痰热清与喜炎平注射液雾化吸入给药对大鼠呼吸系统粘膜刺激性研究

董博宇，杜守颖，李鹏跃，陆　洋，赵梦迪，杨　柳，谭　宁

北京中医药大学中药学院，北京 100102



*通信作者

痰热清与喜炎平注射液雾化吸入给药对大鼠呼吸系统粘膜刺激性研究

董博宇，杜守颖，李鹏跃，陆洋*，赵梦迪，杨柳，谭宁

北京中医药大学中药学院，北京 100102

[摘要]目的以大鼠为模型，研究雾化吸入痰热清与喜炎平注射液后，动物的行为及呼吸道各组织形态学结构的变化。方法SD雄性大鼠20只，随机平均分成5组(生理盐水组，痰热清高、低浓度组，喜炎平高、低浓度组)，各组连续给药7 d，每次给药后观察大鼠的行为活动变化。于第8天取口腔黏膜、鼻中隔粘膜、气管、左肺，制备石蜡切片，HE染色，观察形态学结构变化。结果两个高浓度组大鼠的鼻腔、眼部出血次数多于生理盐水组和对应的低浓度组(P<0.05)，且两个低浓度组大鼠的鼻腔出血次数多于生理盐水组(P<0.05)。给药组大鼠肺部有轻微水肿，颜色加深。切片观察可见给药组较对照组病变明显，且高浓度组比低浓度组更严重。结论两种中药注射液雾化吸入给药后，在大鼠整体行为活动和病理切片方面均显示出显著的刺激性。

[关键词]中药注射液；粘膜刺激性；雾化吸入；HE染色切片

0引言

雾化吸入给药是指药物以特殊装置给药，经呼吸道腔道、粘膜等发挥全身或局部作用的一种给药方式。药物吸入后，经过口腔、鼻腔、气管及支气管到达肺部，药物雾化后，粒径0.5～5 μm的药物粒子能有效吸入并沉积在肺部[1]。同时，药液也会在呼吸道的各个部位沉积，从而达到治疗效果。痰热清注射液主要由黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花、连翘提取精制而成，有清热化痰、解毒的功效[2]，用于风温肺热病痰热阻肺证、急性支气管炎等病证，是复方中药注射液的代表品种。喜炎平注射液为穿心莲内酯磺化物[3]，有清热解毒、止咳止痢的功效，用于支气管炎、扁桃体炎及细菌性痢疾等疾病，是单成分中药注射液的代表。近年来，应用这两种中药注射液雾化吸入给药治疗呼吸道感染在临床屡见不鲜，尤其在一些基层医院或诊所。有报道，痰热清和喜炎平注射液通过雾化吸入给药治疗小儿疱疹性咽峡炎、小儿支气管炎及肺炎等疾病与普通治疗方法相比均取得较好的临床疗效[4-9]。但是注射液雾化吸入是不符合用药规范的行为，而且此给药方式并没有得到系统的安全性评价。故笔者在临床用药的基础上，以大鼠为模型，对两组中药注射液雾化吸入给药的呼吸道刺激性进行初步研究。根据本实验室前期对粘膜刺激性的研究[10-11]，本文主要通过病理切片来研究中药注射液雾化吸入给药时呼吸道粘膜的刺激性。

1材料

1.1动物SPF级SD雄性大鼠，体重250～300 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号：SDXK(京)2012-0001。

1.2仪器与试药LEICA300型脱水机(德国)，LEICA EG1150H型包埋机(德国)，LEICA HI1210型展片机(德国)，LEICA RM2255型切片机(德国)，LEICA HI1220型烤片机(德国)，OLYMPUS CX21型显微镜(日本)，易创显微图像处理软件-MIE V2.0(山东易创电子有限公司)，403M型压缩空气式雾化器(上海鱼跃医疗设备有限公司)，手术剪、眼科镊等。

痰热清注射液(上海凯宝药业股份有限公司，国药准字Z20030054，批号：1411317)，喜炎平注射液(江西青峰药业有限公司，国药准字Z20026249，批号：2014111403)，0.9%氯化钠水溶液(生理盐水)(北京化工厂，批号：20130606)，10%中性福尔马林固定液(北京博奥拓科技有限公司)；HE染料(北京斯百汇生物科技有限责任公司)，石蜡(上海鼎杰生物科技有限公司)；其余试剂均为分析纯。

2方法

2.1动物分组及给药SD大鼠共20只，随机分为5组，每组4只，分别为生理盐水组、痰热清低浓度组(痰热清注射液∶生理盐水为1∶10)、痰热清高浓度组(痰热清注射液∶生理盐水为1∶1)、喜炎平低浓度组(喜炎平注射液∶生理盐水为1∶10)、喜炎平高浓度组(喜炎平注射液∶生理盐水为1∶1)。每12 h给药1次，每次雾化给药20 min，连续给药7 d。

2.2观察动物行为变化每次雾化结束后，观察大鼠鼻腔、眼部是否出血和水肿，以及动物给药过程中的依顺性。其次，观察大鼠精神状态，口鼻有无异常分泌物，以及是否出现呕吐、窒息等局部刺激反应。

2.3大鼠呼吸道情况与切片的制备给药后第8天，以10%水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主动脉放血处死大鼠。解剖各组大鼠，观察其口腔黏膜、鼻中隔粘膜、气管及肺部有无充血、出血、感染及明显泡沫样炎性渗出液等，并观察肺脏的形状、色泽、位置及有无积水等。取下口腔黏膜、鼻中隔、气管和左肺，置于10%中性福尔马林固定液中保存。进行石蜡切片的制备，并HE染色。观察各组器官形态学结构的变化。

3结果

3.1大鼠行为学观察结果各组大鼠给药初期顺应性均较差，有抵抗情绪，且给药后精神兴奋；给药中后期各组大鼠抵抗减弱，顺应性良好。痰热清高浓度组在给药后期鼻腔出现粉色泡沫状分泌物，其余各组未见异常。各组均无呕吐、窒息等情况出现。各组大鼠鼻腔与眼部出血次数见表1。

表1　各组大鼠鼻腔与眼部出血次数比较

注：*与生理盐水组比较，P<0.05；#与相应低浓度组比较，P<0.05

由表1可见，各给药组的鼻腔出血次数多于生理盐水组，差异有统计学意义(P<0.05)；且高浓度给药组的鼻腔出血次数多于低浓度组，差异有统计学意义(P<0.05)。两个低浓度组的眼部出血次数与生理盐水组比较差异无统计学意义(P>0.05)；两个高浓度组的眼部出血次数多于生理盐水组与相应的低浓度组，差异有统计学意义(P<0.05)。

3.2大鼠呼吸道情况观察结果解剖观察结果显示，生理盐水组的气管、鼻粘膜无充血、出血及感染，未见明显泡沫样炎性渗出液；口腔黏膜光滑，无颗粒、斑块和溃疡，色泽淡红并富有弹性；肺部形状、体积及颜色正常，无积水或水肿，无出血、瘀血等现象。其余各组有不同程度的损伤。见表2。

3.3大鼠病理切片观察结果

3.3.1肺部切片结果见图1。图1显示，生理盐水组肺泡壁薄而完整，无出血现象，肺泡大小适中、均匀，且肺泡及其支气管中很干净，无分泌物存在。两个低浓度组的肺泡壁明显增厚，且肺泡大小不均一，某些部位肺泡结构不明显，其中痰热清低浓度组的支气管中有少量分泌物。痰热清高浓度组肺泡壁增厚更加明显，大片区域无肺泡结构，支气管中有大量分泌物，炎症明显；喜炎平高浓度组出血较为严重，肺泡中有大量红细胞及分泌物。高浓度的损伤程度明显高于低浓度组。

3.3.2气管切片结果见图2。

表2　各组大鼠解剖观察结果

图1　肺泡切片图

图2　气管切片图

图2显示，生理盐水组气管结构清晰，上皮细胞排列整齐，柱状纤毛整齐而完整，分泌细胞大小适中，内有少量分泌物。给药组气管纤毛和上皮细胞部分脱落，高浓度组比低浓度组损伤严重。痰热清低浓度组有轻微出血现象，分泌细胞中分泌物较多；痰热清高浓度组除分泌细胞中有较多分泌物外，气管内也有分泌物存在，损伤更为明显。喜炎平低浓度组纤毛几乎全部脱落；高浓度组气管内有红细胞，说明有出血的情况。

3.3.3口腔切片结果见图3。

图3　口腔黏膜切片图

图3显示，生理盐水组口腔黏膜鳞状上皮层次界限清晰，基底层细胞排列整齐，无明显病变。给药组鳞状上皮均有不同程度增厚，其中角化层(最外层)颜色变浅，增厚明显。低浓度的两组角化层增厚不如高浓度明显，且高浓度组角化层凹凸不平，基底层细胞不整齐且有沟壑，损伤非常明显。

3.3.4鼻中隔切片结果见图4。

图4　鼻黏膜切片图

由图4可见，生理盐水组鼻中隔粘膜上皮细胞排列整齐，柱状纤毛完好无损。两个低浓度组基本表现为纤毛脱落，其中痰热清低浓度组偶见上皮细胞脱落。而两个高浓度组上皮细胞脱落明显，下层分泌细胞也有较多分泌物，可见损伤程度显著高于低浓度组与生理盐水组。

4讨论

近年来，肺部给药方式在临床上应用越来越广泛，其中西药用于雾化吸入居多，而中药没有雾化吸入剂型，故临床常直接采用中药注射剂雾化给药。本实验通过对雾化后大鼠行为状态与呼吸道粘膜切片的观察，初步评价痰热清与喜炎平注射液雾化吸入给药后的呼吸道及肺泡黏膜刺激性。

通过对大鼠模型行为特征的观察，发现给药组大鼠鼻腔与眼部出血严重，且高浓度组出血更明显。解剖结果显示，高浓度组(浓度即为常见报道的临床使用浓度)大鼠的肺部有红色斑块、气管周围有瘀血等，均说明雾化吸入两种注射液后，对大鼠的呼吸道器官造成损害。肺部、气管、口腔黏膜及鼻中隔粘膜的切片观察显示，各组大鼠相应组织均受到损伤，且高浓度组的损伤程度高于低浓度组。

综上所述，无论是复方代表(痰热清)或单个成分代表(喜炎平)，中药注射液雾化吸入给药后，对大鼠的呼吸道器官均可能造成不同程度的损伤。本研究显示，两种注射液用于雾化吸入给药均存在一定刺激性，临床应用风险较大。吸入疗法作为中医的传统治疗方法，开发新型吸入给药剂型，必须系统研究处方对呼吸道和肺泡的急慢性刺激，不宜将中药注射剂直接雾化吸入使用。

参考文献：

[1]Laube BL,Janssens HM,De Jongh FH,et al.What the pulmonary specialist should know about the new inhalation therapies.ERS/IS AM task force report[J].Eur Respir J,2011,37(6):1308-1331.

[2]唐启令,孙永旭,康爱绒,等.基于真实世界研究的痰热清注射液儿童临床应用安全性分析[J].中国医院药学杂志,2015,16:1-3.

[3]杨海民.喜炎平注射液的安全性试验[J].中国医药指南,2014,33:68.

[4]严炜.痰热清注射液雾化吸入治疗小儿疱疹性咽峡炎临床观察[J].亚太传统医药,2014,6:114.

[5]高东培.痰热清注射液雾化吸入辅助治疗小儿支气管肺炎42例疗效观察[J].中国中西医结合儿科学,2013,3:231-232.

[6]杨璐.痰热清雾化吸入治疗急性咳嗽病人的疗效观察[J].护理研究,2013,36:4153-4154.

[7]张静.喜炎平雾化吸入联合利巴韦林治疗小儿疱疹性咽峡炎随机平行对照研究[J].实用中医内科杂志,2013,11:109-110.

[8]钟明桃,毛祖娅.喜炎平注射液雾化吸入治疗小儿急性支气管炎的临床观察[J].大家健康(学术版),2014,4:212.

[9]耿红,吴明杰.喜炎平雾化吸入后拍背吸痰佐治小儿毛细支气管炎的临床观察[J].临床合理用药杂志,2012,17:70.

[10]程艳珂,郭懿望,尚可心,等.以溶解度与刺激性为指标筛选葛根素滴鼻液溶剂及增溶剂[J].中国中药杂志,2014,22:4335-4339.

[11]Ran W,Huiyun L,Shouying D,et al.Preparation of mPEG2000-PLA-modified Xingnaojing microemulsion and evaluation in mucosal irritation[J].Journal of Biomaterials Science,2014,25(9):923-942.

Study on the irritation of tanreqing and xiyanping injection by way of aerosol inhalation on respiratory mucosa of rats

DONG Bo-yu,DU Shou-ying,LI Peng-yue,LU Yan*,ZHAO Meng-di,YANG Liu,TAN Ning

(School of Chinese Pharmacy,Beijing University of TCM,Beijing 100102,China)

[Abstract]ObjectiveTo study the changes in behavior and morphology structure of respiratory tract of rats after aerosol inhalation of tanreqing and xiyanping injection.MethodsTwenty male adult SD rats were randomly divided into 5 groups (normal saline group,high and low concentration of tanreqing groups,high and low concentration of xiyanping groups).The behavior of rats was observed after aerosol inhalation.The rats were put to death,and the mouth mucosa,nasal septum mucosa,trachea and left lung were taken to produce pathological sections at 8th day after administration.ResultsThe frequency of nasal and ocular bleeding of the high concentration groups in rats was higher than those of normal saline group and the low concentration groups (P<0.05),and the frequency of the low concentration groups was higher than that of normal saline group (P<0.05).The pulmonary edema,with slight color burn,was observed in the rats of medication groups.Sliced observation showed that lesions in medication groups were more obvious than those of normal saline group,and lesions in high concentration groups were more serious than those of low concentration groups.ConclusionAerosol inhalation administration of tanreqing and xiyanping is irritating in the overall behavior activity and pathological sections of rats.

Key words：Traditional Chinese medicine injection;Mucosa irritation;Aerosol inhalation;HE stained slice

收稿日期：2015-08-11

基金项目：国家自然基金(81473363)；北京市科技新星计划(xx2015A048)

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201604004