高效液相色谱法测定理气复胃口服液中大黄成分的含量

王 婷，童荣生，邹 静，帅小翠，李晋奇

(四川省医学科学院·四川省人民医院药学部，四川 成都 610072)

高效液相色谱法测定理气复胃口服液中大黄成分的含量

王 婷，童荣生，邹 静，帅小翠，李晋奇

(四川省医学科学院·四川省人民医院药学部，四川 成都 610072)

目的 建立理气复胃口服液中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量测定方法，以控制该产品的质量。方法 采用高效液相色谱法，使用Phenomenex Gemini C18柱(250 mm× 4.6 mm，5 μm，)，甲醇-乙腈-0.01mol/L NaH2PO4(pH1.5)(2∶5∶3.5，v//v)为流动相，流速1.0 ml/min，检测波长435 nm。结果 芦荟大黄酸、大黄酸、大黄素、大黄酚的浓度为0.8～16.0 μg/ml，大黄素甲醚的浓度为0.4～8.0 μg/ml，与其峰面积有良好的线性关系(r=0.9999)，芦荟大黄酸、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚RSD分别是1.72%、1.13%、1.62%、2.04%、1.33%；芦荟大黄酸、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚平均加样回收率分别为98.87%、101.43%、100.63%、100.89%和102.41%。结论 该方法简单易行，准确可靠，可用于理气复胃口服液的质量控制。

理气复胃口服液；芦荟大黄素；大黄酸；大黄素；大黄酚；大黄素甲醚；高效液相色谱法

理气复胃口服液是由木香、陈皮、大黄、白术、枳实等中药组成，具有行气导滞，降湿消痞的功能。临床上用于治疗功能性消化不良具有较好的疗效，也可用于手术后胃肠功能的恢复。现以芦荟大黄素(Aloeemodin)、大黄素(Emodin)、大黄酸(Rhein)、大黄酚(Chrysophanol)和大黄素甲醚(Physcion)为指标成分，建立了理气复胃口服液中芦荟大黄酸、大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚的高效液相色谱(HPLC)测定法，为该产品的质量控制提供定量评价方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 Waters 2690高效液相色谱仪，包括中央控制器，高压泵，全自动进样器，996二极管阵列检测器，Empower Chromatography Manager 色谱数据工作站(美国Waters 公司)。BP 211D型十万分之一电子分析天平(德国Sartorius公司)。大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号110756-200210)，大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号110796-200208)，大黄酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号110757-200206)，芦荟大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号110795-200806)，大黄素甲醚(中国药品生物制品检定所，批号110758-200611)。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。理气复胃口服液(四川省人民医院·四川省医学科学院·川港康复中心，批号：141022、150120、150202)。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件 分析柱Phenomenex Gemini C18(250 mm × 4.6 mm，5 μm，110A)，保护柱Security Guard Cartridges Gemini C18(4 mm×3.0 mm)，柱温35 ℃；流动相为甲醇-乙腈-0.01mol/L，NaHP2O4(pH1.5)(2∶5∶3.5)，流速1 ml/min，紫外检测波长435 nm。

1.2.2 储备液的制备 分别精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄酚7.06 mg、2.77 mg、2.09 mg和2.19 mg，以甲醇溶解并定容至50 ml即得各成分储备液，精密称取大黄素甲醚2.89 mg，以甲醇溶解并定容至100 ml即得大黄素甲醚储备液，置4 ℃冰箱避光储存。

1.2.3 工作液的制备 精密大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素和大黄素甲醚储备液，加甲醇溶解并稀释成每1 ml约含大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素各4 μg，大黄素甲醚2 μg的混合工作溶液，置4 ℃冰箱避光储存备用。

1.2.4 标准曲线的制备 精密吸取混合对照品储备液适量，用甲醇分别稀释至7个不同浓度，在1.2.1项色谱条件下，分别精密吸取系列浓度的混合对照品溶液10 μl，注入色谱仪，依次进样得系列对照品溶液，取其峰面积面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行回归分析。1.2.5 供试品溶液的制备 精密量取混匀的供试品溶液5 ml，置25 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。精密量取稀释液5 ml，置圆底烧瓶中，加入8%盐酸10 ml，混匀，再加入三氯甲烷10 ml，混匀，置沸水浴上回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤烧瓶，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷液提取3次，每次10 ml，合并三氯甲烷提取液，置37 ℃水浴上氮气挥干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，混匀，以微孔滤膜(0.425 μm)过滤后进样10 μl。

1.2.6 重复性试验 取同一批供试品(批号150120)按1.2.5项下制备方法平行制备6份样品，按1.2.1项下色谱条件进行测定，测定对照品峰面积积分值，按外标法计算。

1.2.7 精密度试验 按1.2.5项下制备方法，精密量取供试品溶液10 μl，按1.2.1项下色谱条件进行测定，测定对照品峰面积积分值，按外标法计算。

1.2.8 样品稳定性考察 取1.2.6项下的供试品1份，室温放置0、2、4、6、8、12、24 h后按1.2.1项下色谱条件进行测定，分别进样，同时取混合对照品溶液进样测定，按外标峰面积法测定其含量，比较24 h室温放置后含量测定的结果。

1.2.9 加样回收率试验 参照文献[1]，精密量取9份已知含量的同一批号供试品溶液(批号150120)，以高、中、低三浓度水平，每浓度水平三份样品，各加入一定量的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚以及大黄素甲醚对照品，按照1.2.5项下方法处理，按1.2.1项下色谱条件进样10 μl，同时取相应浓度的对照品溶液10 μl 进样测定，按外标峰面积法测定其含量。

1.2.10 样品测定 取样品3批(141022、150120、150202)，按照1.2.5项下方法制备供试品溶液，同时取混合对照品溶液按1.2.1项下色谱条件进行测定，按外标峰面积法测定其含量。

2 结果

2.1 色谱图 样品在对照品溶液中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚相应峰位置，均有色谱峰出现，且分离度均大于1.5，空白供试品在芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚相应峰位置均无杂质干扰。对照品溶液、样品及空白供试品色谱图见图1。

图1 五种成分色谱图 a：对照品溶液；b：样品；c：空白供试品；1：芦荟大黄素；2：大黄酸； 3：大黄素； 4：大黄酚；5：大黄素甲醚

2.2 线性关系 芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚在浓度0.8～16.0 μg/ml以及大黄素甲醚在浓度0.4～8.0 μg/ml线性关系良好，线性回归方程见表1。

2.3 重复性试验 芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的RSD分别为分别为2.55%、2.93%、2.33%、3.23%、3.99%。

2.4 精密度试验 芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的RSD分别为分别为1.72%、1.13%、1.62%、2.04%、1.33%。

表1 各成分回归方程

2.5 样品稳定性试验 芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的RSD分别为分别为2.25%、2.45%、2.60%、1.95%及2.25%，可见供试品室温放置24 h较稳定。

2.6 加样回收率试验 供试品的平均回收率为芦荟大黄素98.87%、大黄酸101.43%、大黄素100.63%、大黄酚100.89%及大黄素甲醚102.41%，见表2。

表2 各组分平均加样回收率测定

2.7 样品含量测定 取不同批号(141022、150120、150202)的理气复胃口服液，按1.2.5项下测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚五种成分含量，见表3。

表3 理气复胃口服液含量测定 (μg/ml)

3 讨论

理气复胃口服液为我医院自制制剂，主要功效为行气导滞，降湿消痞，该药中大黄作为重要成分，具有主要的功效，且测定结果显示成分稳定。该药中另一主要成分木香，经测定发现其挥发性很强，测定及其不稳定。故以大黄含量作为此口服液质量控制的标准。

大黄中成分的提取，既往有加热回流提取和超声提取法[2，3]，经比较加热回流提取率较高。在提取液的选择上，文献报道[4]预处理过程用乙醚提取，在实验中，我们发现用三氯甲烷提取回收率较乙醚有很大提高。因此，本研究选择三氯甲烷作为提取液。

据文献[5]用紫外光谱分别对5种蒽醌类成分进行全波长扫描，大黄的5种成分在254和435 nm附近均有吸收。经比较，在254 nm下测定理气复胃口服液中大黄5种成分，杂质峰干扰测定；以435 nm为测定波长则无干扰，因此选择435 nm作为检测波长。

理气复胃作为医院自制制剂，在临床应用20余年，用于治疗功能性消化不良有很好的疗效，曾将同时测定制剂中大黄素、大黄酚2种蒽醌的含量作为控制该产品的质量标准[6]。本试验经改进后，采用反相高效液相色潽法同时测定理气复胃口服液中大黄5种蒽醌的含量，经方法学验证表明，其精密度、稳定性、加样回收率和重复性均能满足定量的要求，故可用于理气复胃口服液的质量控制。

[1] 陈瑾.应用高效液相色谱法测定清热利胆合剂中绿原酸的含量分析[J].实用医院临床杂志，2015，9(12)：139-140.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2015年版一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015.

[3] 谭晓，周文杰，李复林.”一测多评”法同步测定大黄中五种蒽醌类成分的含量[J].首都食品与医药，2015，9：78-79.

[4] 童荣生.HPLC法同时测定理气复胃口服液中木香内酯和去氢木香内酯的含量[J].中国药师2006，9(8)：106-108.

[5] 何素琴，欧阳吉德，肖琳.HPLC法测定胆石通胶囊中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量[J].西北药学杂志，2011，26(3)：180-182.

[6] 吴正中，童荣生，席庆，等.HPLC测定理气复胃口服液中大黄素和大黄酚的含量[J].华西药学杂志，2002，17(1)：61-62.

R917

A

1672-6170(2016)04-0111-03

2016-01-27；

2016-03-30)