钠尿素受体A在乳腺癌中的表达及临床意义*

陕西省榆林市第二医院(榆林 719000)

李冠雄　曲敬琨△　赵　旭　马任远　杨中民　房宏林　段小艺△　王健生△▲



·临床研究·

钠尿素受体A在乳腺癌中的表达及临床意义*

陕西省榆林市第二医院(榆林 719000)

李冠雄曲敬琨△赵旭马任远杨中民房宏林段小艺△王健生△▲

摘要目的：观察乳腺癌组织中钠尿素受体A(NPRA)的表达及与临床病理资料间的关系。方法：采用免疫组化方法对符合条件的乳腺癌50例及癌旁正常组织46例进行NPRA染色，并结合临床病理资料分析两者之间的相关性。结果：符合纳入标准的乳腺癌组织50例，癌旁正常组织46例；NPRA在TNM I和II期中NPRA蛋白的强阳性表达率为36.8%(7/19)，在TNM III期和Ⅳ期中NPRA的强阳性表达率为80.6%(25/31)，组间比较具有统计学差异。NPRA蛋白表达水平与患者的发病年龄、肿瘤部位、淋巴结转移、组织分化程度、肿瘤直径大小间比较无统计学差异。结论：NPRA在乳腺癌组织中高表达，且与患者TNM分期相关。

主题词 乳腺肿瘤/病理学@钠尿素受体A肿瘤分期

研究发现，之前长期被认为跟心脏功能及血压调节有关的钠尿素受体A(Natriuretic peptide receptor A，NPRA)在多种人类恶性肿瘤细胞系及组织内都有不同程度的表达，并为一种癌基因参与了黑色素瘤、肺癌、前列腺癌等恶性肿瘤的发生与发展[1-4]。我们前期在胃癌组织中也观察到NPRA高表达[5]。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，有关乳腺癌组织内NPRA蛋白的表达情况尚未见报道。我们应用免疫组化方法对乳腺癌组织中的NPRA的表达进行了检测，并与患者的临床病理资料进行统计分析，现报告如下。

资料与方法

1材料收集陕西榆林市第二医院2007年1月至2009年12月期间手术切除的组织病理石蜡标本共计130例，其中乳腺癌组织80例，癌旁组织50例。入组标准：①女性患者；②被病理医师确诊为乳腺导管癌；③术前均未行化学治疗、放射治疗及免疫治疗；④病例资料和随访资料齐全。排除标准：①男性患者；②所取的癌旁组织已经被肿瘤侵犯；③组织为其他亚型的乳腺癌标本。

2免疫组化方法石蜡组织常规切片，按试剂说明行免疫组化染色，以PBS代替一抗的切片作为阴性对照，使用Motic公司显微镜观察结果。染色阳性结果呈棕黄色或棕褐色颗粒，每张标本随机选取10个视野，各视野采用半定量评分方法。依据染色强度积分，分为4个等级：0分：无着色；1分：浅黄色；2分：棕黄色；3分：棕褐色。参照阳性细胞率评分：0分：无阳性细胞或阳性细胞<10%；1分：阳性细胞10～25%；2分：阳性细胞25～50%；3分:阳性细胞50～75%；4分：阳性细胞>75%。 将染色强度和阳性细胞率的积分相乘作为最终判定结果：0分为阴性(-)，1～4为弱阳性(+)；5～8为阳性()；9～12为强阳性()。

3统计学方法应用SPSS19.0 统计学软件，计数资料组间比较采用χ2检验或Fisher确切概率法，以P<0.05为差异具有统计学意义。

结果

1 一般资料 按入组标准筛选后有满足要求的乳腺癌组织50例，癌旁组织46例。患者年龄26～77岁，中位年龄49岁，其中<60岁40例(80.0%)，≥60岁10例(20.0%)。淋巴结转移情况：伴有淋巴结转移的40例(80.0%)，不伴有淋巴结转移的10例(20.0%)。组织学分化程度：高分化的11例(22.0%)，中分化的23 例(46.0%)，低分化的16例(32.0%)。按国际TNM 分期标准(2009年版) 分期后，I期0例，II期19例(38.0%)，III期的29例(58.0%)Ⅳ期2例(4.0%)。肿瘤部位：外上象限35例(70.0%)，外下象限8例(16.0%)，内上象限4例(8.0%)，内下象限3例(6.0%)。肿瘤直径：2～5cm 45例(90.0%)，>5cm 5例(10.0%)。

2免疫组化染色结果在乳腺导管癌组织的细胞中可见到NPRA蛋白密集性的分布在细胞质与胞膜中，而在癌旁组织的上皮细胞中很少发现有NPRA蛋白的表达，阴性对照切片中也很少发现黄色的表达。在乳腺导管癌组织中NPRA蛋白的强阳性率约为64%，与癌旁组织中NPRA蛋白的强阳性率(26.1%)相比明显增高，且组间差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1，附图。

表1　NPRA蛋白在人乳腺导管癌组织与

注：与癌旁组织比较，*P<0.05

附图a： 乳腺导管癌细胞中可见呈密集分布的棕黄色颗粒(SP法 200×)；b：乳腺导管癌细胞中可见密集分布的棕黄色或淡黄色颗粒，且主要位于细胞质和胞膜中，胞核基本不染色(SP法 400×)；c：癌旁组织中呈淡黄色(SP法 200×)；d：阴性对照(SP法 200×)

3NPRA在乳腺癌组织中的表达与临床病理学特征的关系NPRA蛋白表达水平与患者的发病年龄、淋巴结转移、组织分化程度、肿瘤部位、肿瘤直径大小等临床特征无统计学意义(P>0.05)；NPRA在TNM I和Ⅱ期中NPRA蛋白的强阳性表达率为36.8%(7/19)，在TNM Ⅲ期和Ⅳ期中NPRA的强阳性表达率为80.6%(25/31)，组间差异具有统计学意义(χ2=9.810，P<0.05),见表2。

表2　人乳腺导管癌组织中NPRA的表达与

讨论

NPRA作为心房钠尿肽受体家族(NPRA、NPRB及NPRC)中的一员，具有信号转导酶激活活性。NPRA基因位于1号染色体长臂2区l带和2带(1q21～q22)，编码一条含有约1057个氨基酸的多肽，包括四个结构域，通过与ANP或BNP的结合进而发挥其病理和生理作用[1]。以往对NPRA的研究大多集中在心血管系统，主要与高血压、心肌肥大、心力衰竭等有关。有研究显示，NPRA在人类多种癌组织或细胞中高表达，且其表达水平与癌恶性程度有关，剔除NPRA基因可以抑制前列腺癌、肺癌、黑素瘤、卵巢癌等肿瘤的形成[2-4]。本课题组前期在胃癌的研究中也观察到癌组织中NPRA高表达[5]。陈华云等在胃癌细胞株中检测到NPRA mRNA表达上调[6]。本研究观察到，NPRA在人乳腺导管癌组织中明显高表达，且主要表达在细胞质和细胞膜内，NPRA在人乳腺导管癌中的强阳性率为64%，与癌旁组织中的强阳性率(26.1%)相比，差异有统计学意义(P<0.05)。这与Wang X等在前列腺癌中的研究类似[4]。

王等发现NPRA在正常人体内和良性前列腺增生患者增生细胞中的表达非常低，显著低于前列腺癌和前列腺高级上皮内瘤变组织，同样在低级的上皮内瘤变中也是如此，这提示NPRA在肿瘤的发展过程中有一定的促进作用[4]。本研究结果显示，NPRA在乳腺导管癌组织中高表达并与患者的TNM分期相关，即TNM分期越高的患者，其癌组织内NPRA基因表达越高，这提示NPRA在乳腺癌的发生发展过程中起着促进作用，NPRA可以作为判断预后的一个分子指标。

有研究表明，在肿瘤的发生、发展过程中，NPRA作为癌基因可能是通过促进炎症的发生，调控抑癌基因pRb和VEGF的表达而发挥作用，但其具体作用机制还有待进一步探索[7]。调控NPRA的表达可使得ANP分子与血管壁黏性降低，从而阻止脱落的癌细胞黏附在血管壁上，降低肿瘤的复发和转移，通过对NPRA基因及其上下游调控因子的进一步研究，将有助于找到治疗肿瘤的有效分子生物靶点，为临床上有效治疗肿瘤、降低肿瘤复发转移、改善预后开辟一条新的途径。

参考文献

[1]Stryjewski P J, Nessler B, Cubera K,etal. Natriuretic peptides. History of discovery, chemical structure, mechanism of action and the removal routes. Basis of diagnostic and therapeutic use [J]. Przegl Lek, 2013, 70(7): 463-467.

[2]Vesely D L. New anticancer agents: Hormones made within the heart[J]. Anticancer Res, 2012, 32(7):2515-2521.

[3]Kong X, Wang X, Xu W,etal. Natriuretic peptide receptor a as a novel anticancer target[J]. Cancer Res, 2008, 68(1): 249-56.

[4]Wang X, Raulji P, Mohapatra SS,etal. Natriuretic peptide receptor a as a novel target for prostate cancer[J]. Mol Cancer, 2011, 10: 56.

[5]张佳，赵志龙， 陈敬信，等.NPR-A在胃腺癌中的表达及意义[J].现代肿瘤医学，2013,21(12):2744-2746.

[6]陈华云， 杨东杰， 张常华,等. 胃癌细胞株中NPRA基因启动子区CpG岛的甲基化分析[J]. 解剖学研究,2012,34(5): 355-357.

[7]Wang JC，Fiscus RR．Essential roles of the nitric oxide(no)/cGMP/protein kinase G type-Iα(PKG-Iα)signaling pathway and the atrial natriuretic peptide(ANP)/cGMP /PKG-Iαautocfine loop in promoting proliferation and cell survival of OP9 bone marrow stromal cells[J]. J Cell Biochem，2011，l12(3)：829-839.

(收稿：2015-05-17)

Expression of natriuretic peptide receptor A and its clinical significance in the breast carcinomas

Department of General Surgery, The Second Hospital of Yulin (Yulin719000)

Li GuanxiongQu Li JingkunZhao Xuet al

ABSTRACTObjective：To observe the expression of Natriuretic Peptide Receptor A (NPRA) and its relationship with clinicopathological data clinical significance in the Breast Carcinomas. Methods：Using immunohistochemical technique to investigate the NPRA protein in eligible human breast ductal cancer and para-carcinoma specimens, and analyze the relationship between NPRA expression and clinical pathological features. Results：Including 50human breast ductal cancer and 46 para-carcinoma specimens in the standard, the positive expression of NPRA was 36.8%(7/19)in patients of TNM I and TNM Ⅱ,the positive expression of NPRA was 80.6%(25/31)in patients of TNM Ⅲand TNM Ⅳ, statistical significance was found between groups. While the expression of NPRA showed no statistically significant among the association of age, lymph node metastasis, tumer size, histologic differentiation and tumer position. Conclusion: NPRA is highly expressed in patients with human breast ductal cancer, the higher positive expression of NPRA was correlation with TNM Stages.

KEY WORDSBreastneoplasms/Pathology@Natriuretic peptide receptor ANeoplasm staging

【中图分类号】R737.9

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.03.009

*国家自然科学基金资助项目(81471710)

陕西省科技攻关项目(2009K2-02)

△西安交通大学第一附属医院

▲通讯作者