献血者核酸筛查情况分析

赵燕

献血者核酸筛查情况分析

赵燕

目的 分析枣庄市献血者的核酸检测情况，为以后更好的开展核酸检测工作提供依据。方法 ALT检测合格及酶联免疫法检测乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒阴性的献血者标本9901例，进行HBV-DNA、HCV-RNA和HIV-RNA的联合混样检测，对混样阳性的标本再进行拆分检测。并对拆分乙肝HBV-DNA阳性的样本进行乙肝两对半血清学的酶联免疫检测。结果 共完成9901例标本的核酸混样检测，拆分阳性的标本7例，阳性率为0.071%(7/9901)。HBcAb阳性或HBcAb阳性伴HBsAb强弱阳性占71.40%(5/7)，而HCV-RNA、HIV-RNA均阴性。对7例HBV-DNA阳性的标本进行乙肝两对半检测，结果显示：HBcAb阳性2例（28.5%)，HBcAb阳性伴HBsAb强弱阳性3例(42.9%)，HBsAg弱阳性伴HBsAb阳性1例(14.3%)，两对半结果全部阴性1例（14.3%)。结论 常规检测后的献血者依然有传染性的可能，核酸检测可有效降低传染性的风险。

献血者；血液安全；核酸筛查

输血作为一种不可替代的临床治疗手段，已经发挥着越来越重要的作用。但血液的输注虽抢救了患者的生命和治愈了疾病，但也存在着输血性传播疾病的危险。因此，为提高临床输血安全，尽量避免传染性疾病通过需要传播，是血站工作的核心任务之一。目前，我国采供血机构，依据卫生部相关标准，每份血液标本分别用两种不同厂家的酶联免疫试剂，对乙肝、丙肝、艾滋病和梅毒进行检测，但是由于酶联免疫试剂的灵敏度问题，但依然存在因漏检而传播的风险，这主要是“窗口期”问题而导致的。核酸扩增技术具有高度的敏感性和特异性，通过检测病毒的核酸，可有效降低“窗口期”造成的漏检，核酸检测技术(NAT)在血站的应用弥补了酶联免疫试的不足。因此，西方发达国家在上世纪末已经普遍应用NAT进行血液检测[1]。近年来国内部分采供血机构也把核酸扩增技术应用于血液的检测[2]。国家卫生和计划生育委员会要求2013～2015年全面推进血站核酸检测工作，并公布具体实施方案，到2015年，血液筛查核酸检测基本覆盖全国。为落实国家卫生和计划生育委员会的要求，本站2015初年开始核酸检测的探索，已开始全面应用于血液筛查。现将应用情况报道如下。

1 资料与方法

1.1 检测标本 枣庄血站2015年7月20日～2015年12月20日，各个采血点采集的献血者标本共计10140例。采血现场每个献血者留取标本3份，1份核酸检测专用试管用于核酸检测，2份EDTA-K2抗凝真空管用于ALT、血液酶免检测。核酸检测专用试管在现场离心，标本保存及运输温度要求在2℃～8℃。按照《献血者健康检查要求》的标准，对ALT速率法进行检测，对乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒进行两遍酶联免疫检测(ELISA法)。ALT检测结果合格（≤40 IU/mL），乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒检测结果阴性的献血者标本共计9901例。

1.2 检测试剂 酶免试剂：乙肝表面抗原试剂（厦门新创，北京万泰）；丙肝抗体试剂（厦门新创、北京万泰）；艾滋病抗体试剂（珠海丽珠、北京万泰）；梅毒抗体试剂（厦门新创、珠海丽珠）；核酸检测试剂：乙肝病毒、丙肝病毒、人类免疫缺陷病毒（1型）核酸检测试剂（PCR-荧光法）（上海科华）。上述所有试剂均有批批检报告并在有效期内使用。乙肝两对半也用酶免法检测，由枣庄市立三院进行。

1.3 仪器 哈美顿STAR全自动加样仪（瑞士）；澳斯邦24/20全自动酶免后处理机；Olympus AU480全自动生化仪（日本奥林巴斯）；上海科华核酸检测系统：Hamilton MICROLAB STAR全自动混样提取仪、ABI 7500核酸扩增检测仪。

1.4 方法 对10140份献血者标本先进行ALT速率法检测、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和梅毒的酶免法检测。去掉所有阳性标本，得到全部合格的标本共9901份。对9901份标本进行核酸HBV-DNA、HCV-RNA和HIV-RNA联合检测。8个标本混样到1个pool，其中每个样本吸样180☒L，对混样阳性pool进行单个样本(每个样本吸样1.44 mL)拆分实验。对HBVDNA阳性样本，做乙肝两对半检测，即乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体(HBeAb)、乙肝核心抗体(HBcAb)的检测。

2 结果

共完成9901例标本的核酸混样检测，拆分15批次，其中乙肝核酸拆分阳性的标本7例，核酸检测阳性率为0.071%(7/9901)。HBcAb阳性或HBcAb阳性伴HBsAb强弱阳性占71.40%(5/7)。没有检出HIV-RNA或HCV-RNA阳性标本。对7例HBV-DNA阳性的样本进行乙肝两对半血清学标志物检测。见表1。

表1 7例酶免阴性HBV-DNA阳性标本乙肝两对半结果［n（%）］

3 讨论

如何降低乙肝、丙肝和艾滋病病毒“窗口期”感染风险，已成为血液检测领域亟待解决的问题。现有的酶联免疫等血清学检测方法检测的是抗原或抗体，而核酸检测技术检测的是病毒核酸[3]，能更早地发现病毒感染，减少经血传播疾病的潜在风险。这项技术目前可将乙肝、丙肝和艾滋病病毒的检测“窗口期”分别由原来的50天、72天和22天缩短到25天、59天和11天[4]，临床输血安全将更有保障。

本站核酸检测结果，从9901例献血者ALT、乙肝、丙肝和艾滋病检测全部合格的标本中，用NAT检测筛查并鉴定出7例HBV-DNA阳性，阳性率0.071%(7/9901)，低于我国相关报道的0.15%[5]和0.47%[6]，这可能与乙肝的流行区域差异有关，也与人员操作、仪器和试剂有一定的关系，也可能与检测的标本例数较少有关。从本结果看出，常规酶联免疫法对乙肝标本检测后，仍然存在漏检的可能。对乙肝、丙肝和艾滋病检测出处于窗口期的而且隐匿性感染的献血者，酶联免疫试剂方法是检测不出来的，说明核酸检测的重要性和必要性[7]。从7例献血者的两对半检测结果看出，HBsAg酶免阴性、HBV-DNA阳性乙肝血清学标志物共出现4种情况：其中以HBcAb阳性或HBcAb阳性伴HBsAb强弱阳性占比例最大，总共达71.40%(5/7)，与广州番禺地区的63.8%[8]相近。1例HBsAb强阳性伴HBsAg极弱阳性，是否为乙型肝炎病毒的PreS/S基因变异株所致，由于本站条件所限，无法进行病毒核酸测序确认。其中有1例献血者乙肝两对半的检测结果全部阴性，对此献血者准备跟踪调查，如果检测结果显示其HBsAg、HBeAg转为阳性，那么献血者“窗口期”感染的可能性较大。由于本站开展献血者的NAT检测时间较短，标本数数量较少，加之献血者的丙肝、艾滋病的感染率较低，所以暂未检出HIV-RNA或HCV-RNA阳性标本。

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[3] 欧山海，林永财，倪宏英，等．核酸检测后血液检测模式的探讨[J]．中国输血杂志，2012，25(3)：244-246．

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[5] 任芙蓉．核酸检测技术在国内外血液筛检中的应用[J]．北京医学，2008，30(8)：561.

[6] 刘丽，杨忠思，许雷．HBsAg阴性HBV DNA阳性的无偿献血者血清学模式及其意义[J].中国输血杂志，2013，26(1)：49-50.

[7] 巫贡晓，赖福春，施东梅，等．核酸扩增技术在献血者血液筛查中的应用分析[J]．国际医学检验杂志，2013，34（19）：2530-2531．

[8] 蓝文莉，谢敬文．广州番禺地区开展核酸血液筛查的应用情况[J]．中国输血杂志，2015，28(4)：235-236.

Objective Analysis of NAT in Zaozhuang blood donors, provide the basis for better development of NAT work. Methods Qualif i ed ALT and ELISA in detection of hepatitis B, hepatitis C, syphilis and HIV negative blood specimens, HBV-DNA and HCV-RNA and HIV-RNA combined with separation detection of mixed samples and the positive samples. And ELISA of two pairs of semi–hepatitis, the sample is HBV-DNA positive. Results This study conduct 9901 mix sample test in total, 7 samples are split positive, and the ratio is 0.071% (7/9901), while HCV-RNA and HIV-RNA are negative. Two pairs of semi–hepatitis test of 7 HBV-RNA samples showed that, 2 of them are HBcAb positive (28.5%), 3 of them are HBcAb positive with HBsAb weak positive (42.9%), 1 of them is HbsAg weak positive with HBsAb positive(14.3%), and 1 is negative (14.3%). Conclusion After the routine detection of blood donors is still contagious, NAT can effectively reduce the risk.

Blood Donors; Blood safety; NAT

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.20.022

山东 277101 山东省枣庄市中心血站（赵燕）