不同稀释液对禽流感H5血清抗体检测结果的影响

2016-06-03殷红梅

中国畜牧兽医文摘 2016年4期

关键词：血凝稀释液生理盐水

殷红梅

（广元市农业局，四川广元 628000）

不同稀释液对禽流感H5血清抗体检测结果的影响

殷红梅

（广元市农业局，四川广元 628000）

［摘要］本试验通过血液凝集抑制试验（HA）和血液凝集试验（HI）试验方法检测禽流感H5抗体，分别使用PBS液（0.01mol/L，pH7.2）和生理盐水作为稀释液，检测待测3份未知血清样品，1份已知阳性血清和1份已知阴性血清，每份样品做3个重复。经χ2分析发现，PBS液组和生理盐水组检测结果差异性不显著（P＞0.05）。试验结果证明，在日常监测中可以使用生理盐水替代PBS液作为稀释液通过血凝及血凝抑制试验检测禽流感H5血清抗体。

［关键词］禽流感血凝及血凝抑制PBS液生理盐水

当前畜牧业特别是养禽业快速发展，活禽及禽产品交易频繁，加剧了禽流感发生风险，2015年农业部公布高致病性禽流感疫情10起，2016年公布2起，涵盖家禽和野生鸟类，近期四川省成都市青羊区发生1起人感染禽流感H5N1病例。国家和地方加强禽流感防控工作力度，在强化免疫的同时，也加强了禽流感抗原抗体监测，监测频次和数量逐年增加。按照国标，禽流感抗体血凝及血凝抑制方法的缓冲液为PBS溶液。PBS溶液配备花的时间多，劳动量大，不利于大规模检测。在不影响检测结果的前提下，能将缓冲液替换为生理盐水，可以大大减轻劳动量。

1　材料及方法

1.1试剂

PBS液（0.01mol/L，pH7.2）、阿氏液和生理盐水（8.5g/ L）。阿氏液的配制方法为：葡萄糖20.5g，柠檬酸钠8g，柠檬酸0.55g，NaCl4.2g，加水至1000ml。

1.2待检血清和抗原

禽流感H5抗原及阳性血清来源于哈维科生物；鸡血清由广元市昭化区兽医实验室提供。

1.3检测方法

PBS组按GB 19442-2004，生理盐水组将GB 19442-2004所有使用的PBS液更换为生理盐水。

2　结果

2.1血凝试验结果

使用PBS液和生理盐水作为稀释液，均有3个重复一个血凝单位为29倍，1个重复为28倍，两个处理均按29倍作为一个血凝单位。

表1　不同稀释液对禽流感H5血凝试验的检测结果

2.2血凝抑制结果

经χ2检验，两组试验对血凝抑制结果差异性不显著，P〉0.05。

3　讨论

3.1影响HA和HI试验的因素

影响禽流感血凝及血凝抑制试验结果的因素有血清样品质量、器材选用、操作水平、稀释液、结果判定。胶冻样血清样品可能导致样品量不足或出现非特异性凝集；溶血样品影响结果判定。微量反应板对HA和HI试验反应时间和反应结果具体一定影响，巩薇等认为兔出血症病毒HA和HI试验使用90℃V型板和一次性U型板［1］，禽流感防治技术规范（GB 19442-2004）和新城疫诊断技术规范（GB/T 16550-2008）要求HA和HI试验使用90℃V型板。操作水平包括移液器使用、抗原配制以及红细胞洗涤等因素均会影响检测结果［2］。在环境温度20℃～25℃，经过15～30min即可读出抗原效价和血清抗体滴度。当温度过低，出现结果慢；环境温度过高，超过30℃时，试验结果出现快，一旦时间过长，结果就会消失，使整板无凝集现象。判读试验结果时，将微量反应板倾斜45℃，孔底沉淀的红细胞流动呈泪珠样流淌，边缘无凝集颗粒者为凝集完全抑制；如果泪珠样流淌线较细，可能是反应时间不够，需静置一段时间再判读。

表2　不同稀释液对H5血凝抑制试验的检测结果

3.2不同稀释液对HA和HI试验的影响

禽流感防治技术规范（GB 19442-2004）中HA和HI试验稀释液为PBS液（0.01mol/L，PH7.2），新城疫诊断技术（GB/T 16550-2008）中HA和HI试验稀释液为生理盐水。孙淑清等认为用PBS液（pH=7.2）测定的阳性血清抗体滴度比用生理盐水高出一孔。雷莉辉认为pH=7.0时，红细胞沉淀最充分，图形最清晰。本试验在B样品出现PBS液血凝抑制结果比生理盐水高一孔，其他样品结果基本一致，总体结果经χ2分析差异性不显著。