芬苯达唑微晶体在猪体内的药物动力学试验

吴海港，叶兆伟，李　华，左春生，张　飞（.信阳农林学院，河南信阳464000；.华中农业大学，湖北武汉437000）



芬苯达唑微晶体在猪体内的药物动力学试验

吴海港1，叶兆伟1，李华2，左春生1，张飞2
（1.信阳农林学院，河南信阳464000；2.华中农业大学，湖北武汉437000）

摘要：本试验以芬苯达唑（FBZ）原料药为对照，考察芬苯达唑微晶体对猪口服给药后FBZ的药动学特征。在0.02～2 μg/mL的线性关系良好，相关系数为0.9990。FBZ在猪血浆中的回收率均在70%以上，日内变异系数小于5%，日间变异系数小于10%。芬苯达唑原料组和芬苯达唑微晶体组的主要药物动力学参数为：吸收半衰期（T1/2α）分别为1.65 h 和1.07 h，消除半衰期（T1/2β）分别为28.28 h和33.92 h；药时曲线下面积（AUC）分别为29.09 μg·h/mL和41.12 μg·h/ mL。经统计学分析得知，T1/2α、Tp、T1/2β、AUC差异显著（P＜0.05）。表明芬苯达唑微晶体能够改变芬苯达唑在动物体内的药动学特征，提高芬苯达唑的吸收速度，延长药物在体内的有效作用时间。

关键词：芬苯达唑；微晶体；猪；药物动力学中图分类号：R 96

文献标志码：A

文章编号：0529- 6005（2016）03- 0110- 03

芬苯达唑（fenhendazole，FBZ）为白色或类白色粉末，不溶于水，可溶于二甲亚砜和冰醋酸。由于该药驱虫谱广、毒性小、安全范围大，是目前国内外驱除动物蠕虫的首选药物之一。但由于该药物难溶于水，而且生物利用度也较低，造成药物的浪费，因此开发芬苯达唑新制剂具有重要意义。本文对芬苯达唑微晶体口服给药后在猪体内的药代动力学进行研究，并与普通芬苯达唑比较，为芬苯达唑微晶体临床用药提供依据。

1　材料与方法

1.1材料芬苯达唑原料药：批号60308045，含量99.5%，购自浙江国邦药业有限公司；芬苯达唑微晶体：信阳农林学院药理实验室自制，粒径为700～1 200 nm。乙腈、甲醇、氨水等均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。

1.2仪器Agilent1 100型高效液相色谱仪：由美国Agilent公司；SPE真空歧管装置：天津市恒奥科技发展有限公司；C18 SPE柱：Waters中国有限公司。

试验动物：健康杜长大仔猪20头，体重32±2 kg，购自武汉市江夏绿源种猪场。试验开始前饲养一周，试验期间按常规饲养，自由饮水和采食，饲料为不含抗菌药物的全价饲料。

1.3方法

1.3.1标准储备液配制精密称取芬苯达唑原料药50.2 mg置于100 mL棕色容量瓶中，加入乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，即得到浓度为500 μg/mL的标准贮备液，避光置于4℃冰箱中保存备用。

1.3.2动物分组与给药将每头猪称重后，随机分为原料药组和微晶体组，每组10头。样品采集前，每组动物分别以10 mg/kg体重剂量，灌服给药。

1.3.3样品采集给药后于0.083、0.15、0.5、1、2、4、6、8、12、24、48、72、120 h分别对每头猪采血，每次采血量约5 mL，3 000 r/min离心10 min，分离血浆，于-20℃保存，待测。

1.3.4样品的处理室温下自然解冻血浆样品，准确吸取1 mL血浆于15 mL离心管中，加入0.25 mL氨溶液（0.1 mol/L，pH值=10），混匀1 min，分别用5 mL甲醇活化和5 mL三蒸水平衡SPE柱，加入上述处理过的血浆样品，用5 mL 5%NH3·H2O洗脱，弃洗脱液，用2.5 mL甲酸甲醇溶液洗脱。收集洗脱液，在45℃水浴中用N2吹干，用250 μL流动相溶解，漩涡10 s，静置15 min，取20 μL进样分析。

色谱条件：色谱柱：Agilent SB-C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.02 mol/L磷酸（v：v= 40∶60）；紫外检测波长：295 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：35℃；进样量：20 μL。

1.4方法学验证

1.4.1 FBZ标准工作曲线的建立取6份1 mL空白猪血浆，配成含FBZ浓度依次为0.02、0.1、0.2、0.5、1、2 μg/mL的血浆样品。按照1.2.4的处理方法进行处理，进行HPLC分析。以测得的FBZ的峰面积（A）为横坐标，血浆中FBZ的浓度（C）为纵坐标，绘制标准工作曲线，求出相关系数（r）。

1.4.2准确度和精密度考察取1 mL空白猪血浆，配成含FBZ浓度分别为2、0.2 μg/mL和0.02 μg/mL的血浆样品，按照1.2.4处理方法处理并进行HPLC分析，连续测5 d，考察日内和日间变异系数。

1.4.3数据处理与分析药物动力学模型拟合用3p97药动学软件分析，药时曲线图采用Excel软件绘制，利用SPSS统计学软件比较药动学参数，评价芬苯达唑微晶体的体内药动学特征。

2　结果

2.1FBZ在血浆中的色谱行为在本试验所建立的色谱条件下获得的FBZ色谱图见图1～3，色谱峰对称性良好，在药物的出峰时间没有杂质峰干扰，FBZ的出峰时间为约9.72 min。

图1　空白血浆色谱图

图2　空白血浆中添加FBZ （0.5 μg/mL）的色谱图

图3　血浆中FBZ检测限（0.01 μg/mL）的色谱图

2.2FBZ在血浆中的标准工作曲线和线性范围

本试验所建立的FBZ在血浆中的标准工作曲线如图4所示，在0.02～2 μg/mL线性关系良好，回归方程为C=0.0047A-0.1397，相关系数r为0.9990。

图4　FBZ在血浆中的标准工作曲线

2.3准确度和精密度考察结果FBZ的回收率、日内变异系数和日间变异系数具体见表1。FBZ在血浆中回收率均在70%以上，日内变异系数和日间变异系数均小于10%。

表1　空白血浆中添加FBZ的准确度和精密度结果（n=5）

2.4灵敏度考察结果FBZ在猪血浆中的检测限为0.01 μg/mL，定量限为0.02 μg/mL。

2.5FBZ微晶体药物动力学数据微晶体组和原料组的药时曲线见图5，经3p97药动学软件房室模型的模拟，其中有吸收二室模型的AIC和WSS最小。所得的药物动力学参数见表2。

图5　以10 mg/kg体重的剂量给药后的血浆中FBZ的浓度-时间曲线

表2　微晶体组和原料组在猪体内的药物动力学参数（n=5）

3　讨论

以相同的剂量对猪分别口服芬苯达唑原料和芬苯达唑微晶体后，芬苯达唑微晶体的达峰时间较短对照药物芬苯达唑，而达峰浓度却高于后者，说明芬苯达唑微晶体在猪体内吸收速度较快。芬苯达唑微晶体组与芬苯达唑原料组血浆中分布半衰期（T1/2ka）分别为10.57 h和10.99 h。说明其在猪体内分布迅速广泛。从药动参数也可看出，芬苯达唑微晶体的AUC高于芬苯达唑，这表明芬苯达唑微晶体在猪体内生物利用度更高。此外，本试验T1/2ka、AUC值与马［1］、猪［2-3］中报道的不一致，这可能与实验动物，给药剂量等有关。

芬苯达唑微晶体的消除半衰期为33.92 h，该结果略偏高文献报道［3］，说明它的消除较缓慢，在体内存留时间较长，可能是改变了芬苯达唑的粒径大小使药物在吸收与消除时间上有所改变。

本试验中所用芬苯达唑微晶体的达峰浓度、AUC及体内存留时间显著提高，与芬苯达唑原料相比，具有较大的优越性。

参考文献：

［1］McKellar Q A，Gokbulut C，Benchaoui H A.Muzandu K M.Fenbendazole pharmacokinetics，metabolism and potentiation in horses［J］.Drug Metabolism and Disposition，2002（30）：1230-1239.

［2］Petersen M B，Friis C . Pharmacokinetics of fenbendazole following intravenous and oral administration to pigs［J］.American Journal of Veterinary Rrsearch，2000，61（5）：573-576.

［3］Lanusse C E，Prichard R K . Relationship between pharmacological properties and clinical efficacy of ruminant anthelmintics［J］. Veterinary Parasitology，1993（49）：123-158.

Pharmacokinetics of Fenbendazolenanocrystals in pigs WU Hai-gang1，YE Zhao-wei1，LI Hua2，ZUO Chun-sheng1，ZHANG Fei2

（1.Xinyang College Of Agricultural And Forestry，Xinyang 464000，China；2.Huazhong Agricultural University，Wuhan 437000，China）

Abstract：The present study was designed to investigate the pharmacokinetics of Fenbendazole nanocrystals in pigs with administered orally as the reference preparation .The correlation of calibration curve was good，and the correlation coefficient was 0.9990.The average extraction recovery was more than 70%of FBZ from plasma.The intra-day coefficient of variations was less than 5%，and the inter-day coefficient of variations was less than 10%.Pigs were administered orally with a single dose of 10 mg/ kg body weight of Fenbendazole nanocrystals and Fenbendazole in the Fenbendazole nanocrystals and Fenbendazole group，respectively.The absorption half-lives（T1/2α）of Fenbendazole nanocrystals and Fenbendazole were 1.07 and 1.65 h，respectively.The elimination half-lives（T1/2β）were 33.92 and 28.28 h，The areas under the concentration-time curve（AUC）were 41.12 and 29.09 μg·h/mL，respectively.Statistical analysis showed that these follow parameters were significantly different between the Fenbendazole nanocrystals and Fenbendazole（P＜0.05）. The pharmacokinetics study indicated that Fenbendazole nanocrystals equally showed rapid absorption，high bioavailability and slow elimination.

Key words：Fenbendazole；nanocrystals；pigs；pharmacokinetics

收稿日期：2014-05-15

作者简介：吴海港（1982-），男，讲师，硕士，主要从事兽医药理学研究及教学，E-mail：haigang413@126.com