肌缺血及心梗的发现与治疗具有重要的指导意义。

芪桂益脉灵由黄芪、桂枝、三七、党参等药物组成，方中黄芪益气补心，桂枝温阳通经，二药配合补心气通心脉为主药，党参助黄芪补气养心行气活血作用，三七有活血化瘀养血行血通脉之功，该方通补兼施，标本兼顾，恰中心肌缺血再灌注损伤的病机。

芪桂益脉灵能够降低心肌缺血再灌注后大鼠血清中COX-2的含量，有效减轻炎症，芪桂益脉灵在急性心肌缺血中具有心肌保护作用。

参考文献：

[1]陈永丰，王峰，徐京育，等.芪桂益脉灵预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡基因Fas及Bcl-2表达的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志，2009，7(1)：48-49.

[2]孙琳琳，徐京育，赵志成，等.芪桂益脉灵对大鼠心肌缺血再灌注损伤模型一氧化氮的影响及其心肌保护作用机制探讨[J].中国社区医师，2008(7)：104-105.

[3]王峰，陈永丰，吴玉萍，等.芪桂益脉灵对缺血再灌注型大鼠心肌细胞蛋白激酶C的影响[J].中国社区医师，2008，8(11)：405.

[4]陈波，郑军，李书霖，等.抗凝护心Ⅱ号对大鼠心肌缺血再灌注损伤血清cTn-T含量的影响[J].中医药学报，2011，39(4)：47-48.

[5]徐京育，张万峰，谷瑞民，等.芪桂益脉灵对豚鼠心室细胞膜内整流K离子通道的影响[J].中国中医药科技，2007，14(6)：428.

[6]程芳洲，马业新，余细球，等．环氧化酶-2表达在单磷酰酯A诱导的大鼠延迟性心肌保护中的作用[J]．中华老年医学杂志，2006，25(2)：137-140．

[7]叶新，汤德生，王昀，等．温阳活血方对AS大鼠血管炎症反应因子的影响[J]．同济大学学报(医学版)，2009，30(4)：45-49．

[8]董海正，陈莹莹，朱立，等．COX-2和HO-l参与缓激肽诱发的晚期心肌保护作用[J]．浙江大学学报(医学版)，2007，36(1)：13-20．

(本文编辑王雅洁)

Effect of Qigui Yimailing Decoction on Cox-2 in Rat Model with Acute Myocardial Ischemia-reperfusion Injury

Xu Jingyu，Zhao Long，Zhang Chaoyue

Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine，Harbin 150040，Heilongjiang，China

Abstract：Objective To explore the effect Qigui Yimailing decoction(QYD) on Cox-2 in rat myocardial tissue with acute myocardial ischemia reperfusion.MethodsFifty SD male rats were randomly divided into 5 groups and blank control group(n=10) after 7 days physiological saline irrigation，don’t do any processingthe sham operation group(n=10) after 7 days physiological saline irrigationtake the thoracotomy to exposeleft coronary artery of the rats，threading but do not make ligation，the rest of 30 rats were divided into pure ischemia reperfusion group，QYD low dose group and QYD high dose group，and acute myocardial infarction (AMI) models were caused by ligation of the left anterior descending branch of the coronary artery，after the success of the building，to the physiological saline，QYD (high and small dose，1.2 g/kg and 0.6 g/kg) respectively，whose irrigation served 7 days in a row during the morning.Abdominal aorta in pursuance of 5 mL，after centrifugation，get the upper serum，with double antibody sandwich method enzyme-linked immunoassay to determine the expression of cox-2.ResultsThe cox-2 of the pure ischemia reperfusion group were significantly higher than the blank control group’s and the sham operation group’s(P<0.05).Compared with pure ischemia reperfusion group，cox-2 overflow of QYD group significantly reduced in rats serum，and the effect of high dose group was more significant.Conclusion Cox-2 has a high level expression in acute myocardial ischemia reperfusion，which prompted inflammation is involved in acute myocardial ischemia reperfusion，QYD can decrease the cox-2 protein expression level and reduce the pure ischemia reperfusion group (I/R) myocardial inflammation，to protect myocardium.

Key words：myocardial ischemia-reperfusion；Qigui Yimailing decoction；COX-2；myocardial inflammation；rat

基金项目：黑龙江省自然科学基金项目(No.H201326)

通讯作者：张超越，E-mail：2834027714@qq.com

中图分类号：R285.5R542.2

文献标识码：A

doi：10.3969/j.issn.1672-1349.2016.10.008

文章编号：1672-1349(2016)10-1083-03

Corresponding Author：Zhang Chaoyue

(收稿日期：2015-08-03)