HOXD10基因转染对人胃癌耐药SGC7901/VCR细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响

陈 玲，陈 凯，杨锡贵，姜 超，杨香山

1. 山东省医学科学院附属医院内三科，山东 济南 250031； 2. 昆明医科大学第三附属医院胸外科一病区； 3. 山东省医学科学院附属医院病理科

HOXD10基因转染对人胃癌耐药SGC7901/VCR细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响

陈 玲1，陈 凯2，杨锡贵1，姜 超1，杨香山3

1. 山东省医学科学院附属医院内三科，山东 济南 250031； 2. 昆明医科大学第三附属医院胸外科一病区； 3. 山东省医学科学院附属医院病理科

目的 研究HOXD10基因转染人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR后表达情况及对细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响。方法将HOXD10基因表达质粒(pcDNA3.1-EGFP-HOXD10)转染至SGC7901/VCR中，利用Real-time PCR和Western blotting检测HOXD10基因转染后表达效果；MTT方法、平板单克隆实验、流式细胞术、Transwell方法分别检测HOXD10基因转染对细胞增殖、单克隆形成、细胞周期、凋亡、侵袭能力的影响；并用Western blotting检测HOXD10基因转染对肿瘤侵袭性相关因子MMP-2蛋白表达的影响。结果 HOXD10基因转染至人胃癌SGC7901/VCR细胞后其基因和蛋白表达水平均显著上升(P<0.05)，能够抑制SGC7901/VCR细胞增殖、单克隆形成、细胞周期，并提高顺铂作用下细胞凋亡率(P<0.05)，同时显著抑制细胞侵袭能力和MMP-2蛋白的表达(P<0.05)。结论 HOXD10基因转染人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR后能够高表达，进而抑制细胞增殖、单克隆形成、细胞周期和侵袭能力并提高顺铂下细胞凋亡率，而其抑制细胞侵袭能力可能与MMP-2表达减少有关。

HOXD10；基因转染；细胞增殖；细胞凋亡；细胞侵袭；MMP-2

胃癌作为全球高发的恶性肿瘤之一，在我国肿瘤死亡原因中占第二位，且因其早期诊断率较低，不易被诊治[1]。Bernards等[2]研究发现胃癌肿瘤易发生转移侵袭，转移性患者的发病率从1990年的24%显著提高到2011年的44%，且和其他类型肿瘤一样，胃癌也易存在原发性耐药性。近来对胃癌的研究有了较大进步，但针对晚期和伴有转移性、耐药性的胃癌研究仍不理想[3]。人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR具有强侵袭能力和耐药能力，是研究人胃癌特性细胞功能的最佳细胞系[4]。HOXD10基因是Ⅰ类同源异形盒基因(Homobox genes)家族中的一种特殊的转录调节因子，具有控制胚胎细胞发育、组织细胞增殖、分化的生理作用，并具有抑癌基因的作用[5]。最新研究[6]表明HOXD10表达水平在乳腺癌、子宫肿瘤、肾癌、胃癌等恶性肿瘤中均表达减少，并在上皮来源恶性肿瘤侵袭转移中发挥作用。但目前关于HOXD10在人胃癌肿瘤发生、发展中发挥作用及对细胞功能的影响尚未见研究。因此，本研究通过将HOXD10基因转染至人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR中，探讨HOXD10基因在胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭中发挥的作用。

1 材料与方法

1.1 试剂和材料人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR购自北京中科院细胞库；RPMI 1640细胞培养基、EDTA胰酶、胎牛血清购自美国Gibico公司；pcDNA3.1-EGFP空载质粒及人源HOXD10基因重组pcDNA3.1-EGFP-HOXD10表达质粒购自中国医学科学院肿瘤研究所及本实验室自行构建；LipofectamineTM2000购自上海Invitrogen公司；Real-time PCR试剂盒购自大连Takara公司；Transwell Permeable Supports购自美国Corning公司；四甲基偶氮唑盐(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、顺铂购自美国Sigma公司；细胞周期检测试剂盒、Annexin-V/PI细胞凋亡检测试剂盒均购自北京鼎国生物公司；兔抗人HOXD10、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、肌动蛋白(β-actin)一抗购自美国Santa Cruz公司；HRP标记山羊抗兔IgG二抗购自北京中杉金桥公司。

1.2 方法

1.2.1 HOXD10基因转染细胞及培养：取对数生长期的人胃癌细胞耐药系SGC7901/VCR细胞以1×105个/ml重悬于含10%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养基中后，种植于6孔细胞板中，放入含5%CO2的细胞培养箱中培养。待细胞贴壁生长融合率达80%～90%时，开始HOXD10基因转染。先将50 μl Opti-MEM稀释混匀4 μg重组pcDNA3.1-EGFP-HOXD10表达质粒及pcDNA3.1-EGFP空载质粒，再用50 μl Opti-MEM将2 μl的LipofectamineTM2000稀释混匀，分别室温孵育5 min后将其混匀再孵育20 min，均匀加入到SGC7901/VCR细胞中共培养转染6 h后更换新的培养基。同时加入1.0 g/L的G418进行阳性筛选，同时用未转染的SGC7901/VCR作对照。当细胞大部分死亡时，换用0.5 g/L的G418筛选。挑取阳性克隆细胞进行扩大培养，分别获得HOXD10基因转染细胞和空载转染细胞。

1.2.2 HOXD10基因转染检测：重组pcDNA3.1-EGFP-HOXD10表达质粒转染SGC7901/VCR细胞并筛选后继续培养48 h，在倒置荧光显微镜下观察各组的细胞形态和绿色荧光表达情况。同时消化离心收集各转染组及转染前后细胞，加入1 ml RNAiso Plus提取液匀浆提取总RNA，并利用反转试剂盒逆转录获得cDNA第一链为模板。根据人HOXD10基因和内参β-actin基因设计引物为HOXD10：上游5′-TTCACCGCTCTTTGTTTG-3′，下游5′-AGTTACCCTGCATTACGA-3′；β-actin：上游5′-CTGGGACGACATGGAGAAA-3′，下游5′-AGGAAGGCTGGAAGAGTGC-3′。利用Bio-Rad公司的IQ5TMReal-time PCR系统进行实时荧光PCR检测pcDNA3.1-EGFP-HOXD10表达质粒转染前后各组SGC7901/VCR细胞中HOXD10基因的表达情况。PCR的反应条件为：95 ℃ 60 s，95 ℃ 10 s，58 ℃ 20 s，70 ℃ 10 s，40个循环。各组重复检测3次，以2-△△Ct方法计算基因相对表达。同时在细胞转染48 h后，消化收集各组细胞，RAPI强裂解液裂解细胞提取细胞中总蛋白，利用BCA试剂盒测定蛋白浓度后，各组上样30 μg总蛋白进行10%的SDS-PAGE电泳2 h后，半干法转PVDF膜，封闭后孵育多克隆兔抗人HOXD10和β-actin一抗，4 ℃过夜后利用TBST洗涤3次后孵育山羊抗兔HRP标记二抗(1∶5 000)2 h，后TBST洗涤后ECL化学发光显影，曝光拍照，用Quantity One软件分析各组细胞中HOXD10蛋白的相对表达量。

1.2.3 MTT方法检测细胞增殖：分别收集HOXD10基因转染前后的SGC7901/VCR细胞，设置未转染对照组、EGFP空载组和HOXD10转染组。利用各组培养基稀释细胞浓度为104个/ml，接种于96孔板中，分别先后培养12、24、36、48、60、72 h后，每孔加入20 μl的MTT溶液(浓度为5 mg/ml)，37 ℃培养箱中继续培养4 h后，吸弃培养基，每孔加入二甲基亚砜(DMSO)150 μl，振荡10 min后，置于酶标仪测定492 nm处各孔的A值。每组设置6个重复孔，各进行3个重复实验。

1.2.4 平板实验检测细胞单克隆形成能力：分别取未转染对照组、EGFP空载组和HOXD10基因转染组SGC7901/VCR细胞，消化后收集用培养基重悬成单细胞悬液。在细胞培养板中分别加入各组含500个细胞的单细胞悬液，在37 ℃含5% CO2培养箱中继续培养7 d，每组设置3个重复，用4%多聚甲醛固定30 min，1%的结晶紫染色30 min后PBS洗涤2次。在显微镜下拍照计数单克隆数，各组单克隆形成率(%)=各组单克隆数/接种细胞总数×100%。

1.2.5 流式细胞术检测细胞周期和顺铂作用下凋亡率：收集各组对数生长期SGC7901/VCR细胞进行同步化后接种于6孔板中，调整每孔细胞浓度为5×104个/ml细胞，置于37 ℃，5% CO2细胞培养箱中培养24 h。各组细胞消化离心后收集弃上清，并用70%预冷乙醇在4 ℃固定12 h以上后，离心弃上清洗去乙醇，用500 μl PBS重悬细胞加入PI和RNaseA(50 μg/ml)孵育后室温避光经流式细胞仪检测各组HUVEC细胞周期并计算各组细胞周期细胞百分比。同时收集各组细胞，参照文献[7]更换含0.6 mg/L顺铂、10%胎牛血清的RPMI 1640新培养基继续24 h，后分别加入5 μl的FITC标记Annexin V及10 μl PI细胞凋亡检测试剂，经流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。

1.2.6 Transwell检测细胞侵袭能力：收集HOXD10基因转染前后各组SGC7901/VCR细胞，用培养基调整细胞浓度为5×105个/ml。分别在各组Transwell板的上室膜上涂抹均匀的1 mg/ml的Matrigel胶50 μl，置于37 ℃培养箱中30 min使形成基底膜结构后，将各组细胞各取100 μl加入到Transwell上室中，在下室中加入含20%胎牛血清的1640培养基600 μl，每组设置3个重复，置于37 ℃、5% CO2培养箱中继续培养48 h。培养好后用4%多聚甲醛固定小室滤膜，并擦除上表面细胞，用结晶紫染色10 min后PBS洗涤2遍，在显微镜下观察各组细胞滤膜上穿过膜侵袭的细胞，拍照并计数各组SGC7901/VCR细胞侵袭率。侵袭率(%)=各组平均侵袭细胞数/未处理组侵袭细胞数×100%。

1.2.7 Western blotting检测细胞MMP-2蛋白表达情况：HOXD10基因转染SGC7901/VCR细胞后，收集正常未转染组、EGFP空载组、HOXD10基因转染组细胞，PBS洗涤1次后按照相同的方法提取各组细胞中总蛋白并测定蛋白浓度。每组上样30 μg总蛋白后进行10%的SDS-PAGE电泳2 h，半干法转膜封闭后分别孵育细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、肌动蛋白(β-actin)抗体(1∶1 000)4 ℃过夜，TBST洗涤后二抗(1∶5 000)孵育2 h，ECL显影，曝光拍照。用Quantity One软件分析目的条带相对吸光值，并用内参β-actin进行校正。

2 结果

2.1 HOXD10基因转染SGC7901/VCR细胞后表达情况通过将构建的重组pcDNA3.1-EGFP-HOXD10表达质粒用脂质体可以顺利转染到SGC7901/VCR细胞中，在荧光显微镜下观察细胞形态和发荧光变化。未转染对照组中细胞结构完整不发荧光，而转染pcDNA3.1-EGFP空载组和pcDNA3.1-EGFP-HOXD10基因转染组中，大部分细胞均发出绿色荧光，说明SGC7901/VCR细胞中有绿色荧光蛋白EGFP表达，重组质粒转染成功(见图1)。为进一步检测HOXD10基因转染SGC7901/VCR细胞后的表达情况，分别利用Real-time PCR和Western blotting方法检测HOXD10基因和蛋白的表达情况。Real-time PCR检测发现，与未转染组相比，EGFP空载组中HOXD10基因表达未见明显变化，而HOXD10基因转染组中HOXD10基因表达显著提高约12倍(P<0.05)；Western blotting检测发现，与未转染组相比，EGFP空载组中HOXD10蛋白表达无明显变化，而HOXD10基因转染组中HOXD10蛋白表达上升约5倍(P<0.05,见图2)。

2.2 HOXD10基因转染对SGC7901/VCR细胞增殖的影响利用MTT方法检测HOXD10基因转染SGC7901/VCR细胞后不同时间点的生长曲线以判断其对细胞增殖的影响。与未转染对照组相比，EGFP空载组中细胞在不同时间点的吸光值变化不明显(P>0.05)；而HOXD10基因转染组中细胞在48、60、72 h时的吸光值(分别为0.51±0.03、0.59±0.04、0.63±0.04)均显著低于未转染对照组(分别为0.65±0.04、0.77±0.03、0.88±0.04)，差异有统计学意义(P<0.05，见图3)。

图1 HOXD10基因转染SGC7901/VCR细胞后形态及荧光变化(20×) A:未转染对照组；B:EGFP空载组；C:HOXD10基因转染组

注：与未转染对照组相比，*P<0.05。

注：与未转染对照组相比，*P<0.05。

2.3 HOXD10基因转染对SGC7901/VCR细胞单克隆形成的影响利用平板实验检测HOXD10基因转染对SGC7901/VCR细胞单克隆形成的影响。未转染对照组和EGFP空载组中细胞单克隆形成数差别不大，而HOXD10基因转染组中细胞单克隆形成数显著降低。经统计发现，未转染对照组、EGFP空载组中细胞单克隆形成率分别为(45.50±4.50)%、(42.00±5.50)%，相比未见明显变化(P>0.05)；而HOXD10基因转染组中细胞单克隆形成率为(19.50±4.60)%，显著低于未转染对照组，差异有统计学意义(P<0.05,见图4)。

2.4 HOXD10基因转染对SGC7901/VCR细胞周期的影响流式细胞术检测HOXD10基因转染后对SGC7901/VCR细胞周期的影响。与未转染对照组细胞中G0/G1期(55.65±3.10)%和S+G2/M期(31.24±2.53)%相比，HOXD10基因转染组中细胞G0/G1期百分比显著升高(P<0.05)；而S+G2/M期百分比显著下降(P<0.05)。而EGFP空载组中细胞G0/G1期和S+G2/M期百分比值与未转染对照组相比，差异无统计学意义(P>0.05,见图5)。

注：与未转染对照组相比，*P<0.05。

注：与未转染对照组相比，*P<0.05。

2.5 HOXD10基因转染对顺铂作用下SGC7901/VCR细胞凋亡的影响利用流式细胞术检测HOXD10基因转染对顺铂作用下耐药SGC7901/VCR细胞凋亡的影响。在0.6 mg/L顺铂作用下，未转染对照组和EGFP空载组中SGC7901/VCR细胞凋亡较少，验证了SGC7901/VCR细胞的耐药性，而HOXD10基因转染组中细胞凋亡则显著增加。与未转染对照组细胞凋亡率(15.50±3.25)%相比，EGFP空载组细胞凋亡率变化不显著，为(18.35±4.55)%(P>0.05)，而HOXD10基因转染组中细胞凋亡率显著增加，为(46.48±4.64)%(P<0.05，见图6)。

注：与未转染对照组相比，*P<0.05。

2.6 HOXD10基因转染对SGC7901/VCR细胞侵袭的影响利用Transwell实验可以检测HOXD10基因转染对SGC7901/VCR细胞侵袭的影响。与未转染对照组相比，EGFP空载组中细胞的侵袭数未见明显变化，而HOXD10基因转染组中细胞侵袭数显著减少。与未转染对照组侵袭率(99.55±1.25)%相比，HOXD10基因转染组中细胞侵袭率显著下降至(38.46±4.65)%(P<0.05，见图7)。

注：与未转染对照组相比，*P<0.05。

2.7 HOXD10基因转染对SGC7901/VCR细胞中MMP-2表达的影响利用Western blotting方法检测HOXD10基因转染对SGC7901/VCR细胞中肿瘤侵袭性相关因子MMP-2蛋白的表达。与未转染对照组(0.82±0.04)相比，EGFP空载组中MMP-2蛋白表达(0.78±0.04)未见明显变化，而HOXD10基因转染组中MMP-2蛋白表达则显著降低，为0.26±0.05(P<0.05，见图8)。

注：与未转染对照组相比，*P<0.05。

3 讨论

HOXD10是人类同源盒基因(Homeobox，HOX)家族中的一员，HOX基因是一类特殊的转录调节因子，其编码蛋白能够与特异性DNA结合后调节胚胎发育和细胞生长分化，而近来研究表明其异常表达与肿瘤的发生、发展有关[7]。目前，在多种肿瘤中均可检测到HOX家族相关基因的异常表达如结肠癌、肾癌、乳腺癌、骨肉癌等[8]。HOX家族基因与乳腺癌等多种恶性肿瘤的预后及发展密切相关，参与其细胞增殖、分化、凋亡信号通路等[9]。HOXD10作为同源盒家族中一种，与肿瘤的关系研究尚处于初步阶段，在对乳腺癌、食管癌、人脑星形细胞瘤等肿瘤研究中发现HOXD10蛋白表达水平低于其在正常组织中水平，其可能作为抑癌基因表达[10]。同时已有研究表明不同肿瘤细胞中HOXD10表达水平与其分化程度和侵袭转移能力相关[11]。任辉等[12]研究也发现HOXD10在正常胃黏膜组织中呈强阳性表达，而在淋巴结转移阳性的胃癌组织中表达极弱或不表达。胃癌作为消化道中最为常见的恶性肿瘤，在我国恶性肿瘤发病率中占首位，尽管目前对胃癌研究已有较大进展，但因其强侵袭能力和转移能力，仍未有较满意的诊断和治疗途径[13]。而胃癌的发生发展涉及到多因素包括抑癌基因的表达异常、细胞增殖、细胞周期的调控异常、基因启动子的转录异常等方面[14]。HOXD10基因作为可能的抑癌基因，与胃癌发生发展的关系，特别是对胃癌的生物学行为影响尚未见研究，因此，本研究利用真核质粒转染的方法，将HOXD10基因转染至人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR中，使HOXD10基因高表达，进而检测其对SGC7901/VCR细胞增殖、凋亡、侵袭等生物功能的影响。

本研究中将HOXD10基因转染至SGC7901/VCR细胞后，利用Real-time PCR和Western blotting方法分别检测HOXD10转染前后基因和蛋白的表达变化，结果表明转染后HOXD10基因和蛋白表达水平分别显著上升约12倍和5倍，说明HOXD10基因在正常人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR中表达较低，而通过基因转染后能够在SGC7901/VCR中高表达。利用MTT方法检测HOXD10基因转染后在不同时间点对SGC7901/VCR细胞生长的抑制效果，结果发现与未转染组和EGFP空载组相比，HOXD10基因转染组细胞生长较缓慢且在48～72 h时间段生长曲线显著降低。平板单克隆实验能够检测单个细胞的增殖能力，本研究中HOXD10基因转染SGC7901/VCR细胞后，细胞单克隆形成率也显著下降，充分说明HOXD10基因过表达能够抑制人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR细胞增殖。

细胞的增殖水平及能力主要受到细胞周期时相的调节，细胞周期是细胞活动的基本过程，包括DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)、DNA合成后期(G2期)和细胞分裂暂停期(G0期)[15]。本研究利用流式细胞术检测HOXD10基因转染至SGC7901/VCR细胞后发现细胞周期能够阻滞于G0/G1期，而反映细胞增殖状态的S+G2/M期百分率也显著下降，与上述检测发现HOXD10基因转染后过表达抑制SGC7901/VCR细胞增殖结果是一致的。HOXD10作为转录调控因子，能够调节细胞发育分化，因此，HOXD10基因转染后抑制SGC7901/VCR细胞生长和增殖的机制可能是HOXD10过表达调控相关转录信号影响细胞G0期向G1期细胞分化的能力。同时利用流式细胞术检测HOXD10基因转染后在顺铂作用下的细胞凋亡情况。人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR对一般化疗药物具有耐药性[16]，检测也发现在0.6 mg/L顺铂作用下,未转染对照组和EGFP空载组细胞凋亡率均较低，而当HOXD10基因转染后SGC7901/VCR细胞凋亡率显著上升，说明HOXD10过表达能够促进人胃癌耐药SGC7901/VCR对化疗药物的敏感性，进而诱导细胞凋亡。

人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR因具有强耐药性，比一般胃癌SGC7901细胞具有更强的侵袭和迁移能力[17]。本研究中利用Transwell方法检测HOXD10基因转染后对SGC7901/VCR细胞侵袭能力的影响，结果发现HOXD10基因转染组中细胞的侵袭率显著下降，说明HOXD10高表达能够抑制SGC7901/VCR细胞的侵袭能力。为了揭示HOXD10高表达抑制SGC7901/VCR细胞侵袭的机制，利用Western blotting检测了HOXD10基因转染前后细胞中侵袭性相关因子MMP-2的表达情况。在肿瘤细胞侵袭转移中，基质金属蛋白酶(MMPs)发挥关键性作用，MMPs能够降解细胞基质外各种蛋白成分，从而破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障，促进肿瘤细胞向周围组织的侵袭迁移[18]。而在MMPs家族中，MMP-2被认为是肿瘤细胞中影响侵袭性生长的最佳预测因子[19]。本研究中Western blotting检测发现HOXD10基因转染SGC7901/VCR后细胞侵袭能力下降同时MMP-2蛋白表达水平也随之显著下降，说明HOXD10高表达抑制SGC7901/VCR细胞侵袭能力可能通过抑制MMP-2蛋白表达发挥作用。

综上所述，本研究利用HOXD10基因转染人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR，诱导HOXD10高表达，发现能够显著抑制SGC7901/VCR的细胞增殖、诱导细胞凋亡，并通过抑制MMP-2蛋白表达降低细胞侵袭能力。通过本研究证明HOXD10在胃癌发生、发展的病理机制中发挥重要作用，并可为胃癌的治疗和诊断提供理论依据和新方向。

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(责任编辑：马 军)

Influence of HOXD10 gene transfection on cell proliferate, apoptosis and invasion of human gastric cancer resistance SGC7901/VCR

CHEN Ling1, CHEN Kai2, YANG Xigui1, JIANG Chao1, YANG Xiangshan3

1. Department of the Third Internal Medicine, Affiliated Hospital of Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 250031; 2. Department of Thoracic Surgery, the Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University; 3. Department of Pathology, Affiliated Hospital of Shandong Academy of Medical Sciences, China

Objective To investigate the expression of HOXD10 gene after transfecting human gastric cancer cell line SGC7901/VCR and its effect on cell proliferation, apoptosis and invasion. Methods HOXD10 expression plasmid (pcDNA3.1-EGFP-HOXD10) was trasfected into SGC7901/VCR, then HOXD10 gene and protein expression effect were tested by Real-time PCR and Western blotting. The effect of HOXD10 gene transfection on cell proliferation, monoclonal formation, cell cycle, apoptosis treated with cisplatin, cell incasion of the SGC7901/VCR were determined by MTT assay, tablet monoclonal experiments, flow cytometry and Transwell assay, respectively. And the expression of tumor invasion related factor matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) was detected by Western blotting after HOXD10 gene transfected.Results The levels of HOXD10 gene and protein expression were significantly increased after HOXD10 gene transfected into SGC7901/VCR cell (P<0.05); which could inhibit the cell proliferation, monoclonal formation, cell cycle of SGC7901/VCR, and enhance the apoptosis rate after treated with cisplatin (P<0.05); and inhibit the cell invasion and MMP-2 protein expression (P<0.05).Conclusion HOXD10 could be highly expressed after the HOXD10 gene transfected into human gastric cancer resistant cell line SGC7901/VCR, inhibit the cell proliferation, monoclonal formation, cell cycle and invasion ability and improve the rate of apoptosis in casplatin, which inbibit the invasion of SGC7901/VCR cells related to the decrease of MMP-2 expression.

HOXD10; Gene transfection; Cell proliferation; Apoptosis; Cell invasion; MMP-2

陈玲，主治医师，研究方向：胃癌基础医学及临床治疗。E-mail：chenling_712@163.com

杨香山，副主任医师，研究方向：恶性肿瘤侵袭及转移分子机制研究。E-mail：yangxsh@126.com

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.01.003

R735.2

A

1006-5709(2016)01-0009-07

2015-06-10