祛腐生肌方促进慢性皮肤溃疡大鼠创面愈合机制研究*

2016-06-18于萌蕾黄都平彭吉才罗自通

陕西中医 2016年6期

关键词：腐生生肌肉芽

朱　颉　曹　亿　于萌蕾　黄都平　彭吉才　罗自通　曾　兵

中山大学孙逸仙纪念医院(广州 510289)

·实验研究·

祛腐生肌方促进慢性皮肤溃疡大鼠创面愈合机制研究*

朱颉曹亿于萌蕾黄都平彭吉才罗自通曾兵△

中山大学孙逸仙纪念医院(广州 510289)

摘要目的：分析祛腐生肌方对慢性皮肤溃疡大鼠创面愈合的作用机制。方法：60只SD大鼠随机分为对照组、祛腐生肌方组，每组30只，依据文献复制慢性皮肤溃疡模型，造模成功后各组每天换药1次，共计15d，观察各组用药后5d、10d、15d创面愈合率；采用ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白介素-1(IL-1)水平含量；水解法测定大鼠皮肤肉芽组织羟脯氨酸(HyP)含量。结果：祛腐生肌方组第5d创面愈合率与对照组比较，无显著差异；第10、15 d与对照组相比，均有统计学差异；与对照组比较，祛腐生肌方组第5、10d血清TNF-a、IL-1水平含量均有统计学差异；第15d与对照组相比无差异；祛腐生肌方组第5、10、15dHyP含量均高于对照组。结论：祛腐生肌方能促进慢性皮肤溃疡大鼠创面愈合，其作用机制可能与改善炎症状态、增加创面胶原蛋白，提高局部微循环有关。

主题词溃疡/中医药疗法@祛腐生肌方动物，实验大鼠

慢性皮肤溃疡是指2周以上创面未愈合的皮肤软组织缺损，是临床难治性疾病之一。本病以病程长，反复发作，治疗费用高为特点，给患者生活、工作带来严重影响[1]。祛腐生肌法是中医皮肤科的常用方法，通过局部用药，能促进创面腐烂坏死组织脱落，在局部创面形成相对洁净的微环境，促进创面愈合[2-3]，但其作用机制有待进一步研究。本课题在前期研究基础上，通过实验研究，观察祛腐生肌方对慢性皮肤溃疡大鼠创面愈合率、炎性因子、羟脯氨酸的影响。

1资料与方法

1.1实验动物SPF级SD大鼠60只，体重190±20g，购自中山大学实验动物中心。

1.2实验药物祛腐生肌方(煅炉甘石、白芷、锻龙骨、当归各20g，血竭、乳香、冰片各10g，黄芪30g)，购于本院中药房，并经中药房主管药师鉴定，将各药研极细末，混匀分装备用。生理盐水(本院药剂科提供)。

1.3实验试剂大鼠TNF-a、IL-1的ELISA检测试剂盒(批号：20130621、20130923)、HyP含量测定试剂盒(批号：20130319)，均购于上海酶联生物科技有限公司。

1.4动物造模方法参照相关文献进行[4-5]，实验前用脱毛膏将大鼠背部进行脱毛，面积约4.0cm×4.0cm。第二天用4%水合氯醛(0.4mL/100g)对大鼠进行腹腔注射麻醉，然后在脱毛区用3cm×3cm 的塑料框架蘸龙胆紫标记造模面积，无菌条件下剪去造模区皮肤，深达筋膜，并在筋膜下喷洒金黄色葡萄球菌(4mL/kg)，三层医用纱布覆盖创面，用橡皮膏包扎固定，随后每只大鼠股肌注氢化可的松(0.4mL/100g)，连续3d，造模结束。造模成功后第二天两组开始换药，对照组给予生理盐水处理创面，祛腐生肌方组在创口处使用祛腐生肌方药粉，两组再以生理盐水湿纱布外敷，外覆盖干纱布，并以绷带包扎固定，每日给药1次，共计15d。

1.5观察指标1.5.1观察各组大鼠第5、10、15d创面愈合率:创面附标尺，采用数码相机拍照，记录大鼠创面情况，运用imagepro-plus软件分析处理。

1.5.2血清TNF-a、IL-1水平测定:分别于给药5、10、15d后，两组分别麻醉10只动物，大鼠腹主动脉取血，静置30min后离心(2000r/min，20min)，取上清分装于EP管，-70°C保存，采用ELISA法进行检测，指标严格按试剂盒说明书操作。

1.5.3皮肤肉芽组织HyP测定:分别于给药5、10、15d后，两组分别麻醉10只动物，剪取溃疡区约4～6cm皮肤肉芽组织。各组精确称量肉芽组织，采用水解法测定，指标严格按试剂盒说明书操作。

2结果

2.1各组大鼠创面愈合率比较从表l可以看出，与对照组比较，祛腐生肌方组第5d无统计学差异(P>0.05)；第10、15d与对照组相比，均有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。

2.2各组血清TNF-α、IL-1水平含量比较从表2可以看出，与对照组比较，祛腐生肌方组第5、10d相比，各组血清TNF-α、IL-1水平含量均有统计学差异(P<0.05)；第15d与对照组相比，无统计学差异 (P>0.05)。

2.3各组皮肤肉芽组织中HyP含量比较从表3可以看出，与对照组比较，祛腐生肌方组第5、10、15dHyP含量高于对照组(P<0.05)。

3讨论中医学治疗本病有悠久的历史，对慢性皮肤溃疡优势明显，现已得到广泛运用[6]。对于慢性溃疡而言，由于创面迁延不愈，临床表现为皮肤暗黑，创口下陷，腐肉难脱，新肌不生，创面难以愈合为特点[7]。《医学入门》[8]认为：“疮口不敛，由于肌肉不生，肌肉不生，由于腐肉不祛。”《医宗金鉴》更有“腐不祛则肌不生”之说。此外，也有医家认为影响溃疡不愈的局部因素还有“瘀”。如陈实功《外科正宗》[9]中记载“化瘀腐，方可得愈”的论述。因此对于慢性溃疡治疗，离不开祛腐和生肌，祛腐中蕴含活血，即祛腐活血是前提，生肌是根本。

我们在祛腐生肌方中运用当归、乳香、血竭活血化瘀，其目的在于改善血液循环，扩张血管，促进被破坏组织的修复及重建正常生理功能[10]，另可加用补气药黄芪，以达气能生血、气能行血之效，且黄芪能抑制细胞增殖作用，改善血供，提高内皮细胞表面整合素活性，加速创面愈合[11]。本研究中，与对照组比较，祛腐生肌方组第5d虽无统计学差异，但创面愈合率优于对照组，且随着用药时间的延长，第10、15d创面愈合率明显优于对照组，提示祛腐生肌方能加速溃疡伤口的愈合。

对于慢性溃疡患者而言，其中医辨证多属阴证、虚证，属疮疡的阴中之阴证[12]，患者免疫功能多低下。而疮面愈合是一发展过程，其中炎症反应是疮面愈合的初始阶段。在此期，若伤口能适当分泌炎症因子，可加强创面的炎症反应，有助于坏死组织的清理，为新生肉芽组织的生长提供支持，即体现既祛腐又生肌的作用[13]。此次研究结果显示，祛腐生肌方组早期就可发挥对创面的促炎作用，提高IL-1和TNF-α水平，增强免疫应答，刺激疮面四周上皮的生长，发挥生肌作用。其原因可能与方中黄芪、当归所含的多糖能通过促进细胞因子基因表达，发挥免疫调节有关[14]。祛腐生肌方组在后期IL-1和TNF-α表达与对照组无统计学差异，这可能与疮面愈合后期主要和基质形成和重塑期有关。

胶原在创伤修复过程中起重要作用。HyP是胶原合成的重要原料，它能间接反映胶原的含量，是较好的创面评价指标。从本次中祛腐生肌方组在5、10、15d能明显提高伤口肉芽组织中HyP含量，从而促进创面愈合，其作用可能与方中冰片增加肉芽组织结构和表皮细胞再生，修复皮肤附属器官，黄芪多糖胶原可提高组织中Hyp含量，促进胶原合成及肉芽生长，血竭能改善创面肉芽结构和胶原排列方式有关[15]。

综上，祛腐生肌方能促进慢性皮肤溃疡大鼠创面愈合，其作用机制可能与改善炎症状态、增加创面胶原蛋白，提高局部微循环有关，然其作用途径仍有待后续进一步研究。

参考文献

[1]安波,李勇,范立侨,等.无机活性元素对大鼠慢性溃疡组织乏氧诱导因子-1α及细胞因子的影响及机制[J].河北医药,2012,34(6):805-807.

[2]马拴全,刘梅杰.创愈膏对大鼠体表溃疡创面转化生长因子β1的作用[J]. 中医学报,2014,34(6):805-807.

[3]张朝晖,徐强.李竞教授祛腐生肌理论在疮疡诊治中的应用[J].湖南中医杂志,2011,27(5):30-31.

[4]张旭辉,董建勋,李健.等,回阳生肌方药对慢性皮肤溃疡大鼠创面愈合及炎症因子的影响[J].北京中医药大学学报,2013,36(3):170-173.

[5]张美吉.回阳生肌脂质体凝胶促进实验性大鼠慢性皮肤溃疡愈合机制探讨[D].北京：北京中医药大学，2010.

[6]张云杰.中医药治疗慢性皮肤溃疡研究概况[J].山东中医杂志,2014,33(12) 1040-1042.

[7]柏志玉,王粤湘,彭锦绣,等.拔毒生肌膏治疗慢性皮肤溃疡疗效观察[J].现代中西医结合杂志,2014, 23(6):641-643.

[8]明·李梃撰,金嫣莉,何源.乔站兵校注.医学入门[M].北京:中国中医药出版社,1995:46.

[9]明·陈实功.外科正宗[M].北京:人民卫生出版社,1964:247.

[10]韩晓明,孙加洪,李明宏,等.疮愈速治疗慢性皮肤溃疡的临床研究[J].新中医,2008,40(1):27-28.