血清抗M型磷脂酶A2受体抗体与成人特发性膜性肾病危险性的相关性研究*

延安大学附属医院肾内科(延安716000)

刘　延　杨小娟



血清抗M型磷脂酶A2受体抗体与成人特发性膜性肾病危险性的相关性研究*

延安大学附属医院肾内科(延安716000)

刘延杨小娟

摘要目的：探讨血清中抗M型磷脂酶A2受体抗体和成人特发性膜性肾病的相关性，以及抗体滴度和患者严重程度的关系。方法：本次研究收集了128例患者，半定量检测被试者血清中抗M型磷脂酶A2受体抗体，定量检测被试者血清中抗M型磷脂酶A2受体抗体。结果：血清中抗M型磷脂酶A2受体抗体在特发性膜性肾病病人血液中特异性存在，完全缓解和部分缓解患者血清中抗M型磷脂酶A2受体抗体明显减少。结论：血清中抗M型磷脂酶A2受体抗体的存在或许可作为成人特发性膜性肾病的生物学标记物并用于评估病情。

主题词肾小球肾炎, 膜性@抗M型磷脂酶A2受体抗体

特发性膜性肾病(Idiopathic membranous nephropathy, IMN)不同于继发性膜性肾病(Secondary membranous nephropathy, SMN)是在成人中导致肾病综合征的常见原因。近年来，对膜性肾病病理学的研究有了比较深入的研究， Beck等发现人肾小球足细胞膜上表达的M型磷脂酶A2受体(M-type receptor of secretory phospholipase A2，PLA2R)是成人IMN患者体内主要的自身靶抗原，虽然足细胞上的其他一些自身抗原，譬如超氧化物歧化酶和α-烯醇化酶等也可能参与了特发性膜性肾病的发生，但M型PLA2R的重要性已得到了公认。我们对成年IMN患者和SMN患者血清中的血清抗M型PLA2R抗体进行了检测，以确定其与成人特发性膜性肾病危险性的相关性。

对象与方法

1对象本研究收集了我院2010年3月至2015年3月IMN患者及SMN患者。所有患者均经过肾穿刺活检，尿蛋白均≥3.5 g。本研究中包括IMN患者103例,其中男53例，女50例，平均年龄54.3±8.4岁。SMN组患者25例，其中男16例，女9例，平均年龄59.1±6.5岁。两组一般情况无显著差异(P<0.05)，具有可比性。

2方法所有入组对象空腹采集静脉血，低温离心机中4℃，3000 rpm离心得血清。

血清抗PLA2R抗体半定量检测：采用western blot进行半定量检测。血清样品加上上样缓冲液，混匀，100℃煮5min。将制备的血清蛋白样品80V下跑30min，120V下120min。再将分离胶上的蛋白转至硝酸纤维素膜上，然后用抗体检测。以GAPDH作为内参计算分析各条带的灰度。

血清抗PLA2R抗体定量检测：采用ELISA进行定量检测。在用纯化的重组PLA2R包被的微孔板上依次加入已知浓度的标准品和待检样品，再加入生物素标记的抗 IgG 抗体。在酶标仪下读取吸光光度值。通过标准曲线读取血清样品中的人抗M型磷脂酶A2受体抗体(Anti-PLA2R)的浓度。

3统计学方法采用Graphpad进行数据分析。计算组间统计学差异采用ttest检验，P⟨0.05时认为有统计学差异。

结果

1IMN患者治疗前、治疗后血清抗PLA2R抗体半定量分析膜性肾病缓解标准我们采用了“改善全球肾脏病预后组织”公布的标准[1]：尿蛋白<0.3 g为完全缓解，<3.5 g为部分缓解。按上述标准将特发性膜性肾病患者分为完全缓解组、部分缓解组和未缓解组。其中完全缓解组21例，部分缓解组48例。所有血液样品均用western blot进行检测，western blot的结果分为IMN患者治疗前、完全缓解IMN患者治疗后、部分缓解IMN患者治疗后以及未缓解IMN患者治疗后四组来进行统计。完全缓解组和部分缓解组相比治疗前都有统计学差异，而未缓解组相比治疗前并无统计学差异。以上结果表明完全缓解组和部分缓解组的病人的血清抗PLA2R抗体相比治疗前有明显减少，而未缓解组的血清抗PLA2R抗体并无明显变化。

2IMN患者以及SMN患者治疗前、治疗后血清抗PLA2R抗体定量分析ELISA的结果分为完全缓解IMN患者治疗前、完全缓解IMN治疗后、部分缓解IMN治疗前、部分缓解IMN治疗后、未缓解IMN治疗前、未缓解IMN治疗后、完全缓解SMN治疗前、完全缓解SMN治疗后、部分缓解SMN治疗前、部分缓解SMN治疗后、未缓解SMN治疗前以及未缓解SMN治疗后一共十二组来进行统计。结果显示：完全缓解组、部分缓解组以及未缓解组患者血清中的抗PLA2R抗体相比治疗前都有明显减少，但在未缓解组中治疗后滴度仍保持在较高的水平。而在继发性膜性肾病患者血清中一直很少检测到抗PLA2R抗体。以上结果提示我们血清抗PLA2R抗体和特发性膜性肾病严重程度的相关性，见附表。

附表　治疗前后血清抗PLA2R抗体滴度的比较

讨论

特发性膜性肾病作为很常见的诱发肾病综合征的疾病，它的临床检验还多数依赖于组织活检，这样的检验方式创伤大，给患者造成较大的损伤和不便。血清中抗M型磷脂酶A2受体抗体在特发性膜性肾病中是否特异存在以及抗M型磷脂酶A2受体抗体表达水平和尿蛋白水平以及疾病预后可能都有一定的相关性[2～6]。但是国内这方面的数据并不充分[7]，我们取得我院肾内科特发性膜性肾病和继发性膜性肾病的患者血液样本，应用半定量的方法证明了血清中抗M型磷脂酶A2受体抗体在特发性膜性肾病病人血液中的特异性存在，并发现完全缓解和部分缓解病人血清中抗M型磷脂酶A2受体抗体明显减少。而运用定量检测，我们进一步证实了抗M型磷脂酶A2受体抗体的表达与特发性膜性肾病的直接相关性。我们还发现，治疗后未缓解组患者血清中的抗体滴度明显高于完全缓解组和部分缓解组的患者，这为我们预测患者的病情以及设计更有效更适合患者的治疗方案提供了思路。

参考文献

[1]Chadban SJ. KHA-CARI guideline: KHA-CARI adaptation of the KDIGO Clinical Practice Guideline for the Care of Kidney Transplant Recipients[J]. Nephrology (Carlton)， 2012，17(3):204.

[2]Hoxha E. Phospholipase A2receptor autoantibodies and clinical outcome in patients with primary membranous nephropathy[J]. J Am Soc Nephrol,2014,25(6):1357.

[3]Kanigicherla D. Anti-PLA2R antibodies measured by ELISA predict long-term outcome in a prevalent population of patients with idiopathic membranous nephropathy[J]. Kidney Int,2013,83(5):940.

[4]Bech AP. Association of anti-PLA(2)R antibodies with outcomes after immunosuppressive therapy in idiopathic membranous nephropathy[J]. Clin J Am Soc Nephrol, 2014,9(8):1386.

[5]Segarra-Medrano A. Evolution of antibody titre against the M-type phospholipase A2receptor and clinical response in idiopathic membranous nephropathy patients treated with tacrolimus[J]. Nefrologia,2014,34(4):491-7.

[6]Hofstra JM. Antiphospholipase A2receptor antibody titer and subclass in idiopathic membranous nephropathy[J]. J Am Soc Nephrol,2012,23(10):1735.

[7]杨永超，刘晓青，马宝梅，等.叶传蕙教授治疗特发性膜性肾病经验[J].陕西中医，2015，36(1)：78-80.

(收稿：2015-12-05)

The correlation of anti-phospholipase A2receptor antibodies with idiopathic membranous nephropathy in adult

Department of Nephrology,Affiliated Hospital of Yan′an University(Yan′an 716000)

Liu Yan

ABSTRACTObjective: To assess the correlation between Anti-M-type receptor of secretory phospholipase A2 and idiopathic membranous nephropathy. Methods: This study collected 128 cases from2010 to 2015 and detect Anti-M-type receptor of secretory phospholipase A2. Results: Anti-M-type receptor of secretory phospholipase A2 can be detected in patients' serum instead of normal people. And in recovered patients, the amount of anti-M-type receptor of secretory phospholipase A2 decreased obviously. Conclusion: Anti-M-type receptor of secretory phospholipase A2 may be a biomarker of idiopathic membranous nephropathy, and it may also be used to evaluate patients' condition.

KEY WORDSGlomerulonephritis,membranous@M-type receptor of secretory phospholipase A2

【中图分类号】R692.6

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.04.005

*陕西省延安市科学技术研究发展计划项目(2012KW-12)