292株血培养阳性病原菌分布及耐药性分析

马小华 石国民 喻 容 石 燕 向延根

292株血培养阳性病原菌分布及耐药性分析

马小华 石国民 喻 容 石 燕 向延根

目的 分析血培养阳性病原菌分布及耐药性特点，为指导临床制定治疗方案提供依据。方法 收集血培养采用BACTEC 9120全自动血培养仪进行培养，阳性者用MicroScan walkAway 96 SI进行细菌鉴定及药敏。结果 所有血培养共检出38种292株病原菌，革兰氏阴性菌占141株（48.0%），革兰氏阳性菌占142株(49.0%)，真菌9株（3.0%）。革兰氏阴性菌中排行前两位的是大肠埃希菌(44.7%)、肺炎克雷伯菌(22.0%)。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产超广谱β内酰胺酶检出率分别为54.0%和25.8%，对氨苄西林和哌拉西林的耐药性分别为92.1%、96.8%和87.3%、71.0%。革兰氏阳性菌中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)和耐甲氧西林金葡萄球菌(MRSA)分别占48.6%和19.7%，两种细菌对青霉素耐药率达92.0%以上，尚未发现对利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁耐药现象。结论 本次分离的细菌对药物均有不同程度的耐药，临床医师要根据不同细菌合理选择抗菌药物。

血培养；病原菌；抗菌药物

Blood culture; Pathogens; Antimicrobial susceptibility

血流感染（BSIs）是疾病的发生率和病死率的主要原因之一。据粗略估算美国每年大约有250 000患者发生血流感染，血流感染致死率在美国排第10位[1]。近年来，随着各种侵入性诊疗操作的出现[2]，抗菌药物及激素类药物的广泛运用，血流感染及细菌耐药性亦随之增加[3-4]。及时了解血流感染患者病原微生物分布及耐药情况，为临床提供合理的、有针对性的抗菌药物具有重要的指导意义。本研究就2014年10月～2015年10月全院血培养阳性样本进行了统计分析，以期了解本院病原菌种类分布及耐药状况。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2014年10月～2015年10月就诊于本院急诊及住院怀疑血流感染的患者，剔除同一患者相同部位的相同菌株。

1.2 仪器与试剂 BACTEC 9120全自动血培养仪及配套血培养购于美国BD公司，MicroScan walkAway 96 SI自动鉴定系统及配套试剂和药敏购于德国西门子公司。培养箱购于上海力申公司；生物安全柜购于上海瑞仰公司；抗菌药敏纸片有英国OXOID公司提供。血琼脂培养基、巧克力琼脂培养基、显色板购于凯林公司；MH药敏培养基购于博赛生物技术有限公司。

1.3 质控菌株 大肠埃希菌（ATCC 25922）、肺炎克雷伯菌（ATCC 700603）、铜绿假单胞菌（ATCC 27853）、金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）、粪肠球菌（ATCC 29212）均由卫生部临床检验中心提供。

1.4 方法

1.4.1 标本采集 患者寒战发生时，抗生素治疗前或者停药后下次抗生素使用前采集血液注入血培养瓶中（儿童1～3 mL，成人8～10 mL），及时送检，将血培养瓶放入BACTEC 9120全自动血培养仪中培养5 d，若仪器阳性报警时，及时转种血琼脂平板，若培养到期阴性报警，则取出转血琼脂平板，次日不长均则报阴性。

1.4.2 菌种鉴定与药敏实验 将培养阳性的菌株采用MicroScan walkAway 96 SI鉴定系统进行菌株及药敏鉴定，同时采用KB琼脂扩散法进行药敏比较。实验结果参照临床实验室标准化协会（CLSI）2014年标准判读。

1.5 统计学方法 所有数据采用WHONET 5.4软件进行统计分析。

2 结果

2.1 血培养主要菌株分布 临床分离得到的38种292株细菌，其中革兰氏阴性菌141株，占48.0%，革兰氏阳性菌142株，占49.0%，真菌9株，占3.0%。革兰阴性菌株中，排行前两位的分别为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌，分别占革兰氏阴性菌的44.7%和22.0%；革兰阳性菌中，MRCNS和MRSA分别占阳性菌的48.6%和19.7%。本次分离出的肠球菌属占8.5%。见表1。

2.2 血培养阳性病原菌所在科室分布 本院血培养阳性患者所在科室主要集中在结核科、肾内科、小儿科、新生儿科和消化科，分别占10.6%、9.9%、8.9%、6.9%和5.1%。见表2。

表1 血培养阳性主要病原菌分布

表2 血培养阳性菌科室分布

2.3 血培养药敏实验结果

2.3.1 常见格兰阴性杆菌对抗生素耐药情况及产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）检出 肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对氨苄西林的耐药率达到92.0%以上，对哌拉西林的耐药率也达到71.0%以上，对亚胺培南的敏感性均在93.0%以上，对含酶的抑制剂如哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦有很好的抑菌效果，敏感性均在87.0%以上。见表3 A。产ESBLs的大肠埃希菌34株，阳性率为54%。产ESBLs肺炎克雷伯菌8株，阳性率为25.8%。见表3 B。

表3 A血培养阴性杆菌对抗菌药物耐药[n(%)]

表3 B大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌ESBLs检出

2.3.2 常见格兰阳性菌对抗生素耐药情况 血培养主要革兰阳性球菌药敏结果见表4，由表上可见，凝固酶阴性葡萄球菌中,耐甲氧西林占82.6%，对氨苄西林/舒巴坦、红霉素和青霉素耐药率为81.0%、82.7%和92.8%。金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌为32.1%，对青霉素耐药率为96.4%。两者对利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁耐药率均为0%。见表4。

表4 血培养阳性球菌对抗菌药物耐药情况[n(%)]

3 讨论

血流感染是患者住院期间发病和死亡的重要因素[5-7]，血培养阳性有助于血流感染的诊断，但是并非所有的血培养阳性均可诊断血流感染，必须结合临床症状加以考虑。至今为止，有关血流感染报道的相关文献很多，这也反映了各个医院对血培养阳性的重视及谨慎。本院作为重组后的一家大型的三甲医院，其科室构成与其他医院可能不尽相同，有必要对全院各个科室血培养阳性样本做一次调查。本研究中，回顾了2014年10月～2015年10月这1年中所有血培养阳性细菌的分布及耐药性分析，为了解本院目前细菌分布及耐药监测提供基数资料。

本组资料显示，本次血培养阳性分离得到38种292株细菌，革兰阴性菌分离率48.0%，革兰阳性菌49.0%，两者趋近平衡，与某些文献报道不尽相同[8-10]。王佩芳等人报道2007～2009年血培养阳性菌占39.02%，而格兰阴性菌占60.98%[11]，而谢强等人报道2013年血培养中格兰阳性菌占63.33%，格兰阴性菌占35.00%，说明近年来格兰阳性菌感染率在各大医院均有上升趋势，某些地方甚至超过了格兰阴性菌[12]。此外，培养阳性菌对应科室主要分布在结核科、肾内科、小儿科，这与这些科室相对患者量较多，标本送检量大有关。

本次检测出的产ESBLs的大肠埃希菌阳性率为54%，产ESBLs肺炎克雷伯菌阳性率为25.8%，而陈明慧等人分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs检出率分别55.0%和37.3%[9]，说明产ESBLs细菌耐药形式严峻。一般而言，实验室中只要检测出产ESBLs细菌，则无论体内外药物敏感试验如何，均可认为对1、2、3代头孢、青霉素类和单环菌素耐药。本次分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对青霉素类耐药率较高，而对碳青酶烯类药物、阿米卡星等抗菌效果较好，可用于治疗产ESBLs细菌的首选药物。此外，本次分离的鲍曼不动杆菌对所统计的药物与大肠埃希菌耐药率相当（未列出），然而本次分离的鲍曼不动杆菌只有9株，需要更多株数进行分析。本次分离出的MRCNS和MRSA占葡萄球菌的48.6%和19.7%。一般而言，分离出耐甲氧西林的葡萄球菌，其对多种药物如头孢西丁、亚胺培南和头孢孟多等耐药。此外，本次分离出的MRCNS和MRSA均未发现对利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁耐药，可以考虑作为首选药。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.15.003

湖南 410004 长沙市中心医院检验科（马小华 石国民 喻容 石燕 向延根）

注： R：耐药；I：中介；S：敏感

[Abtract] Objective To investigate the distribution and drug-resistance characteristics of pathogens in blood culture isolates in order to provide the basis for guiding clinical treatment plan. Methods Pathogens collected were cultured with BACTEC 9120 automated blood culture system and bacterial confirmation and antibacterial susceptibility tests were conducted with MicroScan walkAway 96 SI. Results A total of 292 strains were isolated from blood specimens. Gram negative bacilli, gram positive cocci and fungi accounted for 48%, 49%, and 3%, respectively. The most common gram negative bacilli were Escherichia coli (44.7%), Klebsiella pneumoniae (22.0%), ESBLs producing strains of Escherichia coli and Klebsiella peumoniae was 54.0% and 25.8%, respectively. The detected rates of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae strains resistant to Ampicillin and Piperacillin were 92.1%, 96.8% and 87.3%, 71.0%, respectively. The most frequent isolates of gram positive cocci were methicillinresistant coagulase-negative Staphylococcus (MRCNS) (48.6%) and methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) (19.7%). The both isolates showed high resistant rates to Penicillin (over 92.0%). No strains were found resistant to linezolid, vancomycin, or teicoplanin. Conclusion Different bacterial isolates shows different levels of drug resistance in these data, clinicians should choose right antimicrobial gents according antimicrobial susceptibility of different bacterium.