桔百颗粒(乐康宁)对雏鸡感染鸡传染性支气管炎的防治效果
2016-05-30何怡宁李仲林唐宁王海勇曹艳杰范文胜朱雷吴阳开韦平韦天超磨美兰
何怡宁 李仲林 唐宁 王海勇 曹艳杰 范文胜 朱雷 吴阳开 韦平 韦天超 磨美兰
摘要:【目的】评价桔百颗粒(乐康宁)对鸡传染性支气管炎(IB)的临床防治效果,为利用中药防治IB提供新思路。【方法】将130羽1日龄非免疫雏鸡随机分为桔百颗粒预防组、治疗组、药物对照组、免疫组、模型对照组和健康对照组,免疫组30羽,其他组均为20羽。除健康对照组外,其他组均于15日龄时滴鼻点眼感染鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41毒株,预防组在感染前5 d(10日龄)饮水给药;治疗组和药物对照组均在发病超过半数时给药治疗;免疫组则在7 日龄免疫H120疫苗(免疫后一部分给药,另一部分不给药)。统计感染后各组雏鸡的发病率、保护率、治愈率及呼吸道症状评分,同时统计感染后其体重增长及免疫器官指数,并测定血清IBV特异性抗体。【结果】感染IBV后第8 d(23日龄)统计发现,预防组的保护率为50.00%,免疫不给药组的保护率为45.00%;治疗组的治愈率为66.67%,药物对照组为58.82%;免疫不给药组的呼吸道症状评分最低,预防组和治疗组次之。停药后第12 d(36日龄),治疗组雏鸡的脾脏指数显著高于其他组(P<0.05,下同);感染IBV后第14 d(29日龄),治疗组雏鸡的IBV抗體水平达峰值,感染IBV后第21 d(36日龄)仍维持在较高水平,免疫并给药组的抗体水平显著高于免疫不给药组。【结论】桔百颗粒有效降低IB发病率及治愈患病雏鸡,是通过促进脾脏等免疫器官发育,进而促使机体抗体生成、延长抗体维持时间、增强机体免疫力来实现,尤其对于呼吸型IB具有良好的临床预防和治疗效果。
关键词: 桔百颗粒(乐康宁);鸡传染性支气管炎;防治效果;免疫应答
中图分类号: S858.31 文献标志码:A 文章编号:2095-1191(2016)09-1602-06
Abstract:【Objective】The clinical prevention and treatment effects of Jiebai granule(trade name Lekangning) on avian infectious bronchitis(IB) were evaluated, in order to provide a new idea for using traditional Chinese medicine to prevent and cure IB. 【Method】A total of 130 1-day-old non-immunized chicks were randomly divided into 6 group(Jiebai granule prevention group, treatment group, drug control group, vaccine group, model control group and healthy control group). Thirty chicks were in vaccine group and twenty chicks in other groups. Except for healthy control group, the chicks in other groups were challenged oculonasally with avian infectious bronchitis virus(IBV) M41 strain at 15-day old, and Jiebai granule was added into drinking water before 5 days(at 10-day old) of challenge in prevention group. In Jiebai granule treatment group and Yinhuang oral solution treatment control group, Jiebai granule and Yinhuang oral solution were added into drinking water, respectively when more than half of the chicks were sick. In vaccine group, chicks were vaccinated with H120 vaccine at 7-day old, and partial vaccinated chicks drank water with Jiebai granule, other vaccinated chicks were treated without Jiebai granule. After IBV infection, the incidence, protection rate, cure rate and respiratory symptom scores of each group were counted. The weight gain and immune organ index, the levels of IBV antibodies in serum were analyzed. 【Result】At 8 d after being infected with IBV(at 23-day old), the protection rate was 50.00% in prevention group and 45.00% in vaccine without drug group. The cure rates were 66.67%, and 58.82% in treatment group and treatment without drug group, respectively. The clinical symptoms score was the lowest in vaccine without drug group, followed by prevention and treatment groups. The spleen in treatment group were significantly higher than those in other groups at the 12 d after drug withdrawal(at 36-day old)(P<0.05, the same below). The antibody titers of prevention and treatment group were reach the peak at the 14 d post infection(dpi)(at 29-day old), and still kept at high level at 21 dpi(at 36-day old). The antibody titer of the vaccine with drug group was significantly higher than that of vaccine without drug group. 【Conclusion】The Jiebai granule can reduce the incidence of IB and cure the sick chickens. At the same time, Jiebai granule can enhance immunity by promoting the development of spleen and other immune organs, promoting antibody production and increasing the maintenance time of antibody. The Jiebai granule has a better clinical prevention and treatment effect on IB.
Key words: Jiebai granule(Lekangning); avian infectious bronchitis; prevention and treatment effect; immune response
0 引言
【研究意义】鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是世界动物卫生组织(OIE)及我国规定的家禽B类传染病之一,严重危害现代养禽业的健康发展。IB是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种鸡的急性、高度接触性传染病,可感染任何日龄的鸡群,主要临床症状表现为喷嚏、咳嗽、气管啰音、拉白色水样稀便等(Cavanagh,2007)。雏鸡感染后生长缓慢、饲料报酬率低,产蛋鸡感染后会出现产蛋下降、产畸形蛋、软壳蛋等症状。目前,针对IB的防控主要通过接种疫苗,但IBV基因组极易发生变异和重组,致使其产生存在多种基因型和血清型,不同血清型间交叉保护效果差,导致免疫失败时常发生(Mo et al.,2013;张丽华等,2016)。中药是我国医学界的瑰宝,越来越多研究证实许多中药成分具有抑菌、抗病毒和增强机体免疫力的作用,且残留量小、不易产生耐药性(蒋春茂等,2015),若能将中药制剂推广应用到家禽养殖业中,势必对有效防控IB等禽病及促进家禽养殖业健康持续发展具有重要意义。【前人研究进展】至今,我国兽医学工作者已在中兽药防治IBV方面开展了大量研究,并取得了长足进展。刘玉芹等(2009)研究发现,单味中药黄芩、贯众、板蓝根、鱼腥草及复方中药均能明显抑制IBV繁殖,尤其是复方中药应用于人工感染试验时具有良好的预防和治疗作用。刘兴金等(2009)选用板蓝根、黄芩、山豆根、甘草、芩黄、桔梗等一系列抗炎、抗病毒药物组合成中药方剂芩黄颗粒,并将其用于进行IB临床预防试验,结果发现中、高剂量的岑黄颗粒对IB具有良好的预防效果。另有研究证实,双黄连可溶性粉、柴黄颗粒、黄连清瘟散及用黄连、木香、苍术、麻黄、苦杏仁、甘草、石膏、黄芩、板蓝根中药组成的“传支散”等中药制剂对防治IBV均表现出良好的治疗效果(周翠珍等,2008;崔小七等,2013;王海花等,2013;东彦新等,2014)。此外,胡国明等(2014a, 2014b)研究发现,复方天门冬多糖注射液是一种有效的免疫增强剂,能够明显增加鸡的免疫器官指数,促进其生长发育,将复方天门冬多糖注射液用于治疗人工感染IB患病鸡,也能取得显著的临床治疗效果。【本研究切入点】桔百颗粒(商品名:乐康宁)的主要成分为桔梗、黄芩、连翘、金银花、陈皮、百部、远志、桑白皮、甘草等纯中药提取物,富含黄芩苷、绿原酸、金丝桃素、连翘酯苷、连翘酚、桔梗皂苷、生物碱等抗病毒活性成分,具有清热解毒、止咳平喘、抑菌抗病毒之功效,但目前有关桔百颗粒治疗禽病的研究鲜见报道。【拟解决的关键问题】通过桔百颗粒对人工感染呼吸型IB雏鸡的预治试验,评价其对IBV的临床防治效果,以期为利用中药防治IB提供新思路。
1 材料与方法
1. 1 试验材料
桔百颗粒(乐康宁)由广东容大生物股份有限公司生产提供,对照药物银黄口服液由山东谊源动物药业有限公司生产提供;IBV M41标准毒株(AV1511)购自中国兽药监察所,IBV耐热保护剂活疫苗(H120株)购自广东大华农动物保健品股份有限公司;1日龄非免疫雏鸡(雌雄各半)购自广西南宁市华桂源种禽有限公司;IBV抗体检测试剂盒(IDEXX)购自北京爱得士元亨生物技术有限公司。
1. 2 最佳攻毒剂量确定试验
1日龄健康非免疫雏鸡20羽,饲养至15日龄,随机分成4组,每组5羽,经点眼滴鼻分别接种106 EID50的IBV M41尿囊液0.1、0.2、0.3和0.4 mL/羽。以半数发病组攻毒剂量的2倍剂量为试验攻毒剂量。
1. 3 试验动物分组及给药处理
挑选1日龄健康非免疫雛鸡130羽,饲养至7日龄时随机选取30羽作免疫组,经点眼滴鼻接种H120疫苗,其中免疫不给药组20羽、免疫并给药组10羽[免疫后第1 d(8日龄)饮水给药];饲养至10日龄时随机选取20羽作预防组,饮水给药预防;饲养至15日龄时将剩余80羽随机分为4组,每组20羽,除健康对照组外,其余各组均经点眼滴鼻接种最佳攻毒剂量的IBV M41病毒液,感染后当半数以上雏鸡表现出明显临床症状时,治疗组和药物对照组开始饮水给药治疗。具体分组及处理方式见表1。
1. 4 临床观察及治疗效果统计
IBV感染试验期间,每天观察并记录试验鸡的临床表现及数量,包括精神、食欲、呼吸道症状、是否咳嗽、打喷嚏、频繁甩头、张口呼吸、气管啰音及口腔流黏液,并记录饮水量等,统计各组的发病率、保护率及治愈率。
发病率(%)=各组发病鸡总数/各组试验鸡总数×100
保护率(%)=各组未发病鸡数/各组试验鸡总数×100
治/自愈率:在治疗组停药后,即攻毒后第10 d统计各组鸡群发病情况及发病数量,病鸡在给药后的精神状态、食欲恢复正常,不再出现临床症状者均判定为治/自愈。
治/自愈率(%)=治(自)愈病鸡数/该组发病鸡总数×100
呼吸道症状评分:于感染后第3、5、8和10 d观察鸡只的临床症状并计分,计算每组的呼吸道症状百分比。无临床症状记为0分,出现喷嚏咳嗽记为1分,喷嚏咳嗽伴有啰音记为2分,张口呼吸、呼吸困难记为3分,最终统计呼吸道症状评分。
症状评分百分比(%)=每组症状评分总和/每组中最大可能的症状评分总和×100
1. 5 体重增长及免疫器官指数测定
在停药1 d(25日龄)后各组随机剖杀5羽雏鸡,停药5 d(29日龄)后各组剖杀10羽雏鸡,停药12 d(36日龄)后剖杀其余雏鸡,观察大体病变后采集试验鸡的胸腺、脾脏和法氏囊并称重,用于计算各组每羽鸡对应的免疫器官指数。
免疫器官指数=免疫器官重量/鸡体重量
1. 6 血清IBV特异性抗体测定
感染后7、14、21日龄每组分别随机抽取5羽雏鸡,经翅下静脉采血分离血清,参照IBV抗体检测试剂盒(IDEXX)使用说明进行检测。
1. 7 统计分析
采用SPSS 17.0分析处理数据,其中,计数资料进行卡方检验、计量资料进行方差分析。
2 结果与分析
2. 1 IBV最佳攻毒剂量测定结果
感染IBV后第1 d(16日龄)开始出现精神沉郁、羽毛松乱、甩头现象,第2 d(17日龄)出现喷嚏和咳嗽症状,第4 d(19日龄)开始出现流眼泪、喘咳、严重的张口呼吸和气管啰音等症状,第8 d(23日龄)为发病高峰期,剖检病鸡发现其气管、支气管内有黏液,气管充血;第14 d(29日龄)临床症状基本消失。接种0.1 mL的106 EID50 IBV M41病毒液后雏鸡发病率为60%~80%,表现出明显的呼吸道症状,接种0.3~0.4 mL的鸡群发病率为100%,表现出严重的呼吸道症状,故确定106 EID50 IBV M41病毒液的最佳攻毒剂量为0.2 mL。
2. 2 IBV感染后的发病率及治愈率统计结果
感染IBV后第3 d(18日龄)雏鸡发病均超过半数,此时对治疗组和药物对照组进行给药治疗。感染IBV后第8 d(23日龄)各组发病率达到高峰,其中模型对照组发病率达100.00%,临床症状明显;预防组和免疫不给药组的发病率分别为50.00%和55.00%,保护率分别为50.00%和45.00%。给药7 d(25日龄)后,治疗组和药物对照组雏鸡症状逐渐减轻,治疗组治愈率为66.67%(表2),略高于药物对照组(58.82%),此时模型对照组仍表现出明显的临床症状。
2. 3 呼吸道症状评分结果
感染IBV后第3、5、8和10 d分别观察并统计各组雏鸡呼吸症状评分(健康对照组雏鸡的呼吸道症状评分均为0,未参与制图),结果(图1)发现以免疫不给药组雏鸡的呼吸道症状评分最低,且呈下降趋势;预防组雏鸡的呼吸道症状评分次之,其症状评分均低于模型对照组,且在感染IBV后第5 d(20日齡)立即下降;治疗组雏鸡的呼吸道症状评分略高于预防组,但低于模型对照组;药物对照组雏鸡的呼吸症状评分在感染IBV后第5 d高于模型对照组,随后立即下降,至第10 d(25日龄)有所回升。可见,采用疫苗免疫和桔百颗粒给药预防及治疗均能在一定程度保护雏鸡遭受严重的呼吸道症状。
2. 4 桔百颗粒对雏鸡免疫器官指数及体重增长的影响
由表3可以看出,感染IBV后预防组和免疫不给药组雏鸡的相对增重较稳定,且高于健康对照组,治疗组与健康对照组接近,药物对照组和模型对照组则低于健康对照组。在免疫器官指数方面,停药后第1 d(25日龄)各组差异不显著(P>0.05,下同),至停药后第5 d(29日龄)各IBV感染组的胸腺指数和法氏囊指数均显著高于健康对照组(P<0.05,下同),此时治疗组的脾脏指数显著高于其他组;停药后第12 d(36日龄)各组间的胸腺指数差异不显著,治疗组的脾脏指数显著高于其他组,除免疫不给药组外,各IBV感染组的法氏囊指数均显著高于健康对照组。感染IBV后雏鸡的胸腺指数和法氏囊指数明显升高,表明机体的胸腺和法氏囊等免疫器官发生活化以清除病毒感染,而感染后给予桔百颗粒治疗能明显提高脾脏指数,说明桔百颗粒治疗能有效促进脾脏免疫器官发育,增强机体免疫机能以抵抗IBV感染。
2. 5 血清特异性抗体水平监测结果
由图2可知,感染IBV(15日龄)前雏鸡血清中存在一定母源抗体,但抗体滴度为阴性(log10小于2.50)。感染IBV后第14 d(29日龄)健康对照组雏鸡的母源抗体消失,除预防组和免疫不给药组外其他攻毒感染组雏鸡的抗体水平均上升到峰值,且免疫不给药组此时显著低于其他感染组。感染IBV后第21 d(36日龄)预防组和免疫不给药组雏鸡的抗体水平上升到峰值,药物对照组和模型对照组抗体水平则明显下降,治疗组抗体滴度仍维持在较高水平,且高于其他感染组,表明采用桔百颗粒预防或治疗能有效将IBV感染后的特异性抗体维持在较高水平。经疫苗免疫后,免疫不给药组与免疫并给药组在感染IBV后第7 d的抗体滴度差异不明显,但显著高于健康对照组;至第14 d免疫并给药组抗体滴度明显高于免疫不给药组,二者间存在显著差异,表明经疫苗免疫后再进行桔百颗粒治疗能有效促进机体抗体生成。
3 讨论
IBV广泛分布于全球,严重危害养禽业的健康发展,而且因其血清型众多并不断发生变异和重组,即使采取疫苗进行预防也难以得到有效防控(吴翠兰等,2015)。IBV主要侵害雏鸡的气管,通过呼吸道感染,尤其是呼吸型IBV如Mass和Conn毒株引起咳嗽、喷嚏、气管啰音等呼吸道症状,造成气管出现大量黏液及充血等(磨美兰等,2006)。依据中医理论,IBV感染为邪疫由表入里,肺主肃降、通调水道之功能受阻,肺气上逆,水湿不得及时下泻,郁而化痰,就会出现气喘、痰鸣,邪在肺则应清热解毒(亓丽红等,2013)。桔百颗粒含有多味清热解毒药如黄芩、连翘、金银花及桑白皮等,止咳化痰平喘药如桔梗、百部及远志等,还有理气健脾药陈皮和补虚药甘草,组方后具有良好的清热解毒、宣肺止咳平喘功效。黄芩和金银花具有抑制IBV引起细胞病变的作用,而连翘含有的连翘酯苷能诱生IFN-α达到抗病毒的效果(白挨泉等,2003;张羽璐等,2011)。本研究结果表明,将桔百颗粒经饮水给药进行IB预防,其临床保护率达50.00%,高于疫苗对照组的45.00%;治疗组的自/治愈率高达66.67%,明显高于药物对照组。此外,对感染组进行呼吸道症状评分,详细判断感染鸡的病情,结果发现桔百颗粒预防组和治疗组雏鸡的呼吸道症状评分均低于药物对照组和模型对照组,但略高于免疫不给药组,表明桔百颗粒对IB具有良好的临床预防和治疗效果。
由于单一的IBV感染很少出现死亡,若仅凭临床症状咳嗽、打喷嚏、张口呼吸等作为标准,难以准确判断发病率及发病严重程度,而以此来确定防治效果亦不够科学(亓丽红等,2013)。本研究通过统计IBV感染后各组的免疫器官指数,结果发现停药后第5 d(29日龄)至停药后第12 d(36日龄)治疗组的脾脏指数显著高于其他感染组及健康对照组,表明使用桔百颗粒给药治疗能够显著增加脾脏指数,促进感染鸡脾脏等免疫器官发育,增强机体免疫机能以抵抗IBV感染。这与胡国明等(2014b)以复方天门冬多糖注射液临床给药治疗IB能有效提高免疫器官指数及增强鸡免疫功能的结果一致。此外,本研究检测了IBV感染后各组血清特异性抗体水平,发现治疗组的抗体水平在感染IBV后第14 d(29日龄)达峰值,至第21 d(36日龄)仍维持在较高水平,而免疫并给药组在感染IBV后第14 d的抗体水平显著高于免疫不给药组,说明以桔百颗粒预防或治疗IBV感染能有效促进机体抗体生成,并维持在较高水平,与崔小七等(2013)、杨楷等(2014)的研究结果一致。
4 结论
桔百颗粒有效降低IB发病率及治愈患病雏鸡,是通过促进脾脏等免疫器官发育,进而促使机体抗体生成、延长抗体维持时间、增强机体免疫力来实现,尤其对于呼吸型IB具有良好的临床预防和治疗效果。
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(责任编辑 兰宗宝)