阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者超敏血清C反应蛋白和T淋巴细胞亚群水平的变化及临床意义

林群英　吴良宁　周　敬　林国盛　林　娟　涂海健

(1莆田学院附属医院呼吸科　莆田　351100; 2福建中医药大学研究生院　福州　350122;3复旦大学附属中山医院全科医学科　上海　200032)



阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者超敏血清C反应蛋白和T淋巴细胞亚群水平的变化及临床意义

林群英1吴良宁2周敬3△林国盛1林娟1涂海健1

(1莆田学院附属医院呼吸科莆田351100;2福建中医药大学研究生院福州350122;3复旦大学附属中山医院全科医学科上海200032)

【摘要】目的评价阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征 (obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS)患者血清超敏C反应蛋白 (hypersensitive-C reactive protein,hs-CRP)和T淋巴细胞亚群 (T lymphocyte subsets,T-LS)的变化,探讨OSAHS对T-LS水平的影响及hs-CRP水平、T-LS水平与OSAHS之间的相互关系。方法选择门诊及住院的单纯OSAHS患者59例,同期健康体检者24例作为对照组,两组之间年龄和性别等构成差异均无统计学意义。所有受试者均接受连续7 h的夜间多导睡眠仪监测以判断OSAHS患者病情的严重程度;于次日清晨采集外周静脉血5 mL,测定血清中hs-CRP和T-LS水平。结果OSAHS组CD3+CD4+T细胞较对照组明显降低,差异有统计学意义 (P<0.05);而 CD3+、CD3+CD8+T细胞和CD4+/CD8+T细胞较对照组差异均无明显统计学意义 (P>0.05)。 结论OSAHS患者体内存在T-LS水平的改变,可能导致不同程度的免疫功能下降。

【关键词】阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征;T淋巴细胞亚群;超敏C反应蛋白

*This work was supported by the Natural Science Foudation of Fujian Province,China (2013J01390).

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征 (obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS)是患者夜间睡眠过程中反复出现呼吸暂停及觉醒,反复低氧血症导致患者晨起头痛、口干、白天嗜睡明显、记忆力下降,严重者可伴发心脑血管、精神神经、血液和代谢等多系统合并症,甚至可能发生夜间猝死[1]。近年来由于饮食结构的改变与不良生活方式的蔓延,人群肥胖率增高,各种类型的睡眠呼吸紊乱尤其以OSAHS发病率明显上升,来自上海的研究提示我国30岁以上成人OSAHS的患病率为3.62%[2]。T淋巴细胞亚群(T lympnocyte subsets,T-LS)是反映机体免疫功能状态的重要指标之一，OSAHS对T-LS水平的影响,目前国内外有一些报道,但意见不一,尚无定论。覃羽华等[3]研究认为T细胞参与了OSAHS的发生、发展过程,OSAHS患者机体免疫功能可能下降。影响OSAHS患者体内T-LS水平变化的因素较多,病情严重程度居于重要作用,而超敏C反应蛋白 (hypersensitive-C reactive protein,hs-CRP)作为反映OSAHS病情严重程度的重要炎症指标,有助于阐明OSAHS严重程度与其体内T-LS水平变化之间的关系。因此,本研究拟探讨OSAHS患者体内T淋巴细胞亚群水平的变化,以及OSAHS患者体内hs-CRP及T-LS水平与病情严重程度之间的相互关系。

资 料 和 方 法

研究对象OSASH组:OSASH患者59例,年龄18～69岁,平均 (46.04±13.12)岁;其中轻度20例,中度18例,重度21例;均为福建莆田学院附属医院呼吸科2012年10月至2014年5月初次确诊为单纯OSASH的门诊及住院患者,且患者均未接受任何相关的睡眠呼吸疾患的专科诊治。正常对照组:健康体检者24例,其中男21例,女3例,年龄19～70岁,平均 (48.40±16.54)岁,无夜间打鼾,经夜间7 h多导睡眠图检查不符合OSAHS诊断。所有受试者均接受相关病史询问,排除各种风湿免疫性疾病、变态反应性疾病、长期营养不良、感染性疾病、血液系统性疾病、恶性肿瘤及口服可能影响免疫系统药物的患者。行夜间多导睡眠图 (polysomnogram,PSG),监测当天禁止饮酒、咖啡、浓茶及服用镇静安眠类药物。

OSAHS疾病的诊断及分级诊断标准采用2011年1月中华医学会呼吸病学分会睡眠呼吸障碍学组制定的《阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征诊治指南 (2011年修订版)》[1]。患者入选依据为主要临床病史、专项体格检查和PSG监测结果。临床有典型的夜间睡眠打鼾伴呼吸暂停、日间嗜睡评分 (ESS评分≥9分)等症状;体格检查和/或影像学检查有上气道1个或多个部位的狭窄及阻塞,呼吸暂停低通气指数 (apnea hypopnea index,AHI)≥5次/h者可诊断为OSAHS;对于日间嗜睡不明显 (ESS评分<9分)者,AHI≥10次/h或AHI≥5/h,且存在认知功能障碍、脑血管疾病、冠心病、高血压、糖尿病等1项或1项以上合并症,均可明确OSAHS诊断。

根据AHI及最低经皮氧饱和度 (LSaO2)的不同,将OSAHS患者病情程度分为轻度、中度和重度。AHI<5,SaO2>90%为正常;AHI 5～15及SaO285%～90%为轻度OSAHS;AHI 15～30及SaO280%～85%为中度OSAHS;AHI>30及SaO2<80% 为重度OSAHS。体质指数 (body mass index,BMI)是目前国际上常用的衡量人体胖瘦程度以及是否健康的一个标准,肥胖是OSAHS发病的危险因素,与OSAHS严重程度密切相关[4]。BMI=体重 (kg)/身高 (m2),18.5～23.9为正常,24～27.9为超重,≥28为肥胖。

多导睡眠图监测所有入选研究对象均接受连续7 h的夜间PSG (澳大利亚Compumedics公司)监测,监测内容包括脑电、眼动、肌动、心电、口鼻呼吸气流、胸腹呼吸运动,所有数据经分析获得结果,用于疾病诊断及疾病严重程度的判断。

T淋巴细胞亚群水平的检测所有入院受试者于次日清晨醒后使用EDTA-K 抗凝管 (紫色帽)通过静脉穿刺以无菌方式采集血液2～3 mL,进行 T-LS分析。血样于采集后48 h内染色,染色后24 h内进行分析。将BD Multitest试剂盒溶血素用室温去离子水稀释10倍,备用。取12×75 mm管1支,编号;将20 μL的BD Multitest CD3/CD8/CD45/D4试剂移取到标记管的底部,将50 μL充分混匀的抗凝血移取到标记管底部,移取过程中避免血液污染管壁,盖上管盖,轻轻震荡、混匀,在室温环境下避光孵育15 min。其后,管内添加450 μL的BD Multitest溶血素,避免光线直射;盖上管盖并轻轻震荡、混匀,再次在室温环境下避光孵育15 min;最后,在BD Facscalibur流式细胞仪上对样本进行分析。操作步骤严格按BD试剂盒说明书进行。实验室检测的正常参考值:CD3+T细胞,55%～84%;CD3+CD4+T细胞,31%～60%;CD3+CD8+T细胞,13%～41%。

hs-CRP水平的检测所有入院受试者于次日晨起后使用分离胶促凝管 (黄色帽)采集静脉血2～3 mL,分离血清进行hs-CRP分析。使用hs-CRP检测试剂盒 (i-CHROMATMhs-CRP,免疫荧光干式定量法)在i-CHROMA Reader免疫荧光分析仪 (韩国BoditechMed Inc公司)上进行检测。

结果

临床特征比较OSAHS组与正常对照组的临床特征比较见表1。OSASH组的AHI与对照组比较,差异有统计学意义 (P<0.01)。OSASH组的LSaO2与对照组比较,差异有统计学意义 (P<0.05)。OSASH组的BMI较对照组略高,但两者差异无统计学意义;两组间性别、年龄均无明显差异 (P>0.05)。

表1　OSAHS组与正常对照组的临床特征比较

vs.the control group,(1)P<0.05;,(2)P<0.01.

T-LS水平比较OSAHS组与正常对照组T-LS水平的比较见表2。OSAHS组CD3+CD4+T细胞较对照组CD3+CD4+T细胞明显降低,且随着OSAHS疾病严重程度的增加,患者CD3+CD4+T细胞 (%)逐渐降低,差异有统计学意义 (P<0.05);CD3+T细胞所占T淋巴细胞的百分率较对照组无明显改变 (P>0.05);CD3+CD8+T细胞较对照组CD3+CD8+T细胞有所升高 (P>0.05),而CD4+/CD8+T细胞较对照组略有下降 (P>0.05),差异无统计学意义。

hs-CRP水平比较OSAHS组与正常对照组hs-CRP水平相比,发现随着OSAHS疾病严重程度的增加,hs-CRP水平随之增高 (图1)。对照组hs-CRP水平[(4.54±0.93) mg/L]与轻度OSAHS组hs-CRP水平[(5.62±1.22) mg/L]、中度OSAHS组hs-CRP水平 [(8.21±0.97) mg/L]和重度OSAHS组hs-CRP水平[(15.10±1.09) mg/L]之间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。

OSAHS患者血清hs-CRP水平与T-LS水平的关系绘制OSAHS患者血清hs-CRP水平与T-LS中的CD3+CD4+T-LS散点图(图2),发现OSAHS患者血清hs-CRP水平与该细胞亚群水平具有相关性,相关系数R2=0.713。

表2　OSAHS组与正常对照组T-LS水平的比较

vs.the control group,(1)P<0.05;,(2)P<0.01.

vs.the control group,(1)P<0.05;(2)P<0.01.

图1不同组别OSAHS患者与正常对照组间血清hs-CRP水平比较

Fig 1Comparison of hs-CRP level between different OSAHS groups and control growp

OSAHS是多种病因导致的夜间反复上气道狭窄或阻塞,出现间歇性低氧和再氧合,导致间歇性的胸腔压力急剧变化和波动、氧化应激和炎性反应、交感神经系统兴奋、内分泌紊乱及微觉醒增加等病理生理改变,严重危害全身各组织、器官功能,甚至导致全身代谢综合征。OSAHS病因复杂,既有上气道解剖上的狭窄,也有上气道组织功能上的缺陷,是多种病因综合作用的结果[5]。OSAHS的一个最重要的病理生理特征为间歇性低氧和再氧合交替出现,类似缺血再灌注过程,可诱发氧化应激和炎性反应,进而引起人体各器官组织的损害,包括免疫系统[6]。

血清hs-CRP是一个炎症指标。OSAHS作为一种系统综合征,激活炎性系统发生一系列免疫反应,释放各种炎性因子,如IL-6,IL-10,肿瘤生长因子b,核因子κb等。本研究结果显示OSAHS患者与健康对照组相比,体内hs-CRP水平显著升高,且随着疾病严重程度的增加,患者体内hs-CRP水平的升高越明显。Hartmann等[7]研究指出,OSAHS患者体内hs-CRP水平升高与血清中IL-6升高关系密切,IL-6是肝脏中调节hs-CRP水平的一个关键因子。

T淋巴细胞是体内免疫系统最为重要的免疫细胞群,正常机体的各个T-LS相互影响并发挥作用,维持机体正常的免疫功能。当T-LS的数量或比例发生改变和/或T-LS功能出现异常时,机体免疫功能出现紊乱,进而导致一系列的病理生理改变。成熟的T淋巴细胞表面均可表达CD3分子,而CD4、CD8不能同时表达于成熟的T淋巴细胞表面,故可将成熟的T淋巴细胞分为CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞两个亚群。CD4+辅助T细胞的主要功能是通过其分泌的淋巴因子,增强和扩大免疫应答过程。CD8+细胞毒T细胞可抑制B淋巴细胞和T淋巴细胞的功能,从而抑制免疫应答过程,以保持免疫功能的平衡。

近年来,许多研究发现OSAHS患者体内存在免疫功能的改变。Dyugovskaya等[8]发现,OSAHS患者体内CD8+T淋巴细胞表型和功能增强,可能与其较高的心脑血管并发症发生率相关。汤冰祥等[9]发现,重度OSAHS患者体内CD3+T淋巴细胞水平及CD4+T淋巴细胞水平无明显变化,而CD8+T淋巴细胞水平明显升高,CD4+/CD8+T淋巴细胞比例显著降低。覃羽华等[3]的研究提示,OSASH患者体内CD3+T淋巴细胞水平无明显变化,而CD8+T淋巴细胞水平明显升高,CD4+T淋巴细胞水平降低,CD4+/CD8+T淋巴细胞比例显著降低。本研究两组之间在性别比例、年龄及BMI均无显著差异。通过对受试者外周血T淋巴细胞亚群水平测定,结果显示:OSAHS组CD3+T淋巴细胞水平较对照组无明显变化,CD3+CD4+T淋巴细胞水平较对照组显著降低 (P<0.05),CD3+CD8+T淋巴细胞水平较对照组有所升高,而CD4+/CD8+T淋巴细胞较对照组略有下降。提示OSAHS患者的血T-LS变化,以CD4+T淋巴细胞减少及CD4+/CD8+T淋巴细胞降低为主,CD4+T淋巴细胞减少占优势。CD4+T淋巴细胞减少,使CD8+T淋巴细胞功能相对亢进,其抑制B淋巴细胞和T淋巴细胞功能增加,进而导致T-LS功能紊乱。

CD4+T淋巴细胞水平的增加和CD4+/CD8+T淋巴细胞比值的升高提示机体细胞免疫功能增强,而CD8+T淋巴细胞的增加和CD4+/CD8+T淋巴细胞比值的降低提示机体细胞免疫功能下降[10]。由此可见,OSAHS患者体内存在T-LS水平的变化,其免疫功能亦可能出现不同程度的下降。本研究与上述文献结果略有差异,这可能与下列因素有关:(1) 本研究选取的OSAHS患者均为初次确诊患者,其病程较短,基本属于OSAHS发病早期,而成熟的T淋巴细胞表面均可表达CD3分子,故只有长病程反复CO2潴留、酸中毒和低氧血症等病理生理改变,才有可能导致CD3改变。(2) CD3+T淋巴细胞的数量与正常对照组无明显变化,但CD8+T淋巴细胞略高于对照组,而CD4+T淋巴细胞、CD4+/CD8+T淋巴细胞均低于对照组。CD8+T淋巴细胞升高,CD4+T淋巴细胞降低,可使具有外周血成熟T淋巴细胞共同标志的CD3+T淋巴细胞无明显变化。(3) 受试者可能合并某些潜在的影响机体免疫功能的疾病。(4) 患者病情和病程差异。本研究所采用的仪器、方法与文献有所不同及病例数偏少等局限性,故尚需要进一步行多中心、大样本的研究,并对T淋巴细胞的功能进行检测。同时我们也发现OSAHS患者体内hs-CRP水平与T-LS中的CD3+CD4+淋巴细胞亚群水平之间具有相关性,提示免疫机制和炎性因子共同参与了OSAHS的病理生理变化,且两者间存在某种联系。进一步研究可能机制,将有助于全面了解OSAHS的发生、发展过程,为今后临床治疗提供实验依据。

综上所述,OSAHS患者体内存在T-LS水平及比例的变化,可能与OSAHS患者免疫功能的下降相关。其可能的原因是,由于反复间歇低氧再氧合,致体内大量氧自由基产生和炎性反应,使T淋巴细胞免疫功能受损[11],进而导致一系列疾病如感染、肿瘤等发生率升高,严重影响患者的生活质量和寿命。因此,对OSAHS患者进行合理的免疫功能调节很重要,可以通过增强抵抗力、改善通气、纠正缺氧和CO2潴留等进行调节[12]。应做到早发现、早治疗,及时干预病情的进展,预防并发症的发生;同时应注意对OSAHS患者进行外周血T-LS的检测,以协助判断机体的免疫功能及治疗效果与预后。

参考文献

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The change and clinical significance of T lymphocyte subsets andserum hypersensitive-C reactive protein levels in patients with obstructive sleep apnea hypopnea syndrome

LIN Qun-ying1,WU Liang-ning2,ZHOU Jing3△, LIN Guo-sheng1, LIN Juan1, TU Hai-jian1

(1DepartmentofRespiratoryMedicine,theAffilicatedHosipitalofPutianUniversity,Putian351100,FujianProvince,Chian;2SchoolofGraduate,FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122,FujianProvince,China;3DepartmentofGeneralPractice,ZhongshanHospital,FudanUniversity,Shanghai200032,China)

【Abstract】ObjectiveTo evaluate the change of T lymphocyte subsets and serum hypersensitive-C reactive protein (hs-CRP) level in patients obstructive sleep apnea hypopnea syndrome (OSAHS),and to explore OSAHS′s influence on the level of T lymphocyte subsets (T-LS) and the relationship among hs-CRP,level of T lymphocyte subsets and OSAHS.MethodsA total of 59 in-patients and out-patients with OSAHS was selected as the OSAHS group,24 healthy subjects were selected as control group.There was no significant differences in gender and age between these two groups.All subjects underwent 7 hours continuous nighttime polysomnography (PSG) monitoring to access their disease severity of OSAHS.The next morning,5 mL blood was collected from peripheral vein for testing the levels of hs-CRP and T-LS.ResultsCompared with control group,the level of CD3+ CD4+ T lymphocyte in OSAHS group was decreased with statistical significance,but the levels of CD3+,CD3+ CD8+ and CD4+/CD8+ T lymphocyte had no significant difference (P>0.05).ConclusionsChanges of T-LS level in OSAHS patients may lead to decline of immunologic function in different levels.

【Key words】obstructive sleep apnea hypopnea syndrome;T lymphocyte subsets;hypersensitive-C reactive protein

【中图分类号】R 562

【文献标识码】A

doi:10.3969/j.issn.1672-8467.2016.01.009

(收稿日期:2015-06-13;编辑:王蔚)

福建省自然科学基金 (2013J01390)

△Corresponding authorE-mail:dreamingkoala@126.com