2 513例抗核抗体与抗核抗体谱检测结果对比分析

蒲泽晏，胥国强，李祥坤，李　凤，黄雪梅

(遂宁市中心医院检验科，四川遂宁 629000)

·论著·

2 513例抗核抗体与抗核抗体谱检测结果对比分析

蒲泽晏，胥国强，李祥坤，李凤，黄雪梅

(遂宁市中心医院检验科，四川遂宁 629000)

摘要:目的分析本实验室抗核抗体(ANA)与抗核抗体谱(ANAs)15项联合检测的结果，并探讨两者之间的关系。方法分别用间接免疫荧光法(IIF)和免疫印迹法(IBT)检测患者ANA和ANAs，判断其ANA滴度、荧光模型和ANAs结果，并对ANA和ANAs检测结果进行对比分析。结果471例ANA阳性患者标本中，颗粒型161例，均质型110例，胞质型96例、核仁型37例、着丝点型28例，其他型合计39例；滴度为1∶100者196例，占41.61%(196/471)，其中ANAs阳性53例，占27.04%(53/196)；滴度为1∶320者123例，占26.11%(123/471)，其中ANAs阳性67例，占54.47%(67/123)；滴度为1∶1 000者152例，占32.27%(152/471)，其中ANAs阳性132例，占86.84%(132/152)；2 042例ANA阴性标本中45例ANAs检测阳性，阳性率为2.2%(45/2042)；高滴度ANA患者血清中ANAs的阳性率高于低滴度(χ2=123.132,P<0.05)。结论不同滴度的ANA与ANAs之间有一定的关系，如果以ANA进行过筛，阳性再做ANAs会漏检部分患者，建议IIF和IBT联合应用，防止风湿病的漏诊。

关键词:抗核抗体；抗核抗体谱；间接免疫荧光法；免疫印迹法

抗核抗体(ANA)是抗细胞核内成分的抗体，因为细胞核包含多种成分，所以有抗核内多种物质的抗体谱即抗核抗体谱(ANAs)，ANA属于自身抗体。自身抗体的检测对风湿病的诊断和鉴别诊断具有重要价值，尤其是结缔组织病(CTD)的早期诊断至为重要[1]。目前国内外检测ANA的方法主要有间接免疫荧光法(IIF)和酶联免疫吸附法(ELISA)，广泛用于风湿病的筛查[2-4]。国内外很多实验室为了节省检测成本，只将ANA阳性的标本才做特异性ANAs检测。还有一些实验室仅用自动化仪器检测特异性的ANAs、不作ANA的IIF或免疫印迹法(IBT)筛查。本文通过对2 513例ANA与15种抗体的对比分析，探讨ANA与ANAs的关系，明确ANA与ANAs检测的意义及能否相互代替。

1资料与方法

1.1一般资料选择2014年10月1日至2015年1月22日本院门诊及住院患者2 513例，其中男849例，年龄1～94岁，平均48.94岁；女1 664例，年龄10个月至89岁，平均45.80岁。

1.2标本采集抽取清晨空腹静脉血3 mL，静置30 min后，离心分离血清(3 000 r/min离心10 min)。当日不能及时检测的标本置于-20 ℃冰箱保存。

1.3检测方法ANA采用IIF法检测，试剂盒为欧蒙医学实验诊断有限公司生产，每次试验均设阴、阳对照，操作严格按照试剂盒提供的说明书进行，荧光显微镜观察结果，细胞或组织内出现特异性荧光判为阳性。测定3个滴度，1∶100、1∶320、1∶1 000;抗体滴度大于等于1∶100为阳性。ANAs采用IBT法检测，试剂盒为欧蒙医学实验诊断股份公司生产，可检测抗-nRNP、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白和AMA M2等15种不同抗原IgG类抗体。严格按照试剂盒说明书进行操作及判定结果。

1.4统计学处理采用SPSS18.0统计软件进行统计学分析，率的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1ANA阳性标本的核型分析2 513份血样中ANA 阳性共471例，阳性率为18.74%(471/2 513)。荧光模式颗粒型占34.18%(161/471)，均质型占23.35%(110/471)，胞质型占20.38%(96/471)，核仁型占7.86%(37/471)，着丝点型5.94%(28/471)，其他核型占8.28%(39/471)，具有两种或两种以上核型的占6.16%(29/471)。见表1。

表1　　471例ANA阳性标本中不同荧光核型的比例

2.2不同荧光滴度ANA标本中ANAs的阳性率比较471例ANA阳性，滴度为1∶100者占41.61%(196/471)，其中ANAs阳性53例，占27.04%；滴度为1∶320者占26.11%(123/471)，其中ANAs阳性67例，占54.47%；滴度为1∶1 000者占32.27%(152/471)，其中ANAs阳性132例，占86.84%(132/152)。高滴度ANA患者血清中ANAs的阳性率高于低滴度，且差异具有统计学意义(χ2=123.132,P<0.05)。

2.32 513例标本中ANAs阳性结果分析2 513份血样ANAs 检测阳性297例，阳性率为11.82%(297/2 513)。2 042例ANA阴性标本中45例ANAs检测阳性，阳性率为2.20%，其中44例为单项阳性，1例为2项阳性。

3讨论

ANA是CTD 重要的血清学标志，IIF是检测ANA的金标准[5],是筛查自身抗体的主要方法[6-7]，是目前应用最广泛的自身抗体筛查试验。本组资料IIF法检测的 2 513 份血样中ANA阳性471例，阳性率为18.74%(471/2 513)，低于郭大文等[6]报道的52.00%，但高于高仕萍等[4]报道的6.25%，可能与受检查人群、地区、医生对风湿病的认知度有关。ANA 荧光模式本组以颗粒型占34.18%(161/471)，均质型占23.35%(110/471)，胞质型占20.38%(96/471)，这3型占77.91%，与郭大文等[6]和陈燚琼等[8]报道存在一定的差异，郭大文等[6]报道颗粒型占43.48%，陈燚琼等[8]报道颗粒型占62.94%，ANA 荧光模式的差异可能与ANA成分复杂、检查对象差异、人为分型误差等因素有关。本研究471例阳性中ANA滴度与ANAs的阳性率有一定的关系，本组ANAs/ANA 的比值随ANA 滴度的升高而增大，与郭大文等[6]报道的“ANAs 的阳性率随ANA 滴度增大而升高”一致。

本组资料显示ANA阳性率高于ANAs,与相关报道一致[2-4,8]。ANA阴性标本中ANAs 检测阳性率为2.20%，低于胡朝军等[3]报道的10.17%,高于郭大文等[6]报道的0.50%。高仕萍等[4]报道2 207份血样中ANAs阳性、ANA阴性者仅3例。赖永才等[9]报道132例抗ENA抗体阳性病例ANA的阳性率为93.90%，有6.10%的ANA阴性患者抗ENA抗体阳性。从文献上看各家报道结果差异较大，分析原因可能与选取病例的数量和诊断的可靠程度、医院的专科特色、医生和检验人员的技术水平、使用仪器试剂的厂家等的差异有关。由于ANA检测的IIF方法是手工实验，检测过程中影响因素较多，检测结果最显著的问题是重复性差[10]，这可能也是各实验室报道差异较大的原因，因此，人员教育、素质提高和质量控制是保障质量工作的核心[11-12]。

笔者认为ANA与ANAs的检测各家报道结果差异较大，目前尚缺乏多中心大样本的研究，没有形成“专家共识”，期望今后有“专家共识”或其他相关规范性文件或操作出台。根据作者对2 513份血样的对比分析认为：由于ANA与ANAs敏感性、特异性有差异,如果ANA阴性标本不做ANAs会导致部分患者漏诊,两者联合检测在CTD 诊断中具有一定互补性，可减少漏诊或误诊。

参考文献

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Comparative analysis of antinuclear antibody and antinuclear antibody spectrum for 2 513 samples

PuZeyan,XuGuoqiang,LiXiangkun,LiFeng,HuangXuemei

(DepartmentofClinicalLaboratory,SuiningCentralHospital,Suining,Sichuan629000，China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the results of combined detection of the 15 indexes of antinuclear antibodies (ANA) and antinuclear antibody spectrum (ANAs) in our laboratory and to investigate the correlation between them.MethodsThe ANA fluorescence pattern and the ANA titer were detected by the indirect immunofluorescence(IIF) and the ANAs was detected by immunoblotting(IBT).The results of the ANA and ANAs were analyzed.ResultsAmong the 471 samples of ANA positive,161 cases were speckled pattern,110 cases were homogeneous pattern,96 cases were cytoplasmic pattern,37 cases were nucleolar pattern,28 cases were centromere pattern,and 39 cases were the other pattern.The positive rate of ANA titer of 1∶100 was 41.61%(196/471) and positive rate of ANAs was 27.04%(53/196).The positive rate of ANA titer of 1∶320 was 26.11%(123/471) and positive rate of ANAs was 54.47%(67/123).The positive rate of ANA titer of 1∶1 000 was 32.27%(152/471) and positive rate of ANAs was 86.84%(132/152).45 cases were detected with the ANAs positive of in 2 042 ANA negative samples,the positive rate were 2.2%(45/2 042).The positive rate of ANAs in high ANA titer samples was higher than that in low ANA titer samples(χ2=123.132,P<0.05).ConclusionThe ANA titer and ANAs has certain relationship.If ANA is regarded as positive to test ANAs,a small proportion of patients will miss detection.Thus,the combination detection of IIF and IBT is suggested to avoid the misdiagnosis of rheumatic.

Key words:antinuclear antibody;antinuclear antibodies spectrum;indirect immunofluorescence;immunoblotting

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.018

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)10-1346-02

(收稿日期：2015-11-15)

作者简介：刘艺，男，检验技师，主要从事临床检验方向的研究。△通讯作者，E-mail：zxm18@sohu.com。